Штамм бактерий bacillus тнuringiеnsis - продуцент @ - эндотоксина против колорадского жука

 

Использование: производство биологических средств борьбы с вредителями сельского хозяйства - колорадским жуком и касается нового штамма бактерий для производства вышеуказанного средства/Сущность изобретения: штамм бактерий Bacillus thurlnglensls выделен из личинки мучного хруща (Tenebrlo molitor), культивируемого в лабораторных условиях. Депонирован в ВКМ под № В-1806Д. Для получения препарата G-эндотоксина (в виде спор и кристаллов) вышеуказанный штамм бактерий выращивают на среде С2, содержащей (%): глюкозу 1; пептон 0,2; казалиновые кислоты 0,5; дрожжевой экстракт 0,2; сернокислый аммоний 0,2; однозамещенный фосфорнокислый калий 3; двузамещенный фосфорно-кислый калий 5; сернокислый магний 0,01; хлористый марганец 0,003; сернокислый цинк 0,0005; сернокислую медь 0,0004; сернокислое железо 0,00005; хлористый кальций 0,006; вода остальное, в течение 72 ч при 30°С. Полученную суспензию разводят до 103 спор и кристаллов. На листья , пропитанные суспензией, помещают по 10 личинок колорадского жука первого возраста . На 3-й сутки обнаруживают 70% гибель личинок первого поколения, а на 4-ые сутки - 100% гибель.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК. Ы 1814520 АЗ (si)s А 01 и 63/00, С 12 N 1/20

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) описдние изоБ етини

К ПАТЕНТУ

В (21) 4889573/13 (22) 07.12.90

{46) 07.05.93. Бюл. М 17 (71) Институт микробиологии АН СССР (72) Т.П.Блохина, Е.О.Добржанская, И.В.Asралева, И.Г.Атабеков . (73) T.П.Блохина, E.O,Äoáðæàíñêàÿ, И.В.Asралева, И. Г,Атабеков (56) Европейский патент М 0318143, кл. А 01 N 63/00, 1989. (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ BACILLUS

THURlNGlENSIS — ПРОДУЦЕНТ О -ЭНДОТОКСИНА ПРОТИВ КОЛОРАДСКОГО ЖУКА (57) Использование: производство биологических средств борьбы с вредителями сельского хозяйства — колорадским жуком и касается нового штамма бактерий для производства вышеуказанного средства. Сущность изобретения: штамм бактерий

Bacillus thuringlensis выделен из личинки мучного хруща (Tenebrlo rnolltor), культивиИзобретение относится к биологическим средствам борьбы с жуками — вредителями сельского хозяйства и может быть использовано против вредителя картофеля колорадского жука (Leptinotarsa

decernlineata).

Целью изобретения является повышение штамма, образующего эндотоксин, активный против колорадского жука.

Поставленная цель достигается штаммом B,thuringiensis 2В выделенным из личинки большого мучного хруща (Fenebrio руемого в лабораторных условиях. Депонирован в ВКМ под М В-1806Д. Для получения препарата G-эндотоксина (s виде спор и кристаллов) вышеуказанный штамм бактерий выращивают на среде Cz, содержащей (Д}: глюкозу 1; пептон 0,2; каэалиновые кислоты 0,5; дрожжевой экстракт 0,2; сернокислый аммоний 0,2; однозамещенный фосфорнокислый калий 3; двузамещенный фосфорно-кислый калий 5; сернокйслый магний 0,01; хлористый марганец 0,003; сернокислый цинк 0,0005; сернокислую медь

0,0004; сернокислое железо 0,00005; хлористый кальций 0,006; вода остальное, в течение 72 ч при 30 С. Полученную суспензию разводят до 10 спор и кристаллов. На листья, пропитанные суспензией, помещают по

10 личинок колорадского жука первого возраста. На 3-и сутки обнаруживают 70 гибель личинок nepsoro поколения, а на 4-ые сутки — 1007 гибель.

