Штамм virus influecnza а/алма-ата/215/88 для приготовления диагностических препаратов

 

Изобретение относится к вирусологии, в частности к получению диагностикума вируса гриппа. Целью изобретения является штамм вируса гриппа А (H3N2). обладающего специфической иммуногенностью, позволяющей использовать его для приготовления диагностических препаратов для идентификации вновь выделяемых вирусов гриппа. Указанная цель достигается использованием штамма А(Алма-Ата) 215/88, обладающего широким антигенным сИектром и взаимодействующего с сыворотками и эталонным штаммом А (Филиппины) 2/82, А(Миссисипи) 1 /85, А(Виктория)7/87 и А(Сычуань)2/87. Штамм пригоден для получения соответствующих гипериммунных сывороток, 5 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

:СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 С 12 N 7/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

Г10 ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4801739/13 (22) 13 03.90 (46) 30.01.92. Бюл. N. 4 (71) Институт микробиологии и вирусологии

АН Казсср (72) И.Л.Колыванова, Е.И.Исаева, К.Х.Жуматов, С.P.Áóëãàêîâà и M.Õ;Ñàÿòîâ (53) 576.858(088.8) (56) Шендерович С.Ф. и др. Антигенные и биологические особенности штаммов вируа группа А, изолированных в 1985 г. — Вопросы вирусологии, 1987, М 4, с. 403 — 409.

Жданов B.M. и др. Первичная структура гемагглютинина вирусов гриппа А (НЗ/N2).

Вопросы вирусологии, 1989, N- 2, с. 155-160. (54) ШТАММ VIRUS INFLUENZA А(АЛМААТА) 215/88 ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ

Изобретение относится к:вирусологии, в частности для получения диагностикума вируса гриппа.

Цель изобретения — штамм вируса гриппа A(H3N2), обладающего специфической иммуногенностью, позволяющей использовать его для приготовления диагностических препаратов для идентификации вновь выделяемых вирусов гриппа.

Пример 1. Антигенную структуру штамма изучают согласно рекомендациям

В03 и РТГА и РПНАс использованием набора поликлональных крысиных сывороток к эталонным штаммам (А (H3N2), к рекомбинатным вирусам гриппа СДС-18 (Heg 1N2), P-17 (Heg 1N2) и Е qlne -А(Бангкок) 1/79 (Heg 1N2). Кроме того, в иммунологическом анализе применяют моноспецифические антитела к отдельным антигенным детерми-

ЫХ 1708838 А1 (57) Изобретение относится к вирусологии, в частности к получению диагностикума вируса гриппа. Целью изобретения является штамм вируса гриппа А (НЗИ2). обладающего специфической иммуногенностью, позволяющей использовать его для приготовления диагностических препаратов для идентификации вновь выделяемых вирусов гриппа. Указанная цель достигается использованием штамма А(Алма-Ата) 215/88, обладающего широким антигенным спектром и взаимодействующего с сыворотками и эталонным штаммом А (Филиппины1 2/82, А(Миссисипи) 1/85, А{Виктория) 7/87 и А(Сычуань) 2/87. Штамм пригоден для получения соответствующих гипериммунных сывороток. 5 табл. нантам гемагглютинина, Дополнительно проводят тонкий иммунологический анализ штамма в РТГА с моноклональными антителами к вирусам А (Б.ангкок) 1/79 и А(Филлипины) 2/82 (H3N2).

Результаты изучения антигенной структуры представлены в табл,1 — 5.

Штамм А(Алма-Ата) 215/88 обладает определенной широтой антигенного спектра, взаимодействует с сыворотками к эталон. ным вариантам А(Филиппины) 2/82, А(Миссисипи) 1/85, А(Виктория) 7/87 иА(Сычуань)

2/87 до 1/2 гомологичного титра.

