Штамм культивируемых диплоидных клеток тонкого кишечника эмбриона коровы, используемый для выращивания пневмо- энтеропатогенных вирусов крупного рогатого скота
Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и цитологии. Целью изобретения является штамм культивируемых диплоидных клеток тонкого кишечника эмбриона коровы, имеющих стабильный генетический состав, хорошую пролиферативную активность и не уступающих по чувствительности к пневмо-энтеропатогенным вирусам крупного рогатого скота первичным культурам и их субкультурам. Для этогодиспользуют штамм, депонированный в ВСКК (СХЖ) под № 30. Данный штамм диплоидных клеток отличается генетической стабильностью и достаточной чувствительностью к таким вирусам-возбудителям пневмоэнтеритов крупного рогатого скота, как вирус ринотрахеита, парагриппа и энтеровируса штамм МПЭ. 3 табл. 4W Ё
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
<я>ю С 12 N 5/00, 5/02
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4747788/13 (22) 09.10.89 (46) 07.12.91. Бюл. М 45 (71) Всесоюзный научно-исследовательский ветеринарный институт (72) С.Х. Хаертынов, Г.М. Ялалтдинова, Л.И.
Матвеева, В.Г. Гумеров и Я.А, Крылов (53) 578.085.23(088.8) (56) Аспанидзе Б.А. Первичные и диплоидные культуры клеток легкого плода коровы для вирусологических исследований. Автореф. дисс, на соиск.уч,степени канд.вет.наук. — M., 1987.
Дьяконов Л.П„Лобунцева Д.В., Плешанова Г,Ю, и др, Методические рекомендации по культивированию первичных культур клеток, субкультур и органных культур из ткани кишечника плодов крупного рогатого скота и свиней. — М„1984, (54) ШТАММ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ ДИПЛОИДНЫХ КЛЕТОК ТОНКОГО КИШЕЧНИКА
ЭМБРИОНА КОРОВЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ
Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и цитологии, Целью изобретения является штамм культивируемых диплоидных клеток тонкого кишечника эмбриона коровы, имеющих стабильный генетический состав, хорошую пролиферативную активность и не уступающих по чувствительности к пневмо-энтеропатогенным вирусам крупного рогатого скота первичным культурам и их субкультурам.
Пример 1. В отличие от известного штамма свойства клеток стабильны: морфо1696473 А1
ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ ПНЕВМО-ЭНТЕPOПАТОГЕННЫХ ВИРУСОВ КРУПНОГО РОГАТОГО CKOTA (57) Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и цитологии, Целью изобретения является штамм культивируемых диплоидных клеток тонкого кишечника эмбриона коровы, имеющих стабильный генетический состав, хорошую пролиферативную активность и не уступающих по чувствительности к пневмо-энтеропатогенным вирусам крупного рогатого скота первичным культурам и их субкультурам. Для этого, используют штамм, депонированный в ВСКК.(СХЖ) под
N. 30. Данный штамм диплоидных клеток отличается генетической стабильностью и достаточной чувствительностью к таким вирусам-возбудителям пневмоэнтеритов крупного рогатого скота, как вирус ринотрахеита, парагриппа и энтеровируса штамм
"МПЭ". 3 табл. логическая однородность клеток культуры, форма их эпителиоидная, Пример 2. В отличие от известного штамма приготовление клеток ВСКК (C )
N. 30 для использования менее трудоемко, требуется меньше времени и они имеют более низкую себестоимость. Обоснование приведено в табл. 1: постоянство по кариологии в процессе пересевов, стабильность чувствительности клеток в процессе пересевов к пневмо-энтеропатогенным вирусам крупного рогатого скота, которая не уступает первичным клеткам (табл. 2).
1696473
Табли ца
По известному способу
По предлагаемому способу
Требуется
Ие требуется
«11»
Трипсинизация ткани необходима,расход трипсина 5CCG мл
Не требуется
Требуется
Смена среды
Среда ИЕИ +
+ 5-101 фетальной сыворотки
5-10 матрасов на 1,5л
30-35 матрасов на
1,5 л
he требуется
Требуется
Таким образом, в вирусологических исследованиях клетки ПТК:ЭК могут быть равноценным заменителем первичных клеток, Пример 3. В отличие от известного 5 .штамма клетки ВСКК (СХЖ) прошли более .
30 пересевов, законсервированы и хранятся в жидком азоте: После реконсервирования выживаемость клеток составляет 80 .
Через 1-2 пересева исходная пролиферэ- 10 тивная. активность клеток восстанавливается.
Показатели, характеризуюцие объект
Необходимость жи вотного-донора ткани для приготовления куль" туры
Содержание одного человека для доставки из мясокомбината тка- ни, используемой при приготовлении культуры кпеток
Необходимость трипсинизации ткани и расход трипсина
Состав ростовой среды для культивирования клеток
Количество культур клеток,из" готавливаемых в течение рабочего дня
Расход электроэнергии HB диспергирование клеток магнитной мешалкой и их осаждение центри9угированием
Пример 4. В отличие от известного штэммэ клетки ВСКК (СХЖ) 14 10 облэдают более высокой пролиферэтивной активностью (2-6, у известного не более 2), по чувствительности к вирусам крупного рогатого скота не уступают известному (табл. 3), Формула изобретения
Штамм культивируемых диплоидных клеток тонкого кишечника эмбриона коровы
ВСКК(СХЖ) 1 в 30, используемый для выращивания пневмо-энтеропэтогенных вирусов крупного рогатого скота.
Трипсинизация ткани не требуется, расход трипсина для снятия клеток 80 мл
Среда ИЕМ или Д-ИЕИ +
+ сыворотки крови лошадей, крупного рогатого скота улучшенного качества; стоимость сыворотки 130 руб.
1696473
Та бли ца 2
Г 50/МЛ
Чувствительность к вирусам, Вид культуры клеток
Энтеровирус Ч1ПЭ"
Адениновирус
1-го серотипа типа Bovina-10
7,04+0,20
7,25+0, 18
4,18 + 0,1
4,20+0,12
5,51 + О 17
5,51+0,21
7,04+0,20
4,18+С,1Э
5,5 +0,16
Таблица 3 е
Чувствительность к вирусам, ф ТЦД п„способу
Вирусы крупного рогатого скота
Яредлагаем
Ринот рахеит
Аденовирус, штамм Eovina-10
Знтеровирус, штамм "t1311"
5,51 0,21
4,20 0,12
7,29 0,18
Составитель С. Светлышев
Редактор И. Дербак Техред M.Моргентал Корректор С. Черни
Подписное
Заказ 4276 Тираж к ытиям п и ГКНТ СССР
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при
113035, Москва, Ж-35. Раушская наб., 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101
Клетки ВСКК (СХЖ) В 30
10"й пассаж
30 "й пассаж
Первичная культура клеток ТКЭК
Инфекционный ринотрахеит штамм "ТК"ВИЭВ5 52
4,18
7,04
0,17
0 1с
0,20
