Способ получения производных дипептидов или их фармацевтически приемлемых солей
Назначение: в медицинской промышленности и медицине. Сущность изобретения: способ получения производных общей ф-лы R/-W-A-B-NH-CH(R2)CH(OH)-CH(R3)R4. где Р1-(С4-Сб)-циклоалкил, замещенный аминоили (С1-О)-алкоксикарбониламиногруппой, W -СО-, Р2()-ЦИклоалкил -(С1-С 0-алкил; , ОН; R4 ocTaTOK: CH2CH2-D, где , 3- или 4-пиридиновый или 2-, 4-имидазольный остаток, возможно замещенные (С1-С4)-алкилом; А и В независимо друг от друг означают связанный N- концом с R, или А, и С-концом с В или с NHchr2CHOHchr3R4 радикал аминокислоты из ряда: фенилаланин, гистидин, тирозин , триптофан, лейцин, изолейцин, валин. аланин. Ы(т)-метилгистидин, о-метилтирозин, о-трет-бутилтирозин, нйрвалин норлейцин или их фармацевтически приемлемых солей. Реагент 1: кислота R WAOH или ее реакционноспособное производное. Реагент 2: N2NBNHCH(R2)CH(OH)CH(R3)R4, при необходимости, с последующим отщеплением временно защитных групп. 1 табл. СО
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (st)5 С 07 К 5/06, А 61 К 37/02
ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ
ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
Р с
° 3 (21) 4743684/04 (22) 20.04.90 (46) 23.08.93. Бюл. N. 31 (31) P 3913272.2 (32) 22.04.89 (33) DE (71) Хехст АГ (DE) (72) Вольф-Ульрих Никель, Вольфганг Линц, Дитер Рупперт, Хансйерг Урбах и Адальберт
Вагнер (ОЕ) (56) Патент PCTWO 88/05050, кл. С 07 К 5/06 опублик. 1988. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ ДИПЕПТИДОВ ИЛИ ИХ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ ПРИЕМЛЕМЫХ СОЛЕЙ (57) Назначение: в медицинской промышленности и медицине. Сущность изобретения: способ получения производных общей ф-лы
Rs -W-А- — NH-СН(Вг)-CН(ОН)-СН(йз) R4. где R1-(С4-СБ)-циклоалкил, замещенный
Изобретение относится к способу получения производных дипептидов или их фармацевтически приемлемых солей — новых биологически активных соединений, которые могут найти применение в медицине.
Цель изобретения — способ получения новых производных дипептидов малотоксичных и обладающих более высокой активностью в отношении способности ингибировать ренин.
Поставленная цель достигается описываемым способом получения производных дипептидов общей формулы I
2 3
I I l
1 8 Н 1 СН СН СН Р,4
„„5U„„1836382 АЗ амико- ил и (С1 — С4)-алкоксикарбониламиногруппой, М/ - -СО-, В2=(С4 — С7)-циклоалкил
-(С1-С4)-алкил; ЯЗ=Н, ОН; R4=остаток:
СН2СН2 — D, где D=2-, 3- или 4-пиридиновый или 2-, 4-имидазольный остаток, возможно замещенные (С1-С4)-алкилом; А и В независимо друг от друг означают связанный Nконцом с R, или А, и С-концом с В или с
NHCHR2CH0XCHR3R4 радикал аминокислоты из ряда: фенилаланин, гистидин, тирозин, триптофан, лейцин, изолейцин, валин, аланин, N(im)-метилгистидин, о-метилтирозин, о-трет-бутилтирозин, норвалин норлейцин или их фармацевтически приемлемых солей. Реагент 1: кислота R М/АОН или ее реакционноспособное производное. Реагент 2: Й2ИВМНСН(К2)СН(ОН)СН(йз)В4. при необходимости, с последующим отщеплением временно защитных групп. 1 табл. где R1 — (С4-Св)-циклоалкил, который может быть замещен амино- или C1 — С4-алкоксикарбониламино;
W — — CO —;
R2 — (С4-Ст)-циклоал кил-(C1-С4)-алкил;
Вз — водород или гидрокси;
R4 — остаток фо р мул ы I I
СН2 СН2 D, где Π— означает 2,3- или 4-пиридиновый или
2-, 4-имидазольный остаток, которые могут быть замещены (С1-С4)-алкилом.
