Способ получения иммуноглобулина м

 

Изобретение относится к биологической химии, а точнее к биотехнологии, и может бить использовано для получения иммуноглобулинов М. Цель изобретения - повышение выхода и чистоты целевого продукта. Препараты крови обрабатывают гексаном, осаждают 6%-ным раствором полиэтиленгликоля 6000, с последующей хроматографией с использованием 6%-ной иммунодиуксусной или надуксусной агарозе в цинковой форме и с помощью 6%-ной поперечно-сшитой агарозы. После чего целевой продукт подвергают лиофилизацин. По сравнению с прототипом увеличивается выход целевого продукта на 7-12%, а его чистота на 5%.

Изобретение относится к биологической химии, а точнее к биотехнологии, и может быть использовано для выделения иммуноглобулина класса М (IМ). Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта и его чистота. Способ осуществляют следующим образом. Из иммуноглобулинсодержащих жидкостей экстрагируют липиды гексаном, осаждением полиэтиленгликолем (ПЭГ6000) при конечной концентрации 6% подвергают афинной хроматографии на колонке цинкового производного иминодиуксуснокислой агарозы и гель-хроматографии на колонке 6%-ной поперечно-сшитой агарозы с последующей лиофилизацией. Препарат I М, очищенный вышеописанным способом, давал одну линию при электрофорезе в градиенте пор полиакриламидного геля. При электрофорезе в тех же условиях с додецилсульфатом натрия белок образовал две полосы с относительными мол. массами 65 кД и 20 кД, соответствующими мол, массам тяжелых и легких цепей I М. Молекулярная масса нативной молекулы белка составляла около 900 кД (гель-хроматография, электрофорез в градиенте пор полиакриламидного геля). Выход его составлял 0,6 г/л плазмы крови с чистотой 95% П р и м е р 1. Плазму крови (200 мл) смешивали с 200 мл гексана. Смесь помещали на 1 ч на встряхиватель, а затем переносили в делительную воронку. После расслоения растворителя и плазмы крови последнюю отделяли. К ней добавляли 0,136 объема 50%-ного водного раствора ПЭГ-6000. Смесь встряхивали 45 мин при комнатной температуре. Осадок отделяли центрифугированием и растворяли в 20 мл 0,02М натрий-фосфатного буфера, рН 8,0, содержащего 1 моль хлористого натрия. Раствор наносили на колонку (2,5·20 см) 6%-ной иминодиуксуснокислой агарозы в цинковой форме, уравновешенную тем же буфером, со скоростью 200 мл/ч. Материал, вышедший в свободном объеме колонки, наносили на колонку (5х90 см) 6%-ной поперечносшитой агарозы в вышеуказанном буфере со скоростью 100 мл/ч. I М элюируется в первом пике. Очищенный продукт диализовали против 0,05M раствора бикарбоната аммония и лиофилизовали. Выход препарата составляет 0,4 г 1 л плазмы крови (27%) с чистотой 95% Полученные препараты использовали для иммунизации животных. В результате получены антисыворотки, содержащие до 1 мг/мл моноспецифических антител. Препарат, полученный по способу прототипа, не позволил достигнуть моноспецифичности антисывороток из-за наличия иммуногенных примесей. Предложенный способ реализует следующие преимущества по сравнению с прототипом: сокращается время получения целевого продукта на 48 ч; степень чистоты и нативность препарата позволяют использовать его для получения моноспецифических антисывороток, не требующих адсорбции; удаление липидов гексаном позволяет в 3-5 раз увеличить срок службы хроматографических колонок, при этом расходы на получение высокоочищенного препарата сокращаются на 50% технология очистки позволяет перерабатывать значительные количества исходного сырья с получением свыше 0,5 г белка из 1 л нативной плазмы крови; увеличивается выход целевого продукта на 7-12% с повышением его чистоты на 5%

Формула изобретения

Способ получения иммуноглобулина М путем обработки препарата крови, встряхивания, осаждения полиэтиленгликолем 6000, хроматографического выделения целевого продукта с последующим его диализом и лиофилизацией, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода и чистоты целевого продукта, целевой продукт выделяют хроматографией на 6%-ной цинковой форме иминодиуксусной агарозы и 6%-ной поперечно-сшитой агарозе.