Способ определения активности оксидаз смешанной функции печени

 

Использование: биохимия, биохимический анализ, медицина, оценка активности оксидаз печени. Сущность изобретения: анализируемую пробу мочи, полученной после нагрузки амидопирином, подкисляют раствором соляной кислоты, прибавляют нитрит калия иЗ-(« ,/ , -дикарбоксиэтил)роданин в конечной концентрации (2,) -(2,5 -10 ) М, смесь доводят до рН 12 и более, колориметрируют при 440 нм. Изобретение позволяет повысить чувствительность определения на 2 порядка. 3 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (я)л G 01 N 33/48, 33/50

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И СТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4814473/14 (22) 16.04.90 (46) 15,05.92. Бюл. N 18 (71) Львовский государственный медицинский институт (72) В.П, Сокольский, А,Ф, Мынка, И.И. Копийчук и А.И. Шкадова (53) 612,015(088.8) (56) Попов Т.А., Моненко О.Б. — Санитария и гигиена, 1977, ¹ 9, с. 58 — 59.

Изобретение относится к биохимии, а именно к биохимическому анализу, и может быть использовано для оценки активности оксидаз печени в биохимических и клинических лабораториях.

Цель изобретения — повышение чувствительности способа.

Способ осуществляют следующим образом, Анализируемую пробу мочи, полученной после нагрузки амидопирином, подкисляют раствором соляной кислоты, прибавляют водные растворы нитрита кал ия и 3-(а, j3, -дикарбоксиэтил)роданина, последний в конечной концентрации

2,5 10 — 2,5.10 М), хорошо смешивают и доводят раствор гидроксида калия до рН

".2, фотоколориметрируют при 440 нм.

Пример 1, Для определения 4-аминоантипирина 1 мл разведенной (1:10) мочи животных, принимавших внутрибрюшинную нагрузку амидопирина по 100 мг/кг... Ж, „1734016 А1 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ОКСИДАЗ СМЕШАННОЙ ФУНКЦИИ

ПЕЧЕНИ (57) Использование: биохимия, биохимический анализ, медицина, оценка активности оксидаз печени. Сущность изобретения: анализируемую пробу мочи, полученной после нагрузки амидопирином, подкисляют раствором соляной кислоты, прибавляют нитрит калия и 3-(а,P, -дикарбоксиэтил)роданин в конечной концентрации (2,5 10 )

-(2,5.10 ) М, смесь доводят до рН 12 и более, колориметрируют при 440 нм. Изобретение позволяет повысить чувствительность определения на 2 порядка. 3 табл. массы, подкисляют 1 мл 2 M раствора соляной кислоты, прибавляют 1 мл 0,17-ного раствора нитрита калия, 1 мл 4-10 М раствора 3-(а, Р, -дикарбоксизтил)роданина (конечная концентрация 10 М), хорошо смешивают и через 3 — 5 мин прибавляют около 2 мл 207, -ного раствора гидроксида калия рН 12. Полученный окрашенный раствор колориметрируют на фотоколориметре

КФК-2 при А = 440 нм в кювете толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют холостой опыт, Содержание 4-аминоантипирина расD — а считывают по формуле: С=

b, где

D — оптическая плотность на основании математической обработки калибровочной кривой методов HBMMBHbLUNx квадратов.

Для определения N-ацетил-4-аминоантипирина 1 мл разведенной мочи животных, принимавших аналогичную нагрузку, прибавляют 0,2 мл концентрированной соляной

Таблица1

Взято мкг/мл

Найдено

Метрологические характеристики о мкгlмл

4 - Аминоантипирин

5,0 0,327

Х =99,4 /о у= 1,58

101,57

5,079

5,0 0,316

5,0 0,314

5,0 0,318

5,0 0,323

98,39

4,920

97,75

4,888

0х = 0,71

99,02

4,951

)> = 1,96

А=1,97

100,61

5,031 а=99,47+1,96 /

N - Ацетил - 4 - аминоантипирин

5,0 0,311

Х =99,94 /о о= 2,18

96,63

4,832

101,72

100,77

101,72

5,086

5,0 0,327

5,0 0,324

5,039 гтх = 0,98 lp = 2,71

РА = 2,71 а = 99,94 + 2,71, 5,086

98,86

4,948 кислоты, нагревают на кипящей водяной бане на протяжении 15 мин и после охлаждения проводят аналогичные операции как при определении 4-аминоантипирина. Результаты определения приведены в табл. 1.

Пример 2. Для определения 4-аминоантипирина 1 мл разведенной (1:10) мочи животных, принимавших внутрибрюшинную нагрузку амидопирина по 100 мг/кг массы, подкисляют 1 мл 2 М раствора соляной кислоты, и рибавля ют 1 мл 0,1 / -ного раствора нитрита калия, 1 мл 10 М раствора 3-(а, Р, -дикарбоксиэтил)роданина (конечная концентрация 2,5 10 М) и дальше поступают так, как описано в примере 1.

Результаты определения приведены в табл, 2, Пример 3. Определение метаболитов амидопирина в моче при максимальной концентрации цветореагентэ. Для определения 4-аминоантипирина 1 мл разведенной (1:10) мочи животных, принимавших внутрибрюшинную нагрузку амидопирина по 100 мг/кг массы, подкисляют 1 мл 2 М раствора соляной кислоты, прибавляют 1 мл 0,1 /-ного раствора нитрита калия, 1 мл 10 М раст в о р а 3-(а, Р, -дикарбоксиэтил) роданинэ (конечная концентрация 2,5 10 М) и дальше поступают аналогично примеру 1. Результаты определения приведены в табл, 3, 5 Чувствительность по предлагаемому способу составляет 10 мкг метаболита амидопирина в 10 мкг конечного объема, что в

77 раз выше чем по прототипу.

10 Формула изобретения

Способ определения активности оксидаз смешанной функции печени, включающий нагрузку амидопирином, отбор пробы мочи, добавление к ней цветообразующего

15 реагента и колориметрическое определение продукта реакции реагента с метаболитами амидопирина,отл и чаю щийся тем,что, с целью повышения чувствительности способа, анализируемую пробу подкисляют со20 ляной кислотой, добавляют нитрит калия, в качестве цветообразующего реагента используют 3-(а, Р -дикарбоксизтил)роданин в конечной концентрации 2,5-10 — 2,5 10 з

М, затем рН реакционной смеси доводят до

25 12 и более, а колориметрирование проводят при 440 нм.

Табл ица2

ТаблицаЗ