Способ дифференциации пневмококка от зеленящего стрептококка

 

Использование: медицинская микробиология , диагностика, дифференциация пневмококков от других&Ј-гемолитических (зеленящих) стрептококков. Сущность изобретения: в качестве среды для дифференциации используется полужидкая питательная среда для , . контроля стерильности следующего состава , г/л: ферментативный гидролиэат казеина 15, витаминный препарат ЭКД 5; натрий хлористый б, глюкоза медицинская 5,0; тиогликолят натрия 0,5; цистеин дигидрохлорид 0,75{ агар порошкообразный 0,6; натрий углекислый 0,5-0,95. Среда является коммерческим препаратом и выпускается в виде сухого порошка. Пневмококки дифференцируют по особенному для них стреловидному, однородной оптической плотности характеру роста в толще . данной среды.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СО ЦИАЛ И СТИЧ ЕС К ИХ

РЕСПУБЛИК (!9) (1!) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н A BTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ CCCP) (21) 4900174/13 (22) 08.01.91 (46) 30.11.92. Бюл. 1". 44 (71) Львовский научно-исследовательский институт эпидемиологии и гигиены (72) Л.В.Колотилова (56) Авторское свидетельство СССР

1." 1222674, кл. С 12 11 1/00, 1983. (54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ПНЕВМОКОККА ОТ ЗЕЛЕНЯЦ ЕГО СТРЕПТОКОККА (57) Использование: медицинская микробиология, диагностика, дифференциация пневмококков от других р -гемолитических (зеленящих) стрептококков.

Сущность изобретения: в качестве среИзобретение относится к медицинской микробиологии, а именно, к способу дифференциации пневмококков от других 0С гемолитических (зеленящих) стрептококков.

Известен способ дифференциации пневмококков от других зеленящих . стрептококков, при котором исследуемые штаммы засеваются Hd агар с 59 крови барана с одновременным подсевом стабилококка, образующего непол" ный гемолиз бараньих эритроцитов.

После 20-24 часов инкубации при 37 С учитывается характер гемолиза вокруг стафилококка, в секторе роста пневмококка происходит усиление гемоли. за, в отличие от других о4-гемолити,ческих стрептококков, не изменяющих характер гемолиза.

Однако, предложенный способ имеет ряд существенных недостатков:

{51) 5 С 12 1 l/00, С 12 q 1/00 ды для дифференциации используется полужидкая питательная среда для . контроля стерильности следующего состава, г/л: ферментативный гидролизат казеина 15; витаминный препарат ЭКД

5; натрий хлористый 6,4, глюкоза медицинская 5,0; тиогликолят натрия

0,5; цистеин дигидрохлорид 0,75; агар порошкообразный 0,6, натрий углекислый 0,5-0,95. Среда является коммерческим препаратом и выпускается в виде сухого порошка . Пневмококки дифференцируют по особенному для них стреловидному, однородной оптической плотности характеру роста в толще . данной среды.

- около 103 штаммов Streptococcus

: pneumoniae не дают зоны усиления гемолиза в первые 24 часа;

- необходима свежая баранья кровь, что представляет определенные трудности для большинства практических лабораторий. Применение эритроцитов человека снижает эффективность ро 5-103; i

-. требует постоянного поддержания музейных штаммов гемолитического ста- филококка, на что дополнительно расходуются питательные среды, в том числе и дефицитная кровь.

Цель изобретения - упрощение и ускорение дифференциации пневмококков от других зеленящих стрептококков.

ЭТо достигается тем, что посев исследуемых колоний производят на полужидкую питательную среду для контроля стерильности следующего соста,ва, г/л:

)770179

Ферментативный гидролизат казеина 15

Витаминный препарат

ВКП 5

Натрий хлористый 6,4

Глюкоза медицинская 5,0

Тиогликолят натрия 0,5

Цистеин дигидрохлорид 0,75

Агар порошкообразный 0,6

Натрий углекислый 0,5-0,95

Данная среда является коммерческим препаратом и выпускается в виде сухоro порошка Предприятием Центрального

НИИ вакцин и сывороток им. И.И.чечни- 1r кова под названием: "Среда питательная, для контроля стерильности, сухая", Через 18-24 ч посевы просматривают. Из всех видов зеленящих стрепто- 20 кокков только для Str pneumoniae характерны следующие особенности," рост наблюдается в виде локального, гомогенного слабого помутнения среды, форма которого напоминает стрелу, 25 расположенную острием вверх, толц иной до 2 мм и длиной от 4 мм и более.

