Способ получения иммуноглобулина для внутривенного введения со сниженной антикомплементарной активностью

 

Изобретение относится к медицине, а именно к способам получения иммуноглобулина для внутривенного введения. Цель изобретения - сокращение длительности процесса и повышение качества целевого продукта за счет получения его в мономерной интактной форме. Для этого в качестве фракционирующих агентов применяют каприлат натрия в концентрации 6 - 7%, ДЕ АЕ-целлюлозу, в концентрации 10 - 14 г/г белка с дополнительной обработкой аэросилом А-380 в концентрации 0,21 - 0,36 г/г белка. 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к способам получения внутривенного иммуноглобулина человека. Цель изобретения - сокращение длительности процесса и повышение качества целевого продукта за счет получения его в мономерной интактной форме. Указанная цель достигается тем, что в способе получения иммуноглобулина для внутривенного введения путем фракционирования плазмы крови человека с последующей ионообменной хроматографией на ДЕАЕ - целлюлозе, согласно изобретению в качестве фракционирующего агента используют каприлат натрия в концентрации 6-7% , а ДЕАЕ - целлюлозу - в концентрации 10-14 г/г белка с последующей обработкой аэросилом А-380 в концентрации 0,21-0,36 г/г белка. В таблице дан сопоставительный анализ предлагаемого и известного способов. Как видно из таблицы, положительный эффект предлагаемого способа заключается: во-первых, в сокращении сроков изготовления целевого продукта по сравнению со способом прототипа в 4 раза; во-вторых, в получении мономерной интактной формы целевого продукта без фрагментов и агрегатов. В то же время антикомплементарная активность целевого продукта такая же низкая, как в прототипе, несмотря на то, что молекула иммуноглобулина G не фрагментирована в отличие от прототипа. Определение антикомплементарной активности в препаратах иммуноглобулина G, полученных в пределах оптимальных параметров предложенного способа, показала, что ее уровень остается низким, варьируя от 10 до 15 мг белка/2 СH₅₀, что соответствует действующим требованиям, предъявляемым к внутривенным препаратам иммуноглобулина (Требования ВОЗ). П р и м е р. К 0,5 л плазмы крови человека при комнатной температуре добавляют 1,0 л ацетатного буфера (0,06 М, рН 4,0), коррегируют рН смеси до значения 4,8 с помощью 1,0 н. НСl. Затем капельно в смесь при постоянном перемешивании добавляют 250 мл 6,5%-ного раствора каприлата натрия, приготовленного на ацетатном буфере рН 4,8; выдерживают смесь без перемешивания в течение 60 мин при комнатной температуре и центрифугируют в режиме 3 тыс. об/мин в течение 30 мин. Повторное осаждение балластных белков проводят в указанном режиме после коррекции рН 1,0 н. раствором НСl до значения 5,7. Надосадок декантируют и диализуют против ацетатного буфера (0,015 М, рН 5,7) в течение 10 ч, затем обрабатывают диализат суспензией ДЕАЕ-целлюлозы в ацетатном буфере (0,015 М, рН 5,7), которую добавляют в соотношении 12,0 г влажного веса/г белка. Полученную смесь перемешивают в течение 60 мин при комнатной температуре, центрифугируют при 3 тыс. об/мин в течение 30 мин. В полученном надосадке устанавливают рН 7,2 с помощью 1,0 н. NaOH, а затем концентрируют белок в растворе до 7%. К концентрированному раствору белка иммуногло- булина добавляют аэросил А-380 из расчета 0,29 г сухого веса/г белка. После экспозиции смеси в течение 60 мин при постоянном перемешивании и комнатной температуре проводят ее центрифугирование при 3 тыс. об/мин в течение 30 мин. Конечный образец иммуноглобулина имеет концентрацию белка 5,0 ± 1,0%, рН 7,2, уровень антикомплементарной активности - 0,11 СH₅₀/мг белка, молекулярный состав: димеры менее 0,5%, фрагменты менее 0,5%, мономеры не менее 99%. Данные сопоставительного анализа изобретения с прототипом с использованием граничных значений параметров режима представлены в таблице. Таким образом получение иммуноглобулина по изобретению позволяет получить иммуноглобулин для внутривенного введения со сниженной антикомплементарной активностью в мономерной интактной форме в более короткий срок.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНА ДЛЯ ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ СО СНИЖЕННОЙ АНТИКОМПЛЕМЕНТАРНОЙ АКТИВНОСТЬЮ путем обработки плазмы крови человека фракционирующими агентами с последующей очисткой и лиофилизацией, отличающийся тем, что, с целью сокращения длительности процесса и повышения качества целевого продукта за счет получения его в мономерной интактной форме, в качестве фракционирующего агента применяют каприлат натрия в концентрации 6 - 7%, а очистку проводят хроматографией на ДЕАЕ-целлюлозе в концентрации 10 - 14 г/г белка с дополнительной обработкой аэросилом А-380 в концентрации 0,21 - 0,36 г/г белка.

РИСУНКИ

Рисунок 1

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Номер и год публикации бюллетеня: 32-2000

Извещение опубликовано: 20.11.2000        

---