Штамм бактерий bacillus sp. для получения биоцида микромицетов

 

Использование: микробиологическая промышленность, получение биоцидов микромицетов и касается нового штамма для получения биоцидов. Сущность изобретения: штамм бактерий Bacillus sp. выделен из консервационного масла К-17, защищающего алюминиевый сплав. Депонирован в В КМ под номером В-1792Д. Штамм продуцирует биоцид против грибов рода Aspergllfus, Penlcillum, PMalophora, Alternara, Fusarium и др. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (21) 4951443/13 (22) 27.06.91 (46). 07.05.93. Бюл. hh 17 (72) Л, П. Блинкова, Л. Г. Бутова, Г. В. Матюша, А, А. Самунина и Т. А. Карташева (73) Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова (56) 1, Авторское свидетельство СССР

hh 751382, кл. А 23 К 1/00, 1980.

2. Патент США hI. 3992525, кл. А 61 К

35/74, 1976, Изобретение относится к микробиологии, касается получения нового штамма бактерий-антагониста микроскопических грибов и может быть использовано в различных областях, где есть необходимость подавления жизнедеятельности микромицетов: в техйике, в сельском хозяйстве, в медицине.

Целью изобретения является получение штамма бактерий-продуцента биоцида против микромицетов, разрушающих смазочные материалы, Предлагаемый штамм бактерий ВасИЬз

sp. В-1792Д отличается тем, что подавляет рост микромицетов иэ 11 родов; АИегпаг!а, AspergiIlus, PenlclIlium, Phlatophora, Ulocladium, Scopulariopsis, Khuskia, Lasiodiplodia, Fusarium, Drechslera, Tritirachlum-деструкторов различных смазочных материалов и сплавов, возбудителя болезней злаков Drechelera rostrate, что делает возможным использование продуктов

„„2Ы„„1814659 АЗ (5!)5 С 12 N 1/20, А 01 N 63/00 (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ BACILLUS SP. ДЛЯ

ПОЛУЧЕНИЯ БИОЦИДА МИКРОМИЦЕТ08 (573 Использование: микробиологическая промышленность, получение биоцидов микромицетов и касается нового штамма для получения биоцидов. Сущность изобретения: штамм бактерий Bac)ltus зр, выделен из консервационного масла К-17, защэпцающего алюминиевый сплав, Депонирован в

BKM под номером 8-1792Д. Штамм продуцирует биоцид против грибов рода .Asperglltus, Penlcillum, Ph alophora, Afternara, FusarIum и др. 2 табл. метаболизма предлагаемого штамма в тех- Я . нике в составе биоцидов для сохранения смазочных матерйалов, а также в сельском хозяйстве для обработки злаков.

° амвВ

Штамм бактерии 8ас!Имз зр. 8-1792Д Оф выделен из консервационного масла K-17, в защищавшего алюминиевый сплав АМц-8 в ф, ходе натурных испытаний в течение 16 мес р на сельской станции в тропическом климате ц

Республики Куба.

Штамм бактерий ВасИ1ив вр. В-1792Д депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов ИБФМ AH СССР.

Штамм бактерий Bacillus вр. В-1792Д (ки7 имеет следующие характеристики, Морфологические признаки.

Клетки палочковидные, почти прямые, с загнутыми концами, 0,7-0,8х2-4 мкм, подвижные. Реакция по Граму положительная, Образуют термоустойчивые эндоспоры, овальные, в клетке расположены центрально Спорангий не расширен.

1814659

Способ определения активности штамма, Использован метод прямого антагониз- 5 ма, при котором индикаторные культуры микроскопических грибов засевали одновременно с культурой штамма продуцента (перпендикулярными штрихами к штриху бактерии-продуцента) на чашки Петри, со- 5 держащие питательную среду БСА (суслоагар и МПА в соотношении 1: l), Через 5-7 дней инкубации в термостате при температуре 30 С учитывали результаты опыта. Критерий оценки результатов — величина эоны

Культуральные признаки, Через 18ч при 37 С на агаре Хоттингера штамм образует желтоватые колонии диаметром 1-3 мм, плоские с неровным краем, более светлым, чем центральная часть, с возрастом формируется сетка морщин, На жидких средах растет с образованием складчатой пленки, слабой мути и небольшого осадка.

Физиолого-биохимические признаки.

Пределы температур для роста 2050 М, оптимум 37 С. Пределы рН для роста

5,5 — 9,5, оптимум 7,0. Аэроб. Границы роста определены на агаре Хоттингера. Для спорообразования необходимо введение в среду дрожжевого экстракта. Азот утилизирует в виде мочевины, нитратов. Штамм образует каталаэу и оксидазу. Реакция Фогес-Проскауэра положительная. Ферментирует с образованием кислоты углеводы: глюкозу, маннит, ксилозу, арабинозу. Не утилизирует лактозу, сахарозу, дульцит, салицин, рамнозу, мальтоэу, сорбит, трегалозу, галактозу, целлобиоэу. Образует индол. Восстанавливает нитраты. Активно гидролизует желатин, казеин, крахмал, мочевину. Не расщепляет тирозин, эскулин. Аргининдегидролазной и лецитиназной активностью не обладает, Фенилаланин не дезаминирует.

Чувствителен к антибиотикам: олеандомицину, эритромицину, ристомицину, ампициллину, неомицину, пенициллину, линкомицину, стрептомицину, канамицину, левомицетину, Растет на средах в присутствии лиэоцима (0,001 Q, азида натрия (0,02 ), хлорида натрия (2-107;), а также на простой синтетической среде M-9 и на среде Сабура.

Испытание культуры на токсичность: по методике Госфармакопеи Х не выявлено токсигенных или патогенных свойств микроба.

