Среда для культивирования, идентификации и хранения облигатно-анаэробных микроорганизмов
СОЮЗ СОВЕ ТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК. Ж 18228 75 А1 (5I)5 С 12 N 1/20, С 12 0 1/02
ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ
ВЕДОМСТВО СССР (ГОспАтент сссР) г i.оЮдН Я
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ """" "" """ г д
К ABTOPCKOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Ql (21) 4922565/13 (22) 15.01.91 (46) 23.06.93. Бюл. М 23 (71) Центральный научно-исследовательский институт туберкулеза (72) В.А,Аникин и T.À.Êàýàðîâý (56) Балтрашевич А.К., Раскин Б.М., Комаровская Т.П., Мельникова В.А.//ЖМЭИ.
1982, hh 12, с.72-76.
Кочеровец В,И., Петраков А,А., Пономарева T.P., Михайлова В,С. Методические рекомендации по микробиологической диагностике заболеваний. вызванных неклостридиальными анаэробными бактерия- ми.— M.: 1986, 23 с, Григорян А.Н., Головкина Г.П„ Соловьев
Ю.М. и др,//Тезисы докл. симп, "Биотехнология и биоинженерия",. — Рига: 3инатне, 1978, т.2, с.56 — 57., Каталог сухих питательных сред, выпу- скаемых в СССР для медицинской бактериологии. М.: 1980, в.1, с.22.Жданова
Л.П.,Олейник И.И. Быченко Б.Д.//Лаб.дело, — 1986, 1Ф 4, с.195-201. (54) СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ, ИДЕНТИФИКАЦИИ И ХРАНЕНИЯ ОБЛИГАТНО-АНАЭ РОБН ЫХ МИ КРОО Р ГАН ИЗМОВо
Предложение относится к области медицинской микробиологии.
С целью активизации процессов репроДукции облигатно-анаэробных бактерий в состав питательных сред ранее вводился препарат ЭКД (экстракт кормовых дрожжей) в дозе 50, г/д для плотных и полуплотных сред и 10 г/л — .для пептонно-дрожжевого бульона, Препарат
ЭКД представляет собой комплекс экстрацеллюлярных водорастворимых метаболи(57) Использование: среда для культивирования, идентификация, хранение облигатно-анаэробной микрофлоры. Сущность изобретения: для повышения жизнеспособности облигатно-анаэробных бактерий на различных этапах микробиологического исследования, улучшения специфических культуеэльных свойств среды в ее состав введеи ферментолиээт биомассы микроорганизмов и бычий гемоглобин. Практическое использование предлагаемой среды позволяет значительно улучшить своевременную диагностику гнойно-воспалительных процессов у больных, а также служит надежной основой для лабораторной коррекции лечебных мероприятий. 3 пр. тов клетки, состоящий преимущественно из аминокислот и витаминов. Особенностью комплекса стимуляторов, присущих препарату ЭКД, является сбалансированность его составляющих, сформировавшаяся е процессе эволюции таких штаммов-продуцентов биологических активных соединений, как Candlds troplcalls, Сапа!ба
gullllermondll, некоторых других.
Включение в состав сред такого полноценного аминокислот — витаминного и репа1822875
55 рата, как ЭКД, существенно улучшает условия культивирования анаэробных микроорганизмов. Тем не менее, в 10-20 (случаев, даже при наличии явных клинических проявлений, провести законченное лабораторное исследование не удавалось, Повышение жизнеспособности облигатноанаэробных бактерий на различных этапах микробиологического исследования, улучшение специфических культуральных свойств среды.
Р состав предлагаемого питательного субстрата вводится ферментмизэг биомассы микроорганизмов (ФБМ) и бычий гемоглобин (БГ).
Предлагаемый комплекс биологически активных веществ — Ф БМ вЂ” представляет собой расщепленный ферментами пул микробной клетки, лишенной оболочки, Препарат ФМБ содержит, помимо пептидов и аминокислот, также витамины, но в гораздо меньших количествах по сравнению с ЭКД, что в полной мере отвечает физиологии анаэробов. Кроме того.
Ф БМ содержит многочисленные дериваты нуклеиновых кислот, нуклеотиды, полисахариды. фосфолипиды, микроэлементы, Таким образом, основное отличие препарата ФБМ состоит в том, что он содержит не нативные внеклеточные водорастворимые вещества (аминокислоты, витамины), а, гидролитически расщепленные соединения, многие из которых утилиэируются микробной клеткой в неизмененном виде. Препарат БГ поддерживает реду цирующие свойства среды нэ более высоком уровне.