А и В независимо друг от друга обозначают связанный N-Tåðìèíçëüío с R1 или А и С-терминально с В или
NH-CHRIS-CHÎÍ-СНЕЗ-В4 радикал аыиНОкислоты из ряда: фенилаланин, гистидин, 1836382 тироэин, лейцин, изолейцин, валин, аланин, im-метилгистидин, о-метилтирозин, о-третичный бутилтирозин, норвалин, норлейцин, или их фармацевтически приемлемых солей, отличающийся тем, что подвергают взаимодействию кислоту R>-WAOH или ее реакционно способное производное; с
HzN В NH СН(В2) СН(ОН)СН(Вз)К4 при не обходимости с последующим отщеплением временно введенных защитных групп и выделением целевого продукта в свободном виде или в виде фармацевтически приемлемых солей.
Стереоизомерные смеси, в частности, диастероизомерные смеси, которые получаются при использовании рацемических аминокислот А или В, могут отделяться известным способом путем фракционированной кристаллизации или с помощью хроматографии, Перечень использованных сокращений
АСС 4-аминоциклогексилкарбонил
Вос третичный бутоксикарбонил
BuLl и-бутил-литий
DCC дициклогексилкарбодиимид
DCI десорбция химической ионизации
DNP 2,4-динитрофенил
ОМЕ диметоксиэтан
DMF диметилформамид
EE этиловый эфир уксусной кислоты
EI электронное воздействие
FAB бомбардировка быстрыми атомами
$ч
HOBt 1-гидроксибензотриазол
М молекулярный пик
Ms масс-спектр
MTEE третичный метил-бутиловый эфир
NEM N-этилморфолин и-РгорРА и-ангидрид пропилфосфокислоты
THF тетрагидрофуран
Прочие сокращения, использованные для аминокислот, соответствуют обычному в химии пептидов трехбуквенному коду, Если четно не указано другое, то речь идет всегда об аминокислотах L-конфигурации, Использованные растворители имеют следующие сокращения;
ЕМ1 CHz(CIz)CH NOH 20:1
LMz СН2(СЬ)СНзОН 9:1
LMa СН2(СЬ)СНзОН 12:1
LM4 CHz(CIz)CHsOH концентрированный МНз 10:1:0,1
LMs циклогексан/эфир уксусной кислоты 9: I ! Мв и-гексан/эфир уксусной кислоты
2:1
Приведенные ниже примеры предназначены для пояснения настоящего изобретения, не ограничивая его этими примерами, Пример 1. К (¹Третичный-бутоксика рбонил-цис-4- аминациклогексилкарбонил)-L-фенилаланин-1=норвалин- (1-$-циклогексилметил-2-S-гидро кси-5.(2-пи ридил))пентиламид.
235 мг N-(N-третичный-бутоксикарбонил-цис-4- аминоциклогексилкарбонил)-(фенилаланина, растворенного в 3 мл DMF, смешивают с 98 мг HOBt. 130 мг DCC и 0,08 мл NEM. К этому раствору добавляют 230 мг
1=норвалин-(1-S-циклогексилметил-2-S- ги40
50 ван катализатор и отогнан растворитель.
После перекристаллиэации и и-гептан/эфира уксусной кислоты было получено .4,1 r бесцветного продукта.
Точка плавления 160-161 С (разложение).
MS (DCI) 391 (М+1) б) N-(N-третичньi й-бутоксика рбонилцис-4-аминоциклогексилкарбонил) - =фенилаланинбензиловый эфир
6,0 r й-третичный-бутоксикарбонилцис-1,4- аминоциклогексанкарбоновой кислоты и 6,3 г L-фенилаланинбензилового эфира было растворено в 75 мл DMF, смешано с 24 мл и-ангидридом пропилфосфокислоты и 15,7 мл NEM при 0 С и в течение ночи при комнатной температуре происходила реакция. Раствор был разбавлен
CHzCIz и соответственно промыт полунасыщенным раствором МаНСОз, 10 -ной лимонной кислотой и водой, высушен с рокси-5-(2-пиридил))-пентидамида, растворенного в 3 мл DMF и перемешивают в течение ночи при комнатной температуре.