Хранение штамма. Сохраняется в лиофильно высушенном состоянии в обезжиренном молоке, а также в пробирках на агаре Хоттингера. торможения роста микромицетов предлагаемым штаммом бактерий (в мм).

Пример 1, Бактерии Bacillus sp.

В-1792Д засевают одновременно с микромицетами-деструкторами смазочных материалов по способу определения активности штамма (см, табл. 1).

Пример 2. Бактерии Bacillus sp.

В-1792Д засевают так же, как описано в примере 1, с микромицетом Drechelera

rostrate-возбудителем элаковой гнили, Через 5-7 дней культивирования зона задержки роста гриба составила 60 мм.

Пример 3. Бактерии Bacillus sp. В—

1792Д засевают так же, как в примере 1, с микромицетами-деструкторами различных сплавов, Результаты отражены в табл. 2.

Таким образом, как показано на примерах, предлагаемый непатогенный штамм

20 бактерий Bacillus sp. BKMB-1792Д обладает широким спектром антифунгальной активности, выявленной на 11 штаммах микроскопических грибов, принадлежащих к 10 родам.

Всего было испытано 20 штаммов грибов иэ 11 родов. В остальных случаях, не приведенных в примерах, штамм бактерий

Bacillus sp. BKMB-1792Д также подавлял рост микромицетов. По чувствительности к

30 штамму-продуценту индикаторные культуры можно расположить следующим образом: — высокочувствительные штаммы (зона задержки роста 30 мм) — 12 (Aspergillus

terreus Thorn 6L, Penicillium cyaneum (Bain.

35 and Sert.) Blourge 18L, Peniclllium

stoloniferum . Thorn 20L, Peniclllium

freguentane Westling 19L, Phialophora

lagerbergil (Melln а, Nannf.) Conant 24L, Phlalophora faetiglata (Lagerb. а. МеНп)

40 Conant 23L, Ulocladium botrytis Preuse 27L, Scopulariopsls brevicaulls (Sacc.) Bainier

26L, Khuskla cryzae YK, Lasiodiplodia

theobromae (Pat.) бгЮ et Maubl BKMF3189D, Fusarlum sambuclnum Fuck BKMF45 3186D, Drechstera rostrate (Drechsler) . Richardson et Fraser BKMF-3188D).; — умеренночувствительные штаммы (эона задержки роста 20-30 мм) — 6 (Aspergillus

niger van T1eghem BKMF-3080D, Aspergillus

0 flavus (Link) Fr. BKMF-3190D, Alternaria

alternata (Fr.) Keiseler 2L, Penicillium

chrysogenum ThomBKMF-30670, Fusarium

solani (Mart.) Арр. et Wr. var. erg iÍàñåum (Fr.)

Bilal 11l, Tritlrachium roseum v. Beyma

В KMF-31870); — малочувствительные штаммы (эона задержки роста 10-20 мм) — 2 (Aspergillus

ustus (Bain.) Thorn et Church 7L, Fusarium

solanl (Mart,) Арр. et Иг. BKMF-31850).

1814659

На основании приведенных данных можно рекомендовать штамм бактерий

Bacillus sp, ВКМВ-1792Д для использования его в качестве перспективного продуцента антифунгального вещества с целью 5 создания биоцидов, повышающих биостойкость различных смазочных материалов и сплавов. Ввиду отсутствия токсигенных и

Таблица 1

Подавление бактерией Bacillus sp, В-1792Д роста микроскопических грибов-деструкторов смазочных материалов

Индикаторная к льт а

Характеристика индикато а

Величина зоны торможения оста, мм

Pinlcillium cyaneum (Baln. and Sart.) 8iourge 181

Phialophora lagerbergIi (Melln а.

Nannf,) Conarit 241

Ulocladium botryt1s Preuss 27L

Scopularlopsis brevlcaulls (Sacc.) Bainier BKMF — 3065Д

Aspergillus terreus 6L

Деструктор смазки

АМ С-3

Деструктор смазок

Деструктор смазок

Деструктор технических масел

Деструктор консервационных смазочных мате иалов

Таблица 2

Подавление бактерией Bacillius sp, ВКМВ-1792Д роста микроскопических грибов-деструкторов сплавов.

Зона торможения роста ин икато ного штамма

Характеристика индикаторного штамма етов

Trltirachium rozeum v, Beyma

B KMF-31870

Деструктор алюминиевых медь-марганец содержащих оплавов

Деструктор стальных сплавов, покрытых консервационными смазочными материалами, защищенными йротивомик обными и иса ками

Fusarium sambucinum Fuck

BKIVlF-3186I3

Индикаторный штамм микромипатогенных свойств штамм представляет интерес в плане использования его метаболитов в растениеводстве, ветеринарии и медицине.

Формула изобретения

Штамм бактерий Вас111оз sp. ВКМ В1792Д для получения биоцида микромицетов.

1814659

Продолжение табл,2.

Khuskla oryzae YK

Деструктор алюминиевых сплавов

Деструктор стальных, оксидных алюминиевых и магниевых сплавов, а также возбудитель аспергиллезов у животных

Деструктор сплавов, покрыTblx консервационными

Asperglllus flavus (Link) Fr.

B KMF-31900

Laslodlplodia theobromae (Pat.) Grlff. ет Maubl BKMF31890

35 смазочными материалами

Деструктор алюминиевых

0rechslera rostrate (Огеспз! ег) Richardson et

Fraser BKMF-31880 сплавов, покрытых консервацион ными . смазочными мате иалами

Составитель Л.Блинкова

Техред М.Моргентал Корректор А.Коэориз

Редактор Л.Волкова

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 1841 Тираж " Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5