П р им е р 1, Сухую тиогликолевую среду для контроля стерильности (11,0 г) поваренную соль (0,9 г), пептон (2,0 г). сульфат аммония (0,4 г), крахмал растворимый (1,0 г), агар (16 г для плотной или 0,4 г для полужидкой среды) растворитель в 1 л дистиллированной воды с добавлением 50,0 мгф> (азот аминный) гидролизата по Хоттингеру, нагреть до полного растворения компонентов, довести рН до 7,2, Разлить по флаконам, эвтоклавировать при 120 С вЂ” 20 мин, Перед употреблением агар растопить, остудить. добавить 5 (, крови (лизированной и нелизированной поровну), 0.1 мл 1 -го раствора менадиона, стерилизованного фильтрованием, 1,0 г ферментолизата биомассы микроорганизмов, простерилизованного при 116 С 25 мин, и
0,01 г бычьего гемоглобина в 1 мл стерильной дистиллированной воды.
Пример 2. Сухую тиогликолевую среду (14,0 г), поваренную соль (1,35 г), пептон (3,5 г), сульфат аммония (0,8 г), крахмал растворимый (2,0 г), агар (18,0 г)для плотной или 0,55 r для полужидкой среды растворить в 1 л дистиллированной воды с добавлением 100 мл (, (азот аминный) гидролизата по Хоттингеру, нагреть до полного растворения компонентов, дове5
50 сти рН до 7,2. Разлить по флаконам, автоклавировать при 120 С 20 мин. Перед употреблением агар растопить, остудить, добавить
5 крови (лизированной и нелизированной поровну), 0,5 мл 1 7-ного спиртового раствора менадионэ, 5,5 r ферментолизата биомассы микроорганизмов и 0,59 г бычьего гемоглобина в 1 мл стерильнсй дистиллированной воды.
Пример 3. Сухую тиогликолевую среду для контроля стерильного (17,0 г) поваренную соль (1,8 г). пептон (5,0 r), сульфат аммония (1,2 г), крахмал растворимый (3,0 r), агар (20,0 г для плотной или 0,7 г для полужидкой среды), растворитель в 1 мл дистиллированной воды с добавлением 150 м ((азот аминный) гидролизата по Хоттингеру, нагреть до полного растворения компонентов, довести рН до 7,2. Разлить по флаконам, эвтоклавировать при 120 С вЂ” 20 мин. Перед употреблением агар растопить, остудить, добавить
57 крови (лизированной и нелизированной поровну), 1 мл 1ф,-ного спиртового раствора менадионэ, стерилизованного фильтрованием, 10 г ферментолизата биомассы микроорганизмов и 1,17 г бычьего гемоглобина в 1 мл стерильной дистиллированной воды. Испольэовать свежеразлитую среду или редуцированную при хранении в бескислородной среде при комнатной температуре не менее суток, При использовании предложения жизнеспособность облигатно-анаэробных микроорганизмов повышается, что выражается в стабильности культуральных свойств при субкультивировании, рост видимых колоний появляется на 1 — 2 сутки раньше, колонии— более крупные по размеру. Морфология колоний при этом остается типичной, что свидетельствует об адекватности среды, Практическое использование предлагаемой среды радикально улучшает своевременную диагностику I HOAHo-воспалительных осложнений у больных с хроническими заболеваниями (туберкулез, сахарный диабет и т.д,), а также служит основой надежной лабораторной коррекции лечебных мероприятий, Формула изобретения
1, Среда для культивирования, идентификации и хранения облигатно-анаэробных микроорганизмов, включающая сухую тиогликолевую среду, менадион, гемсодержащий белок и воду, отличающаяся тем, что, с целью улучшения ростовых свойств и среды и повышения жизнеспособности бактерий, она дополнительно содержит хлористый натрий, гидролиэат по Хоттингеру, пептон, сульфат аммония, растворимый крахмал, агар, ферментолизвг биомассы
1822875
Составитель В, Аникин
Техред М.Моргентал Корректор А. КозоРиз
Редактор
Заказ 2173 Тираж Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35. Раушская наб., 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 микроорганизмов, из гемсодержащих белков — бычий гемоглобин, при следующем соотношении компонентов, на 1 л:
Сухая тиогликолевая среда 11,0 — 17, г
Хлористы и натрий 0,9-1,8 г
Гидролизат по Хоттинтеру 50 — 150 мг аминного азота
Пептон 2.0 — 5,0 r
Сульфат аммония 0,4-1,2 r
Растворимый крахмал 1,0 — 3,0 г
Менэдион 0,0001-0,1 г
Агар 0,4-20,0 г
Ферментолизат биомассы микроорганизмов 1,0-10,0 г
Бычий гемоглобин 0.01-1,17 r
5 Вода До 1л
2. Среда по п.1, отличающаяся тем, что содержит менэдион и агар в количестве 0,0001О,01 и 0,4 — 0,7 г соответственно для полужидкой и жидкой сред, и в
10 количестве 0,01-0,1 и 16,0 — 20,0 г — для плотной.