Зона роста четко ограничена, равномерной оптической плотности. Несколько таких."стрел" могут соединяться у основания в нижней части пробирки, образуя сплошную зону помутнения среды B виде облака, с четкой локализацией, такой же консистенции, как и у

"стрел" и также без каких-либо флуктуаций оптической плотности. Рост других видов Ы-гемолитических стрептококков в данной среде отличается либо за счет роста в виде облака при отсутствии стреловидного роста, либо за счет наличия в зоне роста оптичес40 ки плотных включений (размерами от мельчайших, на грани видимости, до крупных - диаметром до 2-3 мм и бо- . лее) .

Пример. Приготовленную согласно инструкции завода-изготовителя коммерческую среду разливают по про- биркам по 5-7 мл. Отобранные колонии, подозрительные на пневмококк, засевают петлей в толщу среды на -глубину

3/4 заполненного об ьема от верхнего края среды. После 18-24 часов инкубации при 37 С посевы просматривают. о

Рост культуры в виде характерного стреловидного. помутнения среды однородной оптической плотности свидетельствует о росте пневмококка. Такие культуры микроскопируют, испытывают на чувствительность к желчи и в реакции аглютинации со специфической сывороткой. Итаммы, способные образовывать в зоне роста различного диаметра оптически плотные структуры, а также те, рост которых в данной среде проходит в виде облаковидного помутнения без наличия стреловидных выростов исключают из дальнейших анализов.

Автором было испытано 134 эталонных и свежевыделенных штаммов пневмококка, а также эталонных и свежевыделенных штаммов микроорганизмов следуюц их видов: Str.mitis, Str.sanquis, Str.mutans, Str.anI;inosus в общем количестве 347 экземпляров. Посев про- . изводился параллельно на две пробирки. Ни в одном случае характер роста микроорганизмов, не принадлежащих к виду Str.pneumoniae не соответствовал вышеописанному. В то же время из 134 штаммов пневмококка лишь у семи (54) рост в одной из двух пробирок не был характерен для данного вида, что проявилось отсутствием стреловидного роста.

Таким образом, предлагаемый способ дифференциации пневмококка от золотистого стрептококка путем пересева подозрительных колоний на среду для контроля стерильности существенно суживает поиск пневмококковых культур, обладает высокой чувствительностью, достаточно экономичен, не требует дополнительных средств., приборов и реактивов. В частности, по сравнению с прототипом, данный способ более, чувствителен, исключает необходимость поддержания музейных культур гемолитического стафипококка и наличие свежей бараньей крови. Приготовление питательной среды на основе комерческого препарата не требует больших затрат времени, а готовая и разлитая по пробиркам среда способна длительное время (до двух месяцев) сохраняться в холодильнике при 4 С. Способ может широко использоваться в практических лабораториях при этиологической расшифровке заболеваний, обусловленных пневмококками.Ф о р и у л а изобретения

Способ дифференциации пневмококка от зеленящего стрептококка путем посева исследуемого материала на элективную среду, инкубирования с последующей идентификацией культур по хаСоставитель

Редактор Л.Павлова Техред

Л.Колотилова

Корректор Т;Палий

»» «»»»»

Заказ 4165 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101

5 1778179 6 рактеру роста, о т л и ч а ю щ и и - посев осуществляют в толщу среды и с я тем, что, с целью упрощения и. при стреловидном оптически однородном ускорения способа, в качестве элек- помутнении среды культуру идентиФицитивной среды используют среду пита- . руют как пневмококк, а при отсутствии

5 тельную для контроля стерильности, такого как эеленящии стрептококк.