Способ определения микобактерий м. воvis, м. тuвеrсulаsis

 

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, в частности к лабораторным способам определения микроорганизмов, и может быть использовано для определения микробактерий туберкулеза. Цель изобретения - повышение специфичности и упрощение способа достигается за счет проведения газохроматографического анализа и определения содержания гексакозановой и тетракозановой кислот и при их соотношении больше единицы определяют наличие микобактерий в патологическом материале.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4799805/14 (22) 06,03,90 (46) 23.05.92. Бюл. ¹ 19 (71) Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечерноземной зоны РСФСР (72) А.Л.Лазовская, Л.M,Ïèí÷óê, О.Ф.Рачкова и M.Ë.Òèõîìèðîâà (53) 612.015 (088.8) (56) Информационный листок Горьковского

ЦНТИ № 68 — 88, 1976. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКОБАКТЕРИЙ М, BOVIS, M. TUBERCULOSIS

Изобретение относится к области ветеринарии и медицины, в частности к лабораторным способам идентификации микроорганизмов, и может быть использовано для идентификации микобактерий туберкулеза.

Цель изобретения — повышение специфичности и упрощение способа, Способ осуществляется следующим образом.

Патологический материал засевают.на селективную среду Левенштейна-Иенсена.

Визуально проверяют чистоту культуры и делают мазок с окраской по Цилю-Нильсену. У выросших в темноте при 37 С культур определяют характер пигментации.

Культуры со среды Левенштейна-Иенсена пересевают на картофельно-глицериновую среду Павловского и инкубируют в течение 1 — 2 нед. при 37 С. Анализ бактериальной массы со среды Павловского позволяет получать стабильные жирнокислотные спектры различных видов микобактерий, 5,0-10,0 мг микробной массы петлей переносят в стеклянную ампулу и добавляют несколько капель (0,1 — 0,2 мл) 7 (,-ного рас„„5U „„1735778 А1 (si)s G 01 N 33/49 // G 01 и 30/02 (57) Изобретение относится к медицине и ветеринарии, в частности к лабораторным способам определения микроорганизмов, и может быть использовано для определения микробактерий туберкулеза. Цель изобретения — повышение специфичности и упрощение способа достигается за счет проведения газохроматографического анализа и определения содержания гексакозановой и тетракозановой кислот и при их соотношении больше единицы определяют наличие микобактерий в патологическом материале. твора гидроокиси тетраметиламмония в метиловом спирте. Ампулу запаивают и програвают при 110 — 120 С в течение 20 — 30 мин. Под действием гидроокиси тетраметиламмония происходит гидролиз липидов и метилирование жирных кислот.

Для хроматографического анализа используют две стальные колонки 2 м х 3 мм.

Колонки заполняют целитом — 545 с нанесенной на него жидкой фазой — 7% апиезона

L, Приготовление сорбента и заполнение колонок проводят по общепринятым методам.

Хроматографический анализ проводят на газожидкостном хроматографе марки

"Цвет" с пламенно-ионизационным детектором при следующих рабочих параметрах: температура термостата колонок в режиме программирования от 180 до 280 С при скорости нагрева 8 С/мин; температура испарителя 370 С; расход газа-носителя и водорода 2,4 л/ч, воздуха 25 л/ч. Пробу в количестве 2,0 — 5,0 мкл анализируемого материала вводят в испаритель.

На хроматограммах микобактерий выявляются жирные кислоты с алифатической цепью, содержащей от 12 до 26 атомов угле1735778

Формула изобретения

Способ определения микобактерий М, bovis и М. tuberculosis в биологической про15

25

35

50

Составитель С. Рыбалкин

Техред М.Моргентал Корректор М.Максимишинец

Редактор Е.Папп

Заказ 1813 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул,Гагарина, 101 рода. Основным отличительным признаком для микобактерий является наличие жирных кислот с числом атомов углерода выше 20— тетракозановая кистота (Czq;p), гексакозановая (С26:0).

Предлагаемый способ в отличие от известного позволяет проводить определение в контаминированных другими микроорганизмами культуральных микобактерий. бе путем посева биологической пробы на твердую яичную среду, инкубации с последующим проведением газохроматографического анализа препарата культуры клеток и

5 регистрациией маркерного вещества, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повышения специфичности и упрощения способа, в качестве маркерного вещества используют гексакозановую и тетракозановую кислоты

10 и при соотношении их содержания в препарате больше 1 определяют наличие микобактерий М. bovis или М, tuberculosis в биологической пробе.