Использование в иммунологическом анализе монорецепторных сывороток к отдельным детерминантам гемагглютинина, полученных методом специфической адсорбции, дало воэможность получить объективную оценку антигенной новизны

1708838

10 выделенного варианта вируса„Опыты показали, что в составе гемагглютинина предлагаемого штамма (81014, имеются общие антигенные маркеры с вирусами А(Бангкок)

1/79 (7.8.10) и А(Миссисипи) 1/85 (7.10.14) в оригинальном, ранее не встречавшемся сочетании. Приведенные результаты подтверждены серологическим обследованием иммунной крысиной сыворотки анти-А-(Алма-Ата) 215/88, которая реагировала с вирусами А(Бангкок) 1/79.и А(Миссисипи) 1/85 до 1/8 гомологичного титра, Применение в дальнейшем моноклональных антител к эталонам А(Бангкок) 1/79 и А(Филиппины) 2/82 подтвердило и детализировало своеобразие нового штамма.

Штамм А (Алма-Ата) 215/88 взаимодействовал с 5 из 8 моноклональных антител к

А(Бангкок) 1/79 и лишь с 1 иэ 12 к вирусу

А(Филиппины) 2/82, в то время как изолированный в эту же вспышку штамм А(АлмаАта) 186/88 реагировал со всеми указанными моноклональными препаратами.

Адаптационные свойства. Выделенный

or человека вирус А(Алма-Ата) 215/88 репрод цируется в системе куриного эмбоиона г ри оптимальной (37 С) температуре до инфекционно о титра 4-5 Ig ЭИД5о/0,2 мл.

Штамм обладает низкой гемагглютинирующей (1;32-1;128) и достаточно высокой иммуногенной активностью (Т вЂ” 640), Свойства агглютинации. Вирус обладает узким спектром агглютинации эритроцитов различных видов животных, Он хорошо агглютинирует эритроциты кур, в низких титрах — морской свинки и свиньи и не взаимодействует с эритроцитами барана и мыши.

Терморезистентность (Ты-признак).

Предлагаемый вирус обладает термочувствительным гемагглютинином, гемагглютинирующая активность штамма А(Алма-Ата)

215/88 резко снижается в результате прогревания при 56ОC в течение 1 ч.

Ингибиторочувствительность. Исследуемый штамм проявляет чувствительность к термолабильным /3-ингибиторам сыворотки крови свинец, овец, человека, мышей, кролика, кур и морских свинок. Резистентен по отношению к сывороточным термостабильным у -игибиторам крупного рогатого скота, овец, мышей и морской свинки.

Адсор6ци он н о-эл юи рующа я а кти вность. Штамм А(Алма-Ата) 215/88 (H3N2) обладает высокой адсорбирующей активностью (до 100%) по отношени1о к эритроци15

«» 0

45 там кур и в незначительной степени (до 1/16 исходного титра) злюирует с них после прогревания при 37 С в течение 1 — 4 ч.

Патогенные свойства. Штамм А(АлмаАта) 215/88 проявляет слабопатогенные свойства для белых мышей, Штамм, выделенный от человека, предназначен для производства гриппозного антигена, который может быть использован при серологической диагностике, С этой целью штамм размножают путем заражения 9 — 10-дневных куриных эмбрионов и в аллантоисную полость, Пример 2. Лабораторные животные —, белые крысы. Схема иммунизации, Иммунные сыворотки получают в результате 4кратной внутрибрюшинной иммунизации белых крыс вируссодержащей аллантоисной жидкостью с недельным интервалом.

Животных обескровливают через 10 дней после последней иммунизации. Иммунную сыворотку освобождают от неспецифических ингибиторов обработкой отечественным препаратом нейраминидазы иэ нехолерного вибриона.

Титр иммуной сыворотки данного препарата в РТГА с гомологичным антигеном составляет.1:640, с гетерологичным антигеном вируса гриппа человека А (H1N1) реакция отрицательна.

Исследование антигенной структуры гемагглютинина штамма вируса гриппа А(Алма-Ата) 215/88 в РТГА приведено в табл.1.

Анализ в РТГА иммунной сыворотки к штамму вируса гриппа А(Алма-Ата) 215/88 приведен в табл.2.

Изучение антигенных взаимосвязей штамма вируса гриппа А(Алма-Ата) 215/88 с моноклональными антителами приведено,в табл.3.

Исследование антигенной структуры нейраминидазы штамма вируса гриппа

А(Алма-Ата) 215/88 в РПНА приведено в табл 4.

Исследование состава антигенных детерминант гемагглютинина штамма вируса гриппа А(Алма-Ата) 215/88 методом специфической иммуноадсорбции приведено в табл.5.

Таким образом, предлагаемый штамм вируса гриппа А(ЕЗМ2), изолированный от человека, и приготовленные на его основе диагностические препараты должны найти применение в вирусологической практике для идентификации вновь выделенных штаммов и изучения популяционного имму1708838

Формула изобретения

Штамм Virus Influenza А(Алма-Ата)

215/88 ГКВ М 2190 для приготовления диагностических препаратов.

Таблица 1 ге.,„,;,гг .,.. 1 Титр,,ъ Гл

1 ° 1 !

I н1 н- :.

I 1-омологичны

Мммунные сыворот:и с м у вису"

I !

1

640

Г р и м е ч н и е Здесь и в последуюгцих таблицах титры даны в обратных геличинах.

Таблица 2 »

Штамм вируса

Тип г е

I ! нитета населения с целью надзора за распространением вируса гриппа B природе, за процессом изменчивости возбудителей гриппозной инфекции.

А,свинья/Айова) 15/,":

,(pRe) 8 i 34

/ ((г "1) 090 / "7 ,А(Сингапур) 57 !

А((о ; .ОВГЗ 1 68

А-,гавот..-«e;

4 А(йик горe:e: н (».

IА(Техас) I/77

«, be -.о! /79 . А(Ф« лип, (иеы) ". с 8

IAI_#_eH) 1/84 (СССР) 2/85 (:ум ;сиси пи) 1/85 (Ле,.ингра„ 360/86 (Вик ар:1я) 7/87

«Сыч уа н ь) 2 /87. (.,икгап ф 222/79

К(Рзиа — Aes)215/88

А(свинья / Айова)15/30

А(Р R)8/34

А(СССР)090/77

«А(Сингапур) 57 е А(Ан глия)72

1А(Порт — Чалме рс)1/73 (Техас) 1/77

Бангкок)1/7Я

Филиппины) 2/82

Миссисипи} 1/85

Сычуань 2/87

I-H

«и

Н!

i-I»

e:y г

«;;» . -1 3

«-j ;;; -) 3, Н3

«-«3

j-«3

Н гР

ИЭ

Н3

1 28i0

60 !

1280

Таблица 3

Алма — Ата) 21!5/88

< 200

< 200

< 200

20Î

200

640Î

32О0

6400

6400

ГабГ!ИЦа 4 кк lк!, каму!!Нуе Тип eg! АраСын!оратки к . минидааы у эм-Ре- I

:Омбин!ПаИ (ТИк P Б P

2560 Р

640

М1

К1

Н2

Р-7

СДС- I8

Р- . 7. ац0!кк8 -А(БЗИ- ! ккак 1/79

К2

24 кк кк ii ы О

8D

-b

1 2" ! аv

) Ы ДГИЛТИ!!ИЦУ киркка А(Фиан !аvны) р /кыг К

l J 1e !2 г

tI к4

;в ( к

1 как

") к»

I ы:к I

< 200

< 200

< 200

< 200

< 200

< 200

< 200

< 2,3, < 200

r 200

1708838

5 с

Ф с

О о с<

L0

S CO

Е и ооCI

o.+ с

< о

O m

O СС

C g о сч

X

Ф о

О сч

О О O сч сч с

«

ICL

CL

lS

1с сч

I ч сВ

0 cn S а 05 в"

О Ф т

m mO Z а 2

Ф ж

Х

Ф S

X

Ф

5 о

° C0

S u CO

5 аg щ 5 о х щ ,5 О х щ

ФO>

u.Q

I- m

IХ

3! х

Х

Е

Б

1

5 о

X

S о

Ф

5 в

Ф о о

Z о

X. о о о о

СЧ C4 CV СЧ

v v v v

О О о о О

v со 00 сО со

О О О О сч сч сч v О

v v v

CO о а о о о

СЧ СЧ СЧ С0 CO

О О О О

СЧ СЧ сч СЧ

v v С" v о о

СЧ сч сч О СЧ с э с 2 v о о о

Я Я сч сч сч

v v v с1 Ф о

% сч с0 в о О (с» CO

CO е

C)- - SCO

cg .О С, -, . %

X V X C0

О вФ @ 5 5 у (щ . ь L cII ID

=0 = O= 5

«С мc(-«C C u4:«Ссч