Способ определения активности церулоплазмина в сыворотке крови

 

Использование: биология и медицина. Сущность изобретения: в ацетатный буфер в качестве консерванта вносят бромистый 2-трифенилфосфонио метил нафталин из расчета 0,5-1,25 г/л буфера. Исследуемую сыворотку смешивают с подготовленным заранее буфером. К анализируемой пробе последовательно добавляют сулофат натрия и n-фенилендиамин, термостатируют ее. Затем вносят в нее н-бутанол и выдерживают на холоде. Измеряют спектр поглощения в бутаноловой фракции, по которому оценивают результаты. Используемый консервант одновременно сохраняет срок годности буфера и активность церулоплазмина. 1 табл

союз соВетских социАлистических

РЕСПУБЛИК (si>s G 01 N 33/48, С 12 0 1/26

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4869817/13 (22) 25.09,90 (46) 30.11.92. Бюл. ¹ 44 (71) Черновицкий государственн ый университет (72) И,В.Merepa, Г.М.Ярмольчук и Б.M,Ãoðшинский (56) Авторское свидетельство СССР

N. 1273800, кл. G 01 N 33/48, 1984, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ЦЕРУЛОПЛАЗМИНА B СЫВОРОТКЕ

КРОВИ (57) Использование: биология и медицина, Сущность изобретения: в ацетатный буфер

Изобретение относится к биохимии, в частности к лабораторной практике и клиническим лабораторным исследованиям, Известен способ определения активно- . сти церулоплазмина, недостатком которого является необходимость каждый раз при определении активности церулоплаэмина готовить свежий ацетатный буфер, Целью изобретения является упрощение способа эа счет использования консерванта 6ромистого

2-трифенилфосфониометилнафталина (БТФН), который растворяют в ацетатном буфере, а исследуемую пробу вносят непосредственно в полученный раствор.

Способ осуществляется следующим образом.

В две опытные и одну контрольную пробирки вносят по 2 мл ацетатного буфера, содержащего 0,5-1,25 г/л БТФН и 0,1 мл исследуемой биологической жидкости. Пробы взбалтывают, закрывают резиновыми пробками и помещают на хранение 8 холодильник при 5-10 С, В последующие 30 дней

„„5U,, 1778695 А1 в качестве консерванта вносят бромистый

2-трифениRôосфониометилнафталин из расчета 0,5 — 1,25 г/л буфера. Исследуемую сыворотку смешивают с подготовленным заранее буфером. К анализируемой пробе последовательно добавляют сульфат натрия и п-фенилендиамин, термостатируют ее. Затем вносят в нее н-бутанол и выдерживают на холоде. Измеряют спектр поглощения в бутаноловой фракции, по которому оценивают результаты. Используемый консервант одновременно сохраняет срок годности буфера и активность церулоплазмина, 1 табл. аналогично подготовленные пробы накапливают в холодильнике. На 30-ый день или в любой удобный для работника день, но не позже 30-го дня, определяют активность церулоплазмина во всех пробах, на что затрачивается значительно меньше рабочего времени, Пример. В две опытные и одну контрольную пробирки вносят по 2 Mll ацетатного буфера, содержащего 0,75 г/л

БТФН, и по 0,1 мл исследуемой биологической жидкости. Пробы взбалтывают, закрывают резиновыми пробками и помещают на хранение в холодильник при 5 — 10 С, В последующие 30-и дней аналогично подготовленные пробы накапливают в холодильнике, На 30-й или в любой удобный для работника день, но не позже 30-го дня, определяют акгивность церулоплаэмина во всех накопившихся пробах, для чего в контрольные пробирки добавляют 1 мл раствора сульфита натрия и взбалтывают их содержимое. Во все пробирки вносят по 1 мл и-фенилендиамина, встряхивают и помещают их

1778695 в водяной ультратермостат с температурой

37 С на 60 мин„взбалтывая их через каж. дые 3-5 мин. При этом царулоплаэмин взаимодействует с и-фенилендиамином и превращает его в продукт синего цвета. Через I ч во все пробирки приливают,по 7 мо н-бутилового спирта, в результате чего останавливается ферментативная реакция в опытных пробирках, Пробирки закрывают пробками, интенсивно встряхивают

30-40 с., помещают в ледяную баню на

10 минут, после чего центрифугируют со скоростью 1,500 об/мин в течение 10 мин, отсасывают верхнюю бутаноловую фазу, переносят ее в кювету с толщиной рабочего слоя 10 мм и колориметрируют на ФЭК при длине световой волны 582 нм (фильтр N. 7).