DMF отгоняется в глубоком вакууме, ос20 тавшийся раствор растворяется в эфире уксусной кислоты, отфильтровывается от выпавшей в осадок мочевины и дважды промывается насыщенным раствором ИаНСОз и насыщенным раствором NBCI, органиче25 ская фаза высушивается с помощью Mg$04 и концентрируется в вакууме. После хроматографии на колонне (селикагель), LMI) было изолировано 315 мг, Точка плавления 100-103 С.
30 М$ (FAB) 748 (M+1) а) N-(N-третичный-бутоксикарбонилцис-4-аминоциклогексил/ карбонил)-L-фенилаланин
5,5 r N-(N-третичный-бутоксикарбонил35 цис-4- аминоциклогексилкарбонил)-L-фенилаланинбензилового эфира было гидрировано в 230 мл этанола с помощью.1
r палладия/угле при нормальном давлении.
После окончания реакции был отфильтро1836382 помощью Mg$04 и концентрирован в вакууме. Хроматография дала 5,7 r чистого продукта. а : -14,6 (с=1,1 в СКзОН)
Пример 2. 5
N-(цис-4-аминоциклогексилкарбонил)L-фенилаланин-L-норвалин-(1-$- циклогексилметил-2-$-гидрокси-5-(2-пиридил)) пентиламид
77,7 мг описанного в примере 1 соеди- 10 нения было растворено в 2 мл CI-I2CI2 и смешано при температуре 0 С в присутствии Nz с 2 мл СРзСООН. По истечении 30 минут раствор был концентрирован, остаток растворен s эфире уксусной кислоты и 15 соответственно дважды промыт насыщенным раствором МаНСОз NaCI..
Колоночная хроматография (селикагель, LMI) дала 24,7 мг продукта.
MS (FAB) 648 (М+1) 20
Пример 3. N-(й-третичный-бутоксикарбонил-транс-4- аминоциклогексилкарбонил)- -фенилаланин-1-норвалин-(1-Sциклогексилметил-2-S-гидрокси-5-(2-пири-. дил))-пентиламид. 25
По аналогии с описанным в примере 1 соединением, указанное в заголовке соединение было получено из N-(N-третичный-бутоксикарбонил-транс-4-аминоциклогексилкарбонил)-L- фенилаланина и -норвалин- 30 (1-S-циклогексилметил-2-S- гидрокси-5-(2пириди н))-п е нтил амида.
Выход составил 270 мг.
Точка плавления 219-220 С.
MS (FAB) 748 (M+1) 35
a) N-(N-третичный-бутоксикарбонилтран-4- аминоциклогексилкарбонил)-1-фенилаланин
4,45 г N-{N-третичный-бутоксикарбонил-транс-4- аминоциклогексилкарбонил)- 40
L-фенилаланинбензилового эфира было каталитически гидрировано в 200 мл этанола при комнатной температуре и нормальном давлении с помощью 900 мг палладия на угле. После окончания реакции смесь была отфильтрована от катализатора и был 45 отогнан растворитель в вакууме. После перекристаллизации было получено 2,67 г чистого продукта.
Точка плавления: с температуры 160 С .разложение. 50
MS (ОС!): 391 (M+I) б) N-(N-третичный-бутоксикарбонилтранс-4- аминоциклогексилкарбонил)-L-фенилаланинбензиловый эфир
3 г N-третичный-бутоксикарбонил- 55 транс-4- аминоциклогексил ка рбоновой кислоты и 3,2 г 1-фенилаланинбенэилового эфира было растворено в 40 мл DMF и смешано при температуре 0 с. 7,85 мл NEM, а затем с 12 мл и-РгорРА. Смесь через ночь при комнатной температуре вводилась в реакцию. После разбавления 200 мл уксусного эфира раствор соответственно промывался дважды водой. 10 -ной лимонной кислотой, насыщенным ИаНСОз и насыщенным раствором NaCI. Оставшаяся органическая фаза была высушена в помощью M9$04 и освобождена в вакууме от растворителя, Исходный продукт был растерт с диэтиловым эфиром, выпавшие в осадок кристаллы были отсосаны и высушены.
Было получено 4,45 г бесцветных кристаллов.
Точка плавления .176-177 С.
M$ (ОО) 481 (М+1)
Пример 4. N-.(òðàíñ-4-аминоциклогексил карбонил)-L- фенилаланин-L-норвалин(1-S-циклогексилметил-2-$-гидрокси-5(2-пиридил))-пентиламид
Указанное в заголовке соединение было получено описанным в примере 2 способом из описанного в примере 3 соединения.
Выход после хроматографии (селикагель, LMg) составил 27 мг.
Ms (FAB) 648 (M+1); RF 0,17 (метиленхлорид/метанол 8:2).
Пример 5. ЩМ-третичный-бутоксикарбонил-транс-4- аминоциклогексилкарбон ил)- -фе н и лала ни í-N(Im)-трет ил-L-гистидин-(1-S- циклогексилметил-2-S-гидрокси-5(2-и и р иди л))-пентилам ид.
Указанное в заголовке соединение было получено из описанной в примере За) производной фенилаланина и FMOC-гис(третичного)-(1-S-циклогексилметил-2-S-гидрокси-5-(2-пиридил)} -пентиламида в соответствии с описанным с примере 1 способом.
После хроматографии (селикагель, LMI) выход составил 0,4 г.
MS {FAB) 1028 (М+1), 1034 (М+7), RF 0,5 (толуол /этанол 8:2).
Пример 6. N-(И-третичный-бутоксикарбонил-транс-4- аминоциклогексилкарбонил)-Е-фенилаланин-L-гистидин-(1-S-циклогексилметил -2-S-гидрокси-5-(2-пиридил))пентиламид.
40 мг, полученного в примере 5 вещества, было растворено в 5 мл 90 -ной уксусной кислоты и в течение 2 ч смесь была нагрета до температуры 60 С, Водородный показатель рН раствора с помощью Иа2СОз был доведен до значения 8 и трижды экстрагирован с помощью эфира уксусной кислоты. Органическая фаза была соответственно дважды промыта насыщенным раствором NazCOz и насыщенным раствором NaCI, затем высушена с помощью MgS04 и концен1836382 трирована в вакууме. Хроматография (селикагель, LMI) дала 16 мг чистого продукта.
MS (FAB) 786 (M+1), Разложение, начиная с температуры 155 С.
Пример 7. N-(транс-4-аминоциклогексилкарбонил)-L- фенилаланин-L-гистидин(1-S-qvxnorerc nvexua-2-$-гидрокси-5(2-пиридил))-и ентил амид.
300 мг описанного в примере 5 вещества перемешивалось е 5 мл СЕзСООН и 0,25 мл WzO в течение 15 минут при температуре
0 С и в течение двух часов при комнатной температуре. Раствор был концентрирован в вакууме, подщелочен раствором йаНСОз и экстрагирован с помощью эфира уксусной кислоты.
Органическая фаза была концентрирована в вакууме и остаток хроматографирован (селикагель, LM2).
MS (FAB) 686 (М+1), Точка плавления
114 — 116 C.
Пример 8. N (N-третичный-бутоксикарбонил-цис-4- аминоциклогексилкарбонил)-1-фенилалани í-N(im)-тритил-(=гистидин{1-$- циклогексилметил-2-S-гидрокси-5(2-пи ридил))-п е нтил амид, Указанное в заголовке соединение было получено из описанной в примере Ia) производной фенилаланина и FMOCгис(третичного)-{1-S-циклогексилметил-2-S
-гидрокси-5-(2-пиридил)- пентиламида в соответствии с описанным в примере 1 способом. Выход после хроматографии (селикагель, М!) составил 0,5 r., MS (FAB) 1028 (М+1), 1034 (М+7); RF 0,26 (LMI).
Пример 9. N-(N-третичный-бутоксикарбонил-цис-4- аминоциклогексилкарбонил)-L-фенилаланин-L-гистидин-(1-$-циклогексилметил -2-S-гидрокси-5-(2-пиридил))пентиламид.
Укаэанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 6 способом из описанного в примере 8 соединения. В ыход составил 61 мг, Точка плавления 127-130 С.
MS (FAB) 786 (М+1); RF 0.21 (LM2)
Пример 10. N-(цис-4-аминоциклогексилкарбонил)-L- фенилаланин-L-гистидин(1-$-цикл огексил метил-2-$-гид рокси-5-(2пиридил))-пентиламид, Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 7 способом из описанного в примере 8 соединения. Выход составил 180 мг, MS (FAB) 686 М+1), Точка плавления 177 С. Разложение, Пример 11. N-(N-третичный-бутоксикарбонил-транс-4- аминоциклогексилкарбонил)-1 -тирозин(о-метил)-N(im)-тритил-L50
55 дил))-пентиламид, Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 6 способом из описанного в примере
14 соединения, RF 0,80 (LM4).
MS (FAB) 816 (М+1).
Пример 16. N-(цис-4-аминоциклогексил карбо нил)-L- тирозил(о-метил)-L-гистидин-(1-S-циклогексилметил-2-S-гидрокси-5-(2- пиридил))-пентиламид.
Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в пригистидин- (1-S-циклогексилметил-2-$-гидрокси-5-(2-и и р идил))-и ентиламид.
Указанное в заголовке соединение было получено из N-(N-третичного-бутоксикарбонил-транс-4-аминоциклогексилкарбонил)-1тирозин(метила) и 1-гис(тритил)-(1-S-циклогексилметил-2-S- гидрокси-5-(2-пиридил))пентиламида в соответствии с описанным в примере 1 способом. RF 0,54 {толуол/этанол
10 82).
MS (FAB) 1058. (М+1), Пример 12. N (N-третичный-бутоксикарбонил-транс-4- аминоциклогексилкарбонил)-L-тирозин(о-метил)-1=гистидин-(1-Sциклогексилметил -2-$-гидрокси-5-(2-пиридил))-пентиламид, Указанное в заготовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 6 способом из описанного в примере
11 соединения. Rp 0,2 (толуол/этанол 8:2).
М$ (FAB) 816 (M+1), Разложение со
180 С.
Пример 13, Й-(транс-4-аминоциклогексилкарбонил)-L- тирозин(о-метил)-L-гис25 тидин{1-S-циклогексилметил-2-S-гидрокси-5-(2- пиридил))-пентиламид.
Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 7 способом из описанного в примере
11 соединения.
М$ (FAB) 716 {М+1).
Пример 14. N-(N-третичный-бутоксикарбонил-цис-4- аминоциклогексилкарбонил)-1=тирозин(о-метил)-Й-(!гп)-тритил-(=гис35 тидин- (1-$-циклогексилметил-2-$-гидрокси-5-(2-и и ридил))-пе нтил амид.
Указанное в заголовке соединение было получено из К-(N-третичного-бутоксикарбонил-цис-4-аминоциклогексилкарбонил)-L40 тирозин(о-метил) и (=гис(тритил)-(1-S-циклогексилметил-2-S -гидрокси-.5-(2-пиридил))пентиламида в соответствии с описанным в примере 1 способом. RF 0,75 (LM2).
М$ (FAB) 1058 (М+1).
45 Пример 15. N-(й-третичный-бутоксикарбонил-цис-4- аминоциклогексилкарбонил)-1 -тирозин(о-метил)-L-гистидин-(1-$циклогексилметил-2-S-гидрокси-5-(2-пири1836382
15
25
55 мере 7 способом иэ описанного в примере
14 соединения. RF 0,50 (LM4).
MS (FAB) 716 (M+1), Пример 17, N-(N-N-(цис-4-третичныйбутоксикарбониламино- циклогексилкарбон ил-фен ил алан и н ил)-гистиди н ил)-2-(5-$амино-6-циклогексил- ÇS,4R-дигидрокси-пгексил)-пиридин.
60 мг соединения иэ примера 17а смешиваются с 40 мг тиофенола в 2 мл ацетонитрила в течение 2 ч.
После концентрации раствор хроматографируют (селикагель, LM4) и получают 45 мг продукта в виде аморфного порошка.
М$ (FAB) 802 (М+1). а) Вос-цис-АСС-Phe-гис-(0НР)2(5-амина-6-циклогексил -3$,4R-дигидирокси-пге ксил)-пи ридин.
60 мг Вос-гис(0й Р)-(ÇS,4R,5S)-2-(5-аминЬ-6-циклогексил- 3,4-дигидрокси-гексил)пиридина перемешиваются в5 мл DME-HCI в течение 2 ч. После концентрации исходный продукт вместе-с 50 мг N-(N-третичный бутоксикарбонил-цис-4-аминоциклогексилкарбонил)-L-фенилаланина. 120 мг DCC и 80 мг HQBt растворяется в 3 мл DMF. Водородный показатель рН раствора доводится с помощью NEM до значения 9 и раствор перемешивается 16 ч. Раствор фильтруется, разбавляется эфиром уксусной кислоты и каждый раз промывается 3 Д-ным раство ром ИаНСОз, НгО и насыщенным раствором NaCI, высушивается с помощью M9$0<. концентрируется и хроматографируется на селикагеле LMÇ). Получают 60 мг указанного в заголовке соединения в виде желтой пены.
М$ (FAB) 968 (M+1), б) Вос-гис(ИЧ Р)-(ÇS,4R,5$)-2-(5-ами но6-циклогексил- 3,4-дигидрокси-гексил)-пиридин.
0,5 ммоль (ÇS, 4R. 5$)-изомера из примера 17с) перемешиваются с 5 мл HCI в DME (насыщенном) в течение 2 ч. После концентрирования в вакууме остаток растворяется в 3 мл абсолютного DMF. Добавляется по
0,5 миллимолей Вос-гис(ОИР)-ОН, дициклогексилкарбодиимида и HOBt. Раствор с помощью NHM доводится до водородного показателя 9 и перемешивается в течение
24 часов. После фильтрации разбавляется
EE и каждый раз промывается 3 ь-ным раствором МаКСОз, высушивается с помощью
М9$04 и концентрируется. Хроматография на селикагеле (LMI) дает указанное в заголовке соединение в виде желтой смолы.
MS (FAB) 696 (M+1). с) .2-((ÇS,4R,5S)-5-третичный-бутоксикарбониламино -3,4-дигидрокси-б-циклогексил-п-гексил)-пиридин.
93 мг (1 миллимоль) 2-пиколина в 10 мл
THF смешиваются при температуре 78ОС с
1,4 мл (1 миллимоль) п-BuLI, После нагревания до комнатной температуры смесь перемешивается в течение 30 мин, затем охлаждается до температуры40 С. Добавляется 1 ммоль (2RS,3R,4$)-3третич н ый-бутилдиметил
-силилокси-4-третичн ый-бутоксикарбониламино-5-циклогексил-1,2-оксопентана (растворен в 5 мл THF), После выдержки в течение 10 ч при комнатной температуре смесь разбавляетея водой и экстрагируется с помощью MTBE. Исходный продукт(0,4 г) разбавляется в THF и смешивается с 5 мл одномольного раствора тетрабутиламмониевого фторангидрида в THF при 0 С в течение 1 ч. После разбавления водой и экстрагирования с помощью ЕЕ получают
0,15 r (ÇS,4R,5S)-изомера MS(FAB): 391(M+1) и 0,12 r (ÇS,4S,5S}-изомера MS (FAB):391 (М+1).
Пример 18. Цис-4-аминоциклогексилкарбонил-1 -Phe-1 -His-(1-S- циклогексилметил 2R,3$-дигидрокси-5(2-пиридил))-п-пентил- амидтристрифторацетат, 25 мг описанного в примере 17 соединения перемешиваются в 1 мл ТгА/1 мл СН2О2 в течение 2 ч. После концентрирования смесь растворяется в HzO и лиофилизируется. Получают 20 мг продукта в виде бесцветного порошка.
MS (ЕАВ) 702 (М+1).
Пример 19. Вос-транс-АСС-1 -Phe-1=
His-(1S-циклогексилметил- 2R,3$-дигидрокси-5-(2-пиридил))-п-пентиламид.
Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 17 способом из описанного в примере
19а соединения. RF 0,19 (LM2). Выход составил 79,5 мг.
MS (FