Способ определения антигена
Изобретение относится к иммунохимии и может быть использовано для обнаружения специфических антигенов (антител) в биологических жидкостях Целью изобретения является повышение точности определения антигенов (антител) методом иммунофлуоресценции, не образующих комплексы антиген - флуоресцирующее антитело , видимые а люминесцентный микроскоп Для реализации способа в реакции иммунофлуоресценции включающей инкубацию антигена со специфическими флуо ресцирующими антителами учет результатов реакции проводят в жидкой фа зе без использования твердофазных носителей Для этого образовавшиеся люминесцирующие комплексы выделяют и жидкой фазы иммунологической реакции центрифугирователем при 3-4 тыс с , отли вают от непрореагировавших исходных компонентов, ресуспендиоуют в исходном объеме забуфеоенного физиологическою раствора и флуориметрируют в жидкой фа зе Положительный эффект способа состоит в возможности определения антигенов (антител ), не образующих флуоресцирующих агрегатов, видимых в люминесцентном микроскопе , в частности вируса лизурз пикорнаи калицивирусов 1 табл (Л С
CQIO3 СОВГТСКИХ
СОЦИАЛИС!ИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ ПРИ ГКНТ СССР 1 ; 4. ОПИСАНИЕ VI3OEPETEHMSI К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4305697/14 (22) 10.09.87 (46) 07.11.91. Бюл. ¹ 41 (71) Всесоюзный научно-исследовательский ящурный институт (72) А.И.Гриценко,.Т.Ф.Кощецян, Л.А.Морозова, А.Б.Смирнов и Ж.А. Шажко (53) 615.373(088.8) (56) Foster et al. Pros, Soc. Exp. Biol Med1975, 150, 155-160. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕНА (57) Изобретение относится к иммунохимии и может быть использовано для обнаружения специфических антигенов (антител) в биологических жидкостях, Целью изобретения является повышение точности определения антигенов (антител) методом иммунофлуоресценции, не образующих комплексы антиген — флуоресцирующее антитело, видимые s люминесцентный микроИзобретение относится к области иммунохимии и может быть использовано для обнаружения. специфических антигенов (антител) в биологических жидкостях. Цель изобретения — определение антигенов (антител) методом иммунофлуоресценции, не образующих комплексы антиген-флуоресцирующее антитело, видимые в люминесцентный микроскоп. Способ осуществляется следующим образом. В известном способе определения антигена (антител) в реакции иммунофлуоресценции, включающем инкубацию антигена со специфическими флуоресцирующими антителами, получение преципитата и учет результатов реакции, определение антигенов „„5U„„1689858 А1 скоп. Для реализации способа в реакции иммунофлуоресценции, включающей инкубацию антигена со специфическими флуоресцирующими антителами, учет результатов реакции проводят в жидкой фазе без использования твердофаэных носителей. Для этого образовавшиеся люминесцирующие комплексы выделяют и". жидкой фазы иммунологической реакции центрифугирователем при 3 — 4 тыс p., отливают от непрореагировавших исходных компонентов, ресуспендируют в исходном объеме забуференного физиологического раствора и флуориметрируют в жидкой фазе. Положительный эффект способа состоит в возможности определения антигенов (антител), не образующих флуоресцирующих агрегатов, видимых в люминесцентном микроскопе, в частности вируса лиэура. пикорна- и калицивирусов, 1 табл. (антител) проводят в жидкой Фазе без использования твердофазных носителей. Для этого образовавшиеся люминесцирующие комплексы выделяют из жидкой фазы иммунологической реакции центрифугированием при 3 — 4 тыс.о., отмывают от непрореагировавших исходных компонентов, ресуспендируют в исходном обьеме забуференного физиологического раствора и флуориметрируют в жидкой фазе. Пример. Подбор оптимального разведения флуоресцирующей иммунной сыворотки. В центрифужные пробирки вносят по 3 мл забуференного физраствора, состоящего из 7 ч. 0,85 -ного раствора, NaCl и 3 ч. 0,15 M фосфатного буфера рН 7,5 — 7,6. Добавляют 1689858 Флуооесяидующая сын типа Ав разведен 2 ! .1.... 17 Д 13 2 Нормальная ткан!» Без антигена Составитель М.Губарев 1ехред Ы.Ыоргенfan Редактор Е.Пап!! K0ppeI Заказ 3810 Тираж !1одпис!.ое ВН!1ИПИ f осударственного комитета по изобретениям и от<рытиям при f КНТ C(СР f !3035, Москва. Ж-35, Рауц!с!<ая наб., 4/5 Прриэнпд, I HI-IIII(-инда т,-;!!! скл!1 комбина! "П !е!!!". I Ужгор<зд, ул,f л. ;!Ива fff f по 0,1 мл известного антигена и по 0,05 мл разведений соответствующей иммунной флуоресцирующей сыворотки. В контрольные пробирки вносят те же разведения флуоресцирующей сыворотки без антигена. Пробирки инкубируют 12-16 ч при 37"С, после чего осажда!от прореагированшие комплексы путем центрифугирования в центрифуге с горизонтальным ротором при 3— 4 тыс.о в течен!ле 20 мин. Надосадочну!о жидкость слива!от,а осадок отмывают путем ресуспендирования его н 3 мл эабуференного физраствора, центрифугирования при 3-4 тыс.о в течение 10 мин и удаления ч надосадочной жидкооти, Отг!ытый Oceiioi< ресуспендируют в 3 мл забуференного физраствора и флуориметрируют. Огг!.Имальным разведением флуоресцирующей иммунной сыворогки счита!от разведение, обеспечивающее наибольшу!о разницу в флуоресценции между гомологичной и контрольной системой, не содержащей специфического ачтигена. При использонанл!л антиглобулиновых флуоресцирующих сL)80 роток последние f!e TIITpyIOт, а испольэу!от н четырехкратной концент рации по отношени!о к их красящему титру, определенному изготовителем. В табллце приведен пример титрования флуоресцируюгцей иммунной сыворотки против нлруса яьцура тип".. й, В приведенном -!рлмере оптимальнь.м разведением флуоресцирg ющей сыворотки янляется 1;10, та", как после вычитания велцчины фонового свечения (без антигена) такое разведение обеспечивает самый высокий уровень флуоресценции (в данном примере 14 едлниц). 5 Положительный эффект способа состоит в возможности определения антигенов (антител), не образующих флуоресцирующлх агрегатов, видимых в люминесцентном микроскопе, в частности нируса ящура, пи10 корна- и калицивирусов, других растворимых антигенов, Способ не требует связывания образу1ощегося люминесцирующего комплекса с твердофаэным носителем. <ддaрмула иэобpeтениЯ Способ ог!ределения антиге!!а в реакци!л иммунофлуоресценции, включающий инкуоац!!!О антигена со спсцифическими 20 флуоресцирую!цлми антителами, выделение л!оми!-!Ссциру!Оцих комплексов путем центрифугирования и учет результатов реакции. отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа за счет выяв25 ления антигенон, не образующих комплексов, видимых в люминесцентный микроскоп, люминесцирую!цие комплексы выделяют из жидкой фазы иммунологической реакции центоифугиронанием при 30 3-4 тыс.ц-, отмывают от непрореагировав.б ших исходных компонентов, ресуспендируют н исходном объеме забуференного физиологического раствора и учитывают мегодом флуориметрии в жидкой фазе. 