Ql

rnolitor)., культивируемого в лабораторных ЬЭ условиях. С)

Штамм депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов, имеет регистрационный номер ВКМ вЂ” В1806Д.

Культурально-морфологические признаки, Штамм образует на МПА матовые сероватые морщинистые колонии с извилистым краем. Размер клеток: ширина 1,2 нм, длина

4 нм. Образует споры и кристаллы через 72 часа при культивировании на среде Cz npu

30 С. Споры имеют овальную форму, кри1814520

Составитель Т.Блохина

Техред M.Mîðråíòàë Корректор М.Андрушенко

Редактор С,Кулакова

Заказ 1834 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

" 3035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно издательский комбинат "Патент", f. Ужгород, ул.Гагарина, 101. сталлы имеют ромбовидную форму. Продуктивность 5,5 х 10 спор!мл на среде Ср и

6х10 спор/мл на среде ДПС.

Физиолого-биохимические свойства.

Температурный оптимум роста 30 С, максимум 45 С, минимум 10 С: Усваивает глюкозу, фруктоэу. Не усваивает ксилозу, арабинозу, манит, тирозин. Желатину разжижает, Молоко непептонизирует и свертывает, Крахмал гидролизует. Обладает каталазной, лецитиназной, нитратредуктаэной активностью. Растет на среде с NaCl до 10 .

Штамм ВасИЬз thuringlensls 2В вызыааег 100$ гибельличинок колорадскоголгука при 10 концентрации спор и кристаллов на 1 см картофельного листа.

П р-и м е р 1. Для накопления максимального количества спор и кристаллов белкаа э ндотокси на культуру Bacillus

thuringlcnsls 2В выращивают на полусинтетической среде Cz, следующего состава в : глюкоза-1, пептон-0,2, каэаминовые кислоты-0,5, дрожжевой экстракт-0,2, (NH<)2SO4 - 0,2; КН2РОа - 3; К2НРО4 - 5;

MgSO4 х 7HzO - 0,01 МпС!2 - 0,003, ZnSO< х 7Н20 - 0,0005; CuS04 х 5Н20—

0.0004; FeS04 х 7Н20 — 0,00005 СаС!2—

0,006; дис Н20.

Для наблюдения за образованием спор и кристаллов используют световой микроскоп (х1000) с фазово-контрастным устройством и применяется метод Смирнова для покраски кристаллов с последовательной обработкой мазков амидошварцем и карбол-фуксином Циля.

Испытание активности против колорадского жука проводят следующим образом: листья картофеля вымачивают 30 мин в суспензии спор и кристаллов получаемой после

72- часового выращивания культуры на ка чалке (200 об/мин) при температуре 30 С

На листья, пропитанные разведенной в 10 суспензией спор и.кристаллов, помещают по 10 личинок колорадского жука (Leptlnotarsa decemfineata) 1-го возраста.

Испытание инсектицидной способности спор и кристаллов, полученных на синтети10 ческой среде Cz, обнаруживает 70 гибель личиной первого поколения на 3-и сутки и

100 гибель на 4-е сутки.

Пример 2. Культуру Bacillus

thuringiensls 2В выращивают на производ 15 ственной среде ДПС следующего состава в (: дрожжевой экстракт — 3,0, кукурузная мука — 1,5, водопроводная вода, рН вЂ” 6,8.

Далее согласно примеру 1.

Наблюдается 100ф гибель личинок 1-го

20 поколения на 2-ые сутки при использовании суспензии в разведении 10 .(т.е. концентрация 10 спор и кристаллов на 1 см листа).

Таким. образом биологическая активность штамма В.thurlnglensls 2В следующая

L> op 5х10 — 6x10 спор/мл превосходит данные отечественных и иностранных авторов.

Представленный штамм 2В имеет своим активным началом 0 -зчдотоксин непато30 генный против животных и может быть предложен как основа для биопрепарата против колорадского жука.

Формула изобретения

Штамм бактерий Bacillus thuringlensls

ВКМ В-1806 — продуцент о -эндотоксина против колорадского жука.