Способ определения инсулина в эритроцитах

 

Изобретение относится к клинической биохимии, а именно к количественному определению инсулина, локализованного на мембранах эритроцитов крови человека, и предназначено для использования в медицине . Цель изобретения - снижение трудоемкости и сокращение времени исследования . Способ заключается в отмывании эритроцитов крови физиологическим раствором с последующим добавлением 20%- ного раствора твин-20 в объемном соотношении 1:1, инкубированием его в течение 30-40 мин при 18-20°С. Далее осуществляют в полученном растворе радиоиммунологическое определение содержания инсулина. Положительный эффект способа обусловлен значительным снижением трудоемкости, а также сокращением времени исследования.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)л G 01 N 33/534

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4471101/14 (22) 05.08,88 (46) 30.12.91, Бюл. N. 48 (71) Белорусский научно-исследовательский институт кардиологии (72) А.Б. Чещевик и А.В. Байда (53) 615.375(088.8). (56) Халаим Е,А., Сандуляк Е.И„Масленко

В.Л., Голубка О,М, Авторское свидетельство

СССР М 1377736, Способ определения инсулина в эритроцитах. — Открытия и изобретения в СССР, 1988, N 8. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИНСУЛИНА

В ЭРИТРОЦИТАХ (57) Изобретение относится к клинической биохимии, а именно к количественному onИзобретение относится к клинической биохимии, а именно к количественному определению инсулина, локализованного на мембранах эритроцитов крови человека, и предназначено для использования в медицине, Цель изобретения — снижение трудоемкости и сокращение времени исследования.

Поставленная цель достигается тем, что после отмывания в физиологическом растворе эритроциты обрабатывают 20%-ным раствором твин-20 в объемном соотношении 1:1 в течение 30 — 40 мин при 18-20 С и в полученном растворе определяют содержание инсулина методом радиоиммунологического анализа, Способ подтверждается следующими примерами.

«.. Ж 1702317 А1 ределению инсулина, локализованного на мембранах эритроцитов крови человека, и предназначено для использования в медицине. Цель изобретения — снижение трудоемкости и сокращение времени исследования. Способ заключается в отмывании зритроцитов крови физиологическим раствором с последующим добавлением 20%ного раствора твин-20 в объемном соотношении 1;1, инкубированием его в течение 30 — 40 мин при 18-20 С. Далее осуществляют в полученном растворе радиоиммунологическае определение содержания инсулина, Положительный эффект способа обусловлен значительным снижением трудоемкости, а также сокращением времени исследования. 1 >

Пример 1. Испытуемый А., м., 30 лет.

Диагноз: практически здоров. Кровь в количестве 2,0 мл забирают из кубитальной вены 3 и центрифугируют при 20009 в течение 15 С) мин. Плазму отбирают и к оставшейся эритроцитарной массе добавляют 10,0 мл физи- (,А) алогического раствора. Перемешивают, центрифугируют,. удаляют супернатант и еще дважды отмывают клетки физиологическим раствором. К 0,2 мл эритроцитарной массы добавляют 0,2 мл 20%-ного раствора твин-20 и инкубируют 40 мин при 18 — 20 С, периодически встряхивая содержимое пробирки. Берут 0,1 мл полученного раствора и определяют в нем радиоиммунологическим методом содержание инсулина согласно инструкции, прилагаемой к наборам. Содержание инсулина составило

538,9 ммоль/л.

1702317 менении прототипа, что указывает на более высокую точность предлагаемого способа.

Это вполне объяснимо, так как при использовании твин-20 определяются все формы инсулина эритроцитов, в то время как в прототипе регистрируется только свободный инсулин эритроцитов человека.

Составитель Б.Мануйлов

Редактор А.Маковская Техред М,Моргентал Корректор О.Кундрик

Заказ 4541 . Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-З5, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r Ужгород, ул.Гагарина, 101

Положительный эффект способа подтверждается тем, что в предлагаемом способе по сравнению с прототипом более чем в два раза снижаются временные затраты и трудоемкость метода, за счет чего и дости- 5 гается цель изобретения. Кроме того, предлагаемый способ позволяет проводить определение инсулина в эритроцитах в серии, состоящей из 100 проб, что дает возможность использовать метод для 10 пр ведения массовых обследований,, У одних и тех же пациентов проведено определение уровня инсулина в эритроцитах с помощью предлагаемого способа по сравнению с прототипом. При использова- 15 нии предлагаемого способа уровень инсулина составил 116,44» 6,62 ммоль/л (n = 10), по способу-прототипу — 58,73й1,58 ммоль/л (A=

=1l0). Следовательно, при использовании предлагаемого способа концентрации инсу- 20 лина более чем в 2 раза выше, чем при приФормула изобретения

Способ определения инсулина в эритроцитах путем отмывания эритроцитарной массы физиологическим раствором с последующим количественным анализом, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью снижения трудоемкости и сокращения времени исследования, к эритроцитарной массе добавляют 20 -ный раствор твин-20 s объемном соотношении 1:1, инкубируют 30-40 мин при 18 — 20 С и в полученном растворе производят радиоиммуннологическое определение содержания инсулина,