Штамм актиномицета sтrертомyсеs violaceoniger для получения нигроцида активного против фитопатогенной микрофлоры

 

Использование: микробиологическая промышленность, производство средств защиты растений от возбудителей заболеваний , в частности антибиотика нигроцида. Сущность изобретения: штамм актиномицета Streptomyces violaceonlgerBKM Ac- 1287 культивируют на среде состава, мае. %: кукурузный экстракт 1; крахмал 1,5: глюкоза 0,5; сернокислый аммоний 0,35, хлористый натрий 0,5, углекислый кальций 0,5, вода остальное в течение 3-4 сут, затем культуральную жидкость прогревают при 70-75°С в течение 10 мин и высушивают. Выход нигроцида 12-16 г/л, активность 1000 ед./разв - по отношению к Candida albicans и 620 ед./разв. - по отношению к Staphylococcus aureus 209P, Препарат активен против фитопатогенных грибов рода Botrytis, Fusarium, Scierotinla,бактерий Corynebacterium, Pseudomonas и др. 3 табл.

союз соВетских социАлистических

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

BEÄÎÌÑÒBO СССР (ГосГ1Атент сссР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4775744/13 (22) 29.12,89 (46) 07.02,93. Бюл. ¹ 5 (71) Институт микробиологии АН СССР и

Всесоюзный научно-исследовательский институт селекции и семеноводства овощных культур (72) В, Д, Кузнецов, А. В. Кудрявцева, С. Н.

Шкляр и А. Ф. Агафонов (56) Петрухина М, Т, и др, Фитобактериомицин - отечественный антибиотик для защиты растений, обзор ОНТИТЭИ микробиопром, 1973.

Гарбузов А. В.,Масловский К. С, Вопросы стандартизации и качества препаратов антибиотиков, немедицинского назначения. Сборник "Разработка и применение антибиотиков немедицинского назначения", ill-я Всесоюзная конференция, M., 1987, (54) ШТАММ АКТИ НОМИ ЦЕТА

STREPT0MYCES VlOLACEONlGER — ДЛЯ

ПОЛУЧЕНИЯ НИГРОЦИДА АКТИВНОГО

Изобретение относится к микробиологический промышленности и касается получения высокоактивного штамма а ктиномицета — продуцента антибиотиков для защиты растений.

Для защиты растений от болезней в настоящее время применяют как пестициды, так и антибиотики, Преимущество последних состоит в том, что они являются природными соединениями и в противоположность пестицидам, сравнительно быстро разлагаются в почве, не оказывая отрицательного влияния на окружающую среду.,. Ж„„1792614 А1

tstis А 01 N 63/00, С 12 N 1/14

ПРОТИВ ФИТОПАТОГЕННОЙ МИКРОФЛОРЫ (57) Использование: микробиологическая промышленность, производство средств защиты растений от возбудителей заболеваний, в частности антибиотика нигроцида.

Сущность изобретения: штамм актиномицета Streptomyces violaceonlger BKM Ас — 1287 культивируют на среде состава, мас.,ь: кукурузный экстракт 1; крахмал 1,5; глюкоза 0,5; сернокислый аммоний 0,35, хлористый натрий 0,5, углекислый кальций 0,5, вода остальное в течение 3 — 4 сут, затем культуральную жидкость прогревают при

70 — 75 С в течение 10 мин и высушивают, Выход нигроцида 12 — 16 г/л, активность

1000 ед./разв — по отношению к Candida

albicans и 620 ед./разв. — по отношению к

Staphylococcus aureus 209Р, Препарат активен против фитопатогенных грибов рода

Botrytis, Fusarium, Sclегоtinia,бактерий

Corynebacterium, Pseudomonas и др, 3 табл.

Известно более 10-ти антибиотических препаратов для растениеводства, выпуск которых освоен в Японии, где наиболее интенсивно ведутся работы в этой области.

Для этой цели используются два препарата — фитобактериомицин и трихатецин, Известен штамм Streptomyces lavendulae 696 продуцент фитобактериомицина и продуцент трихотецина — гриб Trichotheclum

roseum.

Целью изобретения является получение нового высокоактивного штамма актиномицета для получения антибиотического препарата нигроцида, активного против

1792614 фитопатогенной микрофлоры, вызывающей заболевания сельскохозяйственных культур, в частности репчатого лука, гвоздики ремонтантной и др, В научной и патентной литературе не было обнаружено сведений о применении антибиотических препаратов для борьбы с грибными и бактериальными болезнями данных культур, а также о применении заявляемого вида актиномицета для защиты растений.

Нигроцид обладает широким спектром антимикробного действия и по сравнению с фитобактериомицином обладает более высокой активностью по отношению к.грибам и грамположительным бактериям (табл. 1).

Кроме того, фитобактериомицин принадлежит к группе антибиотиков-аминогликозидов, к которой относится целый ряд медицинских антибиотиков (стрептомицин, канамицин, гентамицин и др,). В связи с этим, применение фитобактериомицина может привести к возникновению и распространению в природе перекрестно устойчивых K указанным медицинским антибиотикам форм патогенных микроорганизмов. Что касается трихоцетина, то он обладает только противогрибной активное».-.ю и не подавляет рост фитопатогенных бактерий. Наконец, длительное примене ие одних и тех же антибиотиков приводит постепенному снижению их эффективности, Предлагаемый штамм актиномицета

Streptomyces vtolaseoniger 1420 — 2 получен путем селекции из гомологического ряда

cnонтаннblх вариантов популяции исходной культуры, Штамм депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов под номером ВКМ Ас-1287Д. При описании культурально-морфологических свойств испольэовали 14-суточные культуры, выращенные на овсяном агаре при 28":1 С, Культуральные свойства S, violaseoniger

OKM Ас-1287Д представлены в табл. 2.