Для выражения активности церулоплаэмина в условных единицах среднюю арифметическую величину экстинкции. полученную при колориметрии двух параллельных опытных проб против контроля, умножают на

100 и делят на количество миллиграммов .белка, содержащегося в 0,1 мл биологической жидкости, Содержание белка определяют по одной из известных методик.

В таблице приведены экстинкции, полученные по предлагаемому способу в разные сроки хранения проб, состоящих иэ 2 мл ацетатного буфера, содержащего 0,25—

1,5 г/л БТФН и 0,1 мл сыворотки крови.

Экстинкции активности церулоплазм

Проведенные эксперименты в процессе испытаний предлагаемого способа подтверждают его экономический эффект, выражающийся в значительном снижении

5 себестоимости одного анализа на активность церулоплазмина. Использование предлагаемого способа существенно экономит рабочее время сотрудника, а также затраты электроэнергии, химреактивов и

10 облегчает выполнение научной и практической работы.

Формула изобретения

Способ определения активности церу15 лоплазмина в сыворотке крови, включающий смешивание исследуемой пробы, . консерванта и ацетатного буфера, добавлеwe к смеси раствора сульфата натрия, внесение п-фенилендиамина, 20 термостатирование ее с последующим добавлением н-бутанола, выдерживанием на холоде, отделением бутаноловой фазы, измерением ее спектра поглощения и оценкой результатов, отличающийся тем, что, 25 с целью упрощения способа, в качестве консерванта используют бромистый 2-трифе- нилфосфониометилнафталин, который предварительно растворяют в ацетатном буфере иэ расчета 0,5-1,25 г/л буфера, а

30 исследуемую npoby вносят непосредственно в полученный раствор консерванта. ина, полученные по заявляемому способу

Концентрация БТФН в ацетатном буфере, г/л

С оК х анения в няк

В день заб.

20. 25 эо

40

Î47 о.оэ

<0.02

0.60 о.оз

>0.5

О.61 о,оэ

>0.5

0,59

О,ОЭ

>0.5

0.59

0,02

>0.5

0.63

0.05

>0,5

0.06

0,О1

<О.О1

0,14

О,О1

<О,01 а,44

0.02

<О,О1 о,зт

0.04

«0,О1

0.35

0.04

<О.О1

0.25

0,04

<О.О1

Без М

Б.ТФН +щ р

0,25 M г/л +тл р

0.5 М г/л m

0,75 М г/л m

1,25 М г/л rn

1,5 М г/л ".гл

0,62

0,04

0.62

О.О4

О.62

0,04 о:бг

О.аа

0,62 0,05

0,62

О.ОЭ

0,55

o,îç

> 0,5

0,б4

0,04

>0,5

0,62 а,оэ

>05

0.62 о.оэ

>О.ь

0.63

О,ОЗ

- >o,s 0,61

0,04

>Оь

0.24

0,02

<О.01

0.56

0.04

>а.1

0.62

0,04

>o,ь

О,62

О.ОЭ

>0,5

0,62 о,оэ

>0.5

0,42

О,04

<о,а1

0,15

О,О1

<О,01

0.49 а,оз

<О,O1

0,63 а,о4

>0,5 о,бь

О,О3

О,Ь

О,б2

0,04

>05

0,43

О,02

<О.О1

0,12

О.О1

<О.01 о.зэ

0.04

<О.О1

0,63

o,îç

>0.5

0,63

0.04

>0,5

0,63

0,04

>0,5

0,41 оли

<О.01

О,09

О.О1

<О.О1

0,22 о.оз

<О.О1

0.63 а.о4

>0,5

0,63

О.ОЗ

>0,5

0,63 о,оэ

>Об

0.38

О.О1

<О.О1

О.О7

О.О1

<О.О1

017

О.О1

<0.01

o,ьз

>О,1

0,47

0,04

<0,05

0,42

О,О4

<0.02

0.39

îos

<О,О1

П р и м е ч а н и е. M — средняя величина, полученная пут ем статистическои обработки

+т — средняя ошибка средней величины;

p — показатель достоверности.

Составитель И, Мегера

Техред М,Моргентал Корректор Е, Папп

Редактор

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 4191 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

1 13035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5