Способ электрофоретического определения фракций серомукоида сыворотки крови

 

Использование: в медицине, в клинической биохимии. Цель: повышение точности способа и количества выявляемых фракций. Сущность изобретения: перед электрофорезом в полиакриламидном геле дополнительно проводят перерастворение осадка в 0,025-0,05 М трис-глициновом буфере рН 8,3 с последующим его высушиванием. Положительный эффект: использование изобретения позволяет почти на 35% больше выявить число фракций серомукоида сыворотки крови и на 20% повысить точность определения фракционного состава. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛ ИСТИЧ ЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 G 01 N ЗЗ/68

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4815540/14 (22) 16.04.90 (46) 15.07.93, Бюл. ¹ 26 (71) Волгоградский государственный медицинский институт (72) А.Б.Зборовский, А.Г.Беседин и Ю.В.Логутенков (56) Зверев А.П., Золотарева Н.Vi., Исаев

П.И, Способ определения гликозаминогликанов сыворотки крови, (54) СПОСОБ ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОГО

ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФРАКЦИИ СЕРОМУКОИДА СЫВОРОТКИ КРОВИ

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической биохимии, Целью изобретения является повышение точности способа и количества выявляемых фракций, Способ осуществляется следующим образом. К 0,5 мл сыворотки прибавляют 4,5 мл дист,воды и 2 мл 1,8 M хлорной кислоты, через 10 мин центрифугируют при 3000 об/мин в течение i0 минут. K супернатанту прибавляют 0,5 мл 5% фосфорно-вольфрамовой кислоты в 2 í. HCI, Через 10 мин центрифуги руют и ри 3000 об/мин в течение

10 мин. Осадок высушивают в той же центрифужной пробирке, К каждой пробе прибавляют по 0,1 мл 0,05 M трис-глицинового буфера рН 8,3 тщательно размешивают и высушивают при комнатной температуре.

Осадок, содержащий 200 — 300 мкг белка по биуретовой реакции, растворяют в 0,2 мл

0,005 M трис-глицинового буфера рН 8,3. В пробу добавляют 20 мкл 0.5% раствора додецилсульфата натрия. Пробы используют для злектрофоретического разделения Ы ÄÄ 1827636 А1 (57) Использование; в медицине, в клинической биохимии. Цель: повышение точности способа и количества выявляемых фракций, Сущность изобретения: перед злектрофорезом в полиакриламидном геле дополнительно проводят перерастворение осадка в

0,025 — 0,05 М трис-глициновом буфере рН

8,3 с последующим его высушиванием. Положительный эффект: использование изобретения позволяет почти на 35% больше выявить число фракций серомукоида сыворотки крови и на 20% повысить точность определения фракционного состава. 1 табл, фракций в полиакриламидном геле, вносят в стеклянные трубки 90 мм длиной и 5 мм в диаметре, заполненные 5% концентрирующим и 10% разделяющим гелями. Для приготовления 10% разделяющего геля берут 1 мл раствора N 1, 2,8 мл раствора ¹ 2, 0,2 мл

HzO, 4 мл раствора N 3.

Пропись приготовления растворов следующая. Раствор 1 1: 1 í. HCI 48,0 мл, трис

36,6 г, ТЕМЕД 0,2 мл, довести дистиллированной водой до 100 мл. Раствор № 2: акрилэмид 30 г. И.N-метиленбисакрилэмид 0,8 г, довести дистиллированной водой до 100 мл.

Раствор N.: 3: 0,14 г персульфата аммония довести до 100 мл водой. Конструирующий

5% гель приготовляют разведением раствора 10% геля дистиллированной водой в соотношении 1:1.

Разделение фракций проводят при силе тока 2 мА на трубку в течение 65 мин. Окрашивание гелей — в 1-", - растворе алцианового синего в 7 „- уксусной кислоте. Фракии серомукоида окрашиваются в голубой цвет.

182 ) 636

Составитель А. Беседин

Техред М,Моргентал Корректор Г.Кос

Редактор

Заказ 2357 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Ра шская наб„4/5

Производственно-издатеввскид комбинат "Патент", г. Ужгород, ув.Гагарина, 101

Пример. Из вены больного M. натощак взято 10 мл крови в сухую пробирку, которую поставили в термостат 37 С на 1 ч.

Затем отделили сыворотку от сгустка крови стеклянной палочкой, предварительно проведенной через пламя горелки и остуженной. Для получения прозрачной сыворотки кровь центрифугируют при 1000 об/мин в течение 20 — 30 мин. Берут 0,5 мл сыворотки крови, добавляют 4,5 мл дист.воды и 2 мл 1,8

М хлорной кислоты, через 10 мин центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин.

К супернатанту добавили 0,5 мл 5 фосфорно-вольфрамовой кислоты в 2 н, HCI. Через

10 мин пробы центрифугировали при 3000 об/мин в течение 10 мин. Осадок высушили.

К каждой пробе добавили по 0,1 мл 0,05 M трис-глицинового буфера рН 8,3 и высушили при комнатной температуре. Осадок растворили в 0,2 мл 0,005 M трис-глицинового буфера рН 8,3, Взяли 130 мкл раствора, содержащего примерно 2/3 осадка или 200 мкг белка. В пробу добавили 20 мкл 0,5 /, раствора додецилсульфата натрия. Пробы нанесли на стеклянные трубки, заполненные 5 / концентрирующим и 10/о разделяющим гелями. Электрофорез проводили при силе тока 2 мА на трубку в течение 65 мин. Гели окрашивали в 1 / растворе алцианового синего в 7 /, уксусной кислоте. Былс выявлено в пробе, обработанной по прототипу 4 фракции, а по предлагаемому спосо5 бу 7 фракций серомукоида.

Преимущества предлагаемого способа видны из таблицы, Из данных таблицы видно, что по предлагаемому способу можно выявить достоверно большее число фракций серомукоида и повысить точность определения фракционного состава.

Формула изобретения

Способ электрофоретического определения фракций серомукоида сыворотки крови, включающий депротеинизацию сыворотки крови хлорной кислотой, осаждение серомукоида из супернатанта фосфорно-вольфрамовой кислотой, растворение

20 осадка в щелочи и переосаждение этанолом с последующим электрофорезом в полиакриламидном геле и окрашиванием алциановым синим, отлич а ю щи йся тем, что, с целью повышения точности способа и количества выявляемых фракций, перед электрофорезом проводят перерастворение осадка в 0,025 — 0,05 М трис-глициновом буфере рН

8,3 с последующим его высушиванием,