Штамм бактерий bacillus тнuringiеnsis для изготовления энтомопатогенного препарата

 

Использование: микробиологическая промышленность, производство энтомопатогенных препаратов для борьбы с кровососущими комарами и саранчовыми и касается нового штамма бактерий для производства вышеуказанных препаратов, Сущность изобретения: штамм бактерий Bacillus thuringiensis выделен из погибшей личинки комара Culex pipiens, депонирован в ВКМ генетики под № В-5383. Для изготовления препарата штамм выращивают на среде (мае. %): кормовые дрожжи 2; пептон 5; кукурузная мука 1; хлористый натрий 0,5; однозамещенный фосфорнокислый калий 0,1; вода до 100%, при 28°С в течение 28-30 ч, титр спор после культивирования 2,3-109 спор/мл. :

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК ф .Ь

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ CCCP) К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4922616/13 (22) 28.01.91 (46) 15.02.93. Бюл. hb 6 (71) Институт зоологии AH КазССР (72) А.М,Дубицкий, У.Б.Узденов, В.Н.Давыдов, Н.Э.Березина, Т.С.Кобец, Тина-тин Доолеткельдиева и Г.В,Семенченко (66) Авторское свидетельство СССР .

М 1135024, кл, А 01 N 63/00, 1980;. (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ BACILLUS

ТНУВ1МИЕКЖЯ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ

ЭНТОМОПАТОГЕННОГО ПРЕПАРАТА (57) Использование: микробиологическая промышленность, производство энтомопаИзобретение относится к микробиологической промышленности и представляет собой новый штамм бактерий, который может быть использован для производства препарата, применяемого для борьбы с кровососущими комарами и саранчовыми.

Для борьбы с вредителями сельского и лесного хозяйства широко примейяют штаммы Bacillus thuringfensis. Известны штаммы В. thuringiensis, обладающие ларвицидными свойствами для личинок кровососущих комаров. .Однако среди большого числа вредных насекомых, поражаемых всеми известными штаммами В. thuringlensls нет представителей прямокрылых — саранчи, вредоносное значение которых нет необходимости доказывать.

Прототипом предлагаемого изобретения может служить штамм В. thuringiensis (Н-14) N 71, являющийся основой для изготовления препарата бактокулицида, эффек Ы 1794434 А1 (5t)5 А 01 N 63/00, С 12 и 1/20 тогенных препаратов для борьбы с кровососущими комарами и саранчовыми и касается нового штамма бактерий для производства вышеуказанных препаратов.

Сущность изобретения: штамм бактерий

BacitIus thuringiensis выделен из погибшей личинки комара Culex pipiens, депонирован в ВКМ генетики под М В-5383. Для изготовления препарата штамм выращивают на среде (мас,$): кормовые дрожжи 2; пептон

5; кукурузная мука 1; хлористый натрий 0,5; однозамещенный фосфорнокислый калий 0,1; вода до 100/„, при 28 С в течение

28-30 ч, титр спор после культивирования

2,3 109 спор/мл. тивного против личинок кровососущих комаров.

Однако этот штамм действует только на одну группу. насекомых.

Целью изобретения является штамм В, thuringIensis,îáëàäàþùèé высокой энтомоцидной активностью по отношению к кровососущим комарам и к таким злостным вредителям сельского хозяйства как саранчовые.

Штамм ЛБК-145 выделен в 1988 r, из погибшей личинки комара Culex pipiens.

Штамм Bacillus thuringiensis ЛБК-145 депонирован в коллекции Центрального музея промышленных микроорганизмов

ВНИИ генетика под номером В-5383 и характеризуется следующими морфологическими и физиолого-биохимическими свойствами.

Вегетативные клетки палочковидной формы. подвижные, одиночные или в цепочках, размером (3,0-5,5) х (0,8-1,2), перитрихи, споры овальные, размером (1,2 — 1,7) х

1794434

По физиологическим свойствам отличается от В, thuringiensis Н-14 тем, что усваивает салицин и эскулин, не образует пигмент, По инсектицидной активности отличается тем, что заявляемый штамм действует не только на личинок кровососущих комаров, но и на саранчовых.

