Способ определения индивидуальной чувствительности к бета- адреноблокаторам у больных артериальными гипертензиями

 

Изобретение относится к медицине, преимущественно к кардиологии, и найдет применение в выборе тактики лечения и вторичной профилактике артериальных гипертензий Целью изобретения является повышение точности и информативности к назначению бета-эдреноблокирующих препаратов у больных артериальными гипертензиями Для этого в лимфоцитах периферической крови определяют концентрацию Сахаров, цАМФ, суммарную гликогенолитическую активность до и после введения специфического бета-адреноагониста алупента и при повышении Сахаров на 200% и выше, цАМФ на 10% и выше, суммарной гликогенолитической активности на 100% и выше прогнозируют индивидуальную чувствительность и бетаадреноблокаторам у больных артериальными гипертензиями со С

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)э G 01 N 33/66

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4724348/14 (22) 24.07.89 (46) 23.10.91. Бюл. М 39 (71) Ростовский медицинский институт (72) Б.Я. Зонис, B.Н. Чернышов, Н.И. Голубенкова, Э.Д, Бровкович и Т.В. Ткаченко (53) 615.475 (088,8) (56) Брин В,В. и Зонис Б.Я, Диагностика типов адренореактивности при артериальных гипертензиях. — Кровообращение, 1983, hh 11, с.49 — 51. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИНДИВИДУАЛЬНОЙЙ ЧУВСТВИТЕЛ Ь НОСТИ К БЕТААДРЕНОБЛОКАТОРАМ У БОЛЬНЫХ

АРТЕРИАЛЬНЫМИ ГИПЕРТЕНЗИЯМИ (57) Изобретение относится к медицине, преимущественно к кардиологии, и найдет применение в выборе тактики лечения и втоИзобретение относится к медицине, преимущественно к кардиологии, и найдет применение в выборе тактики лечения и вторичной профилактике артериальных гипертензий.

Целью изобретения является повышение точности и информативности к назначению бета-адреноблокирующих препаратов у больных артериальными гипертензиями.

Способ осуществляется следующим образом.

12 мл венозной крови берут в пластиковые пробирки с 3,0 мл 3 -ного раствора

ЭДТА (натриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты), используемой в качестве антикаогулянта. Лимфоциты выделяют по

„„SU „„ 18Û75À1 ричной профилактике артериальных гипертензий. Целью изобретения является повышение точности и информативности к назначению бета-адреноблокирующих препаратов у больных артериальными гипертензиями. Для этого в лимфоцитах периферической крови определяют концентрацию сахаров, цАМФ, суммарную гликогенолитическую активность до и после введения специфического бета-адреноагониста — алупента и при повышении сахаров на 200% и выше, цАМФ на 10% и выше, суммарной гликогенолитической активности на 100% и выше прогнозируют индивидуальную чувствительность и бетаадреноблокаторам у больных артериальными гипертензиями. методу Boyum А, в фиколл-верографиновом (© градиенте плотности (р = 1,077 + 0,001) и 0 разводят в 5,0 мл 2,7% ного раствора ЭДТА для подавления агрегации кле-.. ок. Количество клеток в суспензии должно быть не менее

1 х 10 кл/мл. Клетки считают на электронном счетчике, например, типа "Picoscale" (В HP).

В полученной суспензии лимфоцитов производят определение циклического аденозинмонофосфата (цАМФ), показателя ферментативного звена гликогенолиза — общей гликогенолитической активности и одного из конечных продуктов распада гликогена — редуцированных сахаров до и после специфической стимуляции клеточ1686375 ных адренорецепторов бета-адреноагонистом — алупентом. Полученные лимфоциты инкубируют с алупентом в конечной концентрации 10 M при 37 С в течение 10 мин.

Суспенэию клеенок делят на две парные час- 5 ти: в первую серию пробирок (контроль и опыт) вносят по 0,,5. мл для определения динамики цАМФ; во вторую серию — no 1,5 мл для определения редуцированных сахаров и общей (суммарной) гликогенолитиче- 10 ской активности, Алупент добавляют в опытные пробы в количестве, равном половине взятого объема клеток, 0,25 и 0,7 мл соответственно. В контрольные пробы добавляют эквивалентные количества физио- 15 логического раствора в той же конечной концентрации.

После инкубации первую серию пробирок центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин для получения осадка клеток; 20 в остальных пробах проводят лимфоцитолиз путем замораживания при -20 С и последующего оттаивания при комнатной температуре.

В осадке лимфоцитов (первая серия 25 пробирок) производят определение динамики изменения цАМ Ф: к осадку клеток контрольной и опытной проб добавля1от по 0,5 мл 10%-ного трихлоруксусной кислоты, выдерживают при 4 С в течение 10 мин. затем 30 центрифугируют 10 мин при 3000 об/мин для осаждения лизированных мембран и надосадочную жидкость сливают в пластиковые пробирки. При необходимости длительного хранения пробы замораживают 35 при -18 С. Определение цАМФ проводят радиоиммунным методом с помощью наборов для радиоиммунного исследования, например, типа "Хемапол" (ЧСФР). Счет осуществляют на гамма-счетчике, напри- 40 мер, "Минигамма . Расчет циклических нуклеотидов производят в пикамолях на IÎ клеток. Прирост цАМФ вычисляют по формуле и выражают в процентах:

oI1 KoH )(100 %, »он. где Kpn. — концентрация цАМФ в опытной пробе; K»p — концентрация цАМФ в контрольной пробе, В полученном гомолизате интактных и стимулированных лимфоцитов определяют 50 динамику содержания редуцированных сахаров как одного из конечных продуктов распада гликогена после кратковременного воздействия агониста на бета-адренорецепторы лимфоцитов и суммарную гликоге- 55 нолитическую активность.

Определение редуцированных сахаров:

В две пробирки (коитроль и опыт) вносят по 0,1 мл гемолизата интактных и стимулированных лимфоцитов соответственно. в третью пробирку (контроль на реактивы)—

1,0 мл дистиллированной воды, Во все пробирки доставляют по 2,0 мл 0,45%-раствора углекислого кальция, по 0,5 мл 0,1%-раствора ИаОН и ставят на 3 мии на кипящую водяную баню. После этого, охладив, центрифугируют 10 мин при 1500 об/мин, сливают иадосадочную жидкость в другие пробирки, добавляют по 2 0 мл 0,1 -ного раствора IQFe(CN)e), приготовленного на

0,7%-ном растворе углекислого кальция, и ставят на 20 мин на кипящую водяную баню.

После охлаждения быстро добавляют по 3,0 мл 1 -ного раствора ЭДТА, встряхивают и колориметрируют при 400-413 нм против дистиллированной воды, Содержание редуцированных сахаров рассчитывают по формуле

Х 100%

Е» — Ест. где Е» — оптическая плотность контрольной пробы; Е» — оптическая плотность исследуемой пробы; Š— оптическая плотность стандарта.

Результаты выражают в мкмоль /10 лимфоцитов, для чего полученный результат (в гаммах) делят на молекулярный вес глюкозы (180,0) и количество клеток во взятом для исследования объеме.

Определение суммарной гликогенолитической активности (СГА).

В четыре пробирки (Ik, 1,, Ig lp ) вносят

1 1 по 0,25 мл гемолизата лимфоцитов; причем

El lk, lp — из интактных клеток, в Ig, Ip — из

1 1 клеток, стимулированных алупентом. В опытные пробы (1о, lp ) добавляют по 0,75 мл

1 (до 1,0 мл) 0,5%-ный раствор гликогена и ставят на ЗО мин на водяную баню при 37 С с постоянным перемешиванием, После этого во все пробы добавляют по 2,0 мл 0,45 ного раствора сульфата меди, по 0,5 мл 0,1 н, раствора NaOH, а в контрольные пробы (lK, 1 ) — по 0,75 мл 0,5 -ного раствора гли1 когена. Затем ход определения повторяет таковой для редуцированных сахаров, Расчет СГА ведут следующим образом.

E - -"3*!" — С - * -й" " сс»„ -сгл

Ea — С E ° — Š— т— — "- — — — — -- х»ю с л»

СГА выражают в мкмоль/107 кл х мин.

По величине прироста редуцированных сахаров более,чем на 200%. активации СГА более. чем на 100%; приросту цАМФ более, чем на 10%, делают заключение о повышенной функциональной активности бета-адре1686375

Таблица1 норецепторов, что является показанием для назначения бета-адреноблокирующих препаратов. Данные изучения адренозависимых процессов в лимфоцитах здоровых людей (доноров) не выявили существенных изменений в функциональном состоянии клеточных адренорецепторов, т.е, показатели биохимических сдвигов в ответ на специфическую стимуляцию оказались у них ниже вышеуказанных пределов.

Пример 1. Больной Б., 48 лет, страдает артериальной гипертензией в течение 12 лет. После полного клинико-инструментального обследования установлен диагноз; гипертоническая болезнь ll стадии, медленно прогрессирующее течение, После проведения медикаментозных проб с гипотензивными препаратами у больного выявлен бета-адренозависимый вариант артериальной гипертензии: прием 40 мг "обэидана вызывал значительное снижение артериального давления (186/110-160/100 мм рт. ст. — 14 ). В лимфоцитах больного отмечалась следующая динамика биохимических процессов (см, табл,1)

Прирост цАМФ на 53, PC — íà 217, СГА — на 192 j свидетельствовал об активации бета-адренорецепторов у данного больного. Назначение "Обзидана" в дозе 160 мг/сут привело к стойкому снижению артериального давления в течение 2 недель (до

146/92 мм рт,ст,), Пример 2. Больная С., 54 года, в течение 11 лет страдает хроническим пиелонефритом с артериальной гипертензией.

Проба с "Обзиданом" не привела к существенному снижению артериального давления (до пробы — 182/100, после — 176/106 мм рт.ст.). Динамика биохимических процессов в лимфоцитах больной также не выявила значительных сдвигов по сравнению с контрольной группой (cM. табл.2).

Эти данные свидетельствуют о том, что, у больной отсутствует гиперадренореактивность бета-адренорецепторного аппарата, что позволяет прогнозировать неэффективность бета-адреноблокаторов у этой больной. Гипотензивный эффект наблюдался в ответ на прием альфа-адреноблокатора "Пирроксана", назначенного в дозе 0,03 г/сут.

Преимущество предлагаемого способа продемонстрировано в табл.З, в которой

5 приводятся данные исследования больных артериальными гипертенэиями с использованием известного и предлагаемого способов.

Таким образом, по сравнению с извест10 ными, предлагаемый способ обладает следующими преимуществами: он более точен и информативен, так как позволяет определять активность непосредственно клеточных адренорецепторов, 15 т.е, тех структур, на которые воздействуют адреноблокаторы: он достаточно прост в исполнении с использованием доступных биохимических методов,что легко осуществимо в клиниче20 ской практике; способ обладает высокой специфичностью, поскольку для стимуляции лимфоцитов используется специфический агонист бета-адренорецепторов — орципрералин

25 (алупент), а изучаемые при этом биохимические процессы (гликогенолиз, циклические нуклеотиды) являются строго адреноэависимыми.

Формула изобретения

30 Способ определения индивидуальной чувствительности к бета-адреноблокаторам у больных артериальными гипертензиями путем клинического исследования, о т л и ча ю шийся тем, что, с целью повышения

35 точности и информативности способа, в лимфоцитах периферической крови определяют концентрацию сахаров, цАМФ, суммарную гликогенолитическую активность до и после введения специфического бета-ад40 реноагониста — алупента и при повышении концентрации сахаров на 200 и выше, цАМФ на 10, и выше, суммарной гликогенолитической активности на 100 и выше прогнозируют индивидуальную чувстви45 тельность к бета-адреноблокагорам у больных артериальными гипертенэиями, 1686375

Таблица2

Таблица 3

Статистически обр1аботвнные данные нсспедоавння бопьных артериальными гипертензиямн с использованием известного и предлагаемого способов

Вольные сспепоаапие предпвгаемьач способом сследоаанне иззестнааа спосо

1 группа

Исконное

CAIt

16,04 8 1,1

7С,2 6,4

182,9 - 10,3 !

50.7 - 7,8

0,52+0,07 55,08 7,7

Фон п9

1,68 1 0,48

77,97 + 10,1

1ООХ больных

АГ р <О,С5

184 а- 13 O р <0,001 р<0 05

С,74 1 С,11 р <0,1

43,0 9,35

17,7 ь 3,9

П группа

172 ° 0 !3,7 р тСа1 и 5

73а16 -" 8 1 2 65 8 Оэ56 59,5 8 10,9

1002 больных АГ р < 0,01" "* р <0,001 р <0,02

<1

Редуцированные сакара; ат) гинхогенолитичесхяч активность! "аа и!цинический,йе! достоверно по Випхоксону; ат . ааа) .. ааах ю н. те согпвсно рекомендациям ВХНП АИН СССР терапия АГ считалась зффектизноц при снквении артериального давления не менее, чем на 102 or нсходяого уровня.

Составитель Н.Теренина

Техред М.Моргентал Корректор M.Êó÷åðÿâàÿ

Редактор Е.Папп. Заказ 3595 Тираж, Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва. Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 1Î1

САД после приема

40 мг

Обзндана

Исходное

САД

САП после приема

40 мг "Сбзндана

После стимуляции апунантом

Фон

Посла стимупяllrrN апу" пеитом

Эффективность терапии бетавдренобяокаторамн