Морфологические свойства, Спороносцы спиральные, споры овальные, поверхность спор гладкая.

Физиолого-биохимические свойства, Азроб, мезофил, Крахмал гидролизует, молоко коагулирует и пептонизирует,желатину разжижает, нитраты не восстанавливает, меланоидных пигментов не образует, В качестве единственных источников углерода потребляет глюкозу, инозит, арабинозу, рамнозу, ксилозу, фруктозу, маннит, Слабо использует сахароэу и рафинозу, Обладает широким антимикробным спектром действия, подавляя рост грамположитепьных и грамотрицательных бактерий, дрожжей, грибов и актиномицетов, В табл. 3 приведен антимикробный спектр действия штамма в отношении фитопатогенных грибов и бактерий.

Штамм поддерживают на агаризованной глюкоэоминеральной среде СР 1. Для длительного хранения штамма используют содержание под вазелиновым маслом, в виде почвенных культур, в лиофилизированном состоянии, Процесс биосинтеза антибиотиков, образуемых культурой S. violaceonlger ВКМ

Ас-1287D, осуществляют путем выращива"5 ния актиномицета в течение 3 — 4 сут в колбах на круговых качалках (200 об/мин) или в ферментере в жидкой питательной среде следующего состава, : кукурузный экстракт 1; крахмал 1,5; глюкоза 0,5; (NM4)zSO4

0,35; NaCl 0,5; СаСОз техн. 0,5; вода водопроводная, рН среды после стерилизации

6,8-7,0.

Активность культуральной жидкости при определении методом серийных разве25 дений составляет 1000 ед.разв, — по отношению к Candida albicans и 640 ед.раэв, — по отношению к Staphylococcus aureus 209Р, Препарат нигроцид представляет собой предварительно прогретую при 70 — 75 С в течение 10 мин и лиофильно высушенную

3 — 4-суточную культуральную жидкость

S.violaseonlger BKM Ас-1287D. Выход лиофильно высушенного препарата составляет

12 — 16 r/ë. Применяется в виде 1 — 2 -ной водной суспензии, Пример 1. Обработка 1 / -ной водной суспензией нигроцида луковиц репчатого лука севок и репка в течение 20 мин перед посадкой их в грунт снижает распростра40 ненность болезней репчатого лука (вызываемых главным образом Botrytis allil u

Pseudomonas sp.) в 1,7 раза по сравнению с контролем. Урожай семян при обработке нигроцидом лука-репки повышается на 18,9

45 г/м .

Пример 2. Для защиты гвоздики ремонтантной от фузариозного увядания (возбудитель Fus,oxysporum) корни черенков обрабатывали 1 -ной водной суспензией нигроцида в течение 15 мин, а также применяли полив высаженных черенков такой же суспензией нигроцида под корень.

Биологическая эффективность нигроцида в варианте с обработкой корней черенков составляет 89, а в варианте с поливом—

66,9 .

Пример 3. Для защиты проростков капусты от сосудистого бактериоэа (возбудитель — Xanthomonas campestris) семена протравливали в 1 и 2 -ной водной суспен1792614 зии нигроцида в течение 1 ч. Биологическая эффективность нигроцидэ составляет 50—

63% соответственно, Использование предлагаемого штамма позволяет получить высокоактивный анти- 5 биотической препарат нигроцид, не принадлежащий к группе медицинских антибиотиков и предназначенный для борьбы с фитопатоген ной микрофлорой, нигроцида активного против фитопэтогенной микрофлоры.

Формула изобретения

Штамм актиномицета Streptomyces

violaceonlger BKM Ас — 1287Д для получения

Таблица 1

Сравнительные данные антибиотической активности (в ед.разведения) нигроцида и фитобактериомицина

Таблица 2

Культуральные признаки штамма S,vlolaseonlger BKM Ас-1287 l3

Растворимый пигмент вет*

Среда субстратного ми елия воздушного ми елия

Нет

Нет

Нет

Нет

Кукурузная М 2

Овсяная

Соевая

Нет

Нет

Нет

Желтовато-серый (B-3) Нет

Бледно-терракотовый

Ж-1

Сусло-агар

*Обозначения окраски даны по; Бондарцев А. С. Шкала цветов, М,-Л.: Изд-во АН СССР, 1954.

Глюкозоминеральная (ср-1)

Ваксмана с глицерином

Глюкозо-аспарагиновый агар

Гаузе-1

Белый (Д-3) с пятнами (Д-3

Белый (Д-3) с пятнами (Д-3

Белый (Д-3) с пятнами (Д-3

Белый (Д-3) с пятнами (Д-3

Белый (Д-3) черными

+ А-1) черными

+ А-1) черными

+ A-2) черными

+ А-2) Белый (Д-3) с черными пятнами (Д-3 + А-1)

Нет или белый с черными пятнами (Д-3+А-1)

Нет или беловатый

Желтовато-серый (В-З)

Желтовато-серый (В-3)

Желтовато-серый (В-3)

Желтовато-серый (В-З)

Бледно-терракотовый (Ж-1)

Бесцветный

1792614

Таблица 3

Антимикробный спектр действия S. violaceoniger ВКМ Ас 1287 D в отношении фитопатогенных грибов и бактерий

Составитель А.Кудрявцева

Редактор Т,Никольская Техред М.Моргентал Корректор Е,Папп

Заказ 464 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101