Пример. Штамм В, thuringiensis

ЛБК-145 культивировали ía среде следующего состава; кормовые дрожжи 2 (мас, /); пептон 5; кукурузная мука 1: NaCI 0,5;

К2НРО4 0,1, вода до 1000 мл. Конечная реакция среды рН-7,2.

B качестве посевного материала использовали водную суспензию споровой 3дневной культуры, которую вносили в 0,5 л колбы; содержащие 50 мл среды, Культивировали на круговой качалке при 220 об/мин и+ 28ОC в течение 28 — 30 ч. Титр спор, подсчитанный с помощью камеры Горяева, находился в пределах 2,3 10 спор/мл.

Отношение к источникам азота. Использует аммонийные и нитратные формы азота, Нитраты восстанавливает. Усваивает азотные соединения, входящие в состав кукурузного экстракта, мясной воды, пептона.

Условия хранения — в виде лиофильно высушенной культуры в запаянных ампулах.

Патогенность для личинок комаров изу30 чалась íà II III стадии Culex pipiens, Aedes

aegipty, Anopheles stephensi. В 100 мл воды помещали 25 личинок и вносили суспензию клеток и спор испытуемого штамма, Результаты гибели отмечали через 24 и 48 ч.

Патогенность штамма для саранчи проверялась на насекомых И стадии, помещенных в проволочные садки по 5 особей, Листья растений обрабатывали суспензией клеток и спор бактериальной культуры и

40 скармливали саранче. Затем обрабатывали, подкармливали необработанными растени-. ями. Наблюдения проводили в течение 7 суток, Штамм, выбранный в качестве прототи45 па, эффективен только против личинок комаров, Предлагаемый штамм вызывает гибель и личинок комаров и саранчи.

Формула изобретения

Штамм бактерий Bacillus

thvrlngiensls ВКПМ В-5383 для

55 х(0,7-1,1), спорангии не расширяют. При споруляции образуются параспоральные включения различной формы — ромбовидные, кубические, неправильные четырехгранники. Преобладают .кристаллы ромбовидной формы.

Хорошо растет на мясопептонном агаре (МПА), рыбопептонном агаре (РПА) и других питательных средах с добавлением пептона и дрожжевого или кукурузного экстракта;

На РПА образует матово-белые плоские колонии с изрезанными краями пастообразной консистенции. На рыбопептонном агаре образует пленку. Факультативный анаэроб. На желточной среде, ломтиках картофеля и среде с добавлением БВК пигмент не образует, Растет на РПА с добавлением

7% NaCI. Оптимальная температура роста

28 — 30 С.

Штамм продуцирует каталазу, гидролизует казеин, крахмал, тирозин и разжижает желатину. Уреазополо>кительный, Образует ацетилметилкарбинол и лецитиназу. Усваивает эскулин, салицин, глюкозу с образованием кислоты без газа. Не образует кислоты и газа из мальтозы, целлобиозы, маннозы, лактозы, галактозы, рамнозы, сахарозы.

Сероводород и индол не образует.

Не агглютинируется типовыми антисыворотками 27 серотипов В. thuringiensis, полученными из Института Пастера (Париж).

Не чувствителен к пенициллину, полимиксину, чувствителен к эритромицину, стрептомицину, мономицину, неомицину, левомицитину, Вызывает 100% гибель личинок комаров Aedes aegypti, Culex piplens, Anopheles

stephensi при использовании суспензии бактериальной культуры в концентрации

2,3 10 спор/мл. Вызывает 1007, гибель саранчи Chorthippus apricarius, Chorthippus

dIchrous при использовании суспензии бактериальной культуры в концентрации 10 спор/мл. изготовления энтомопатоген ного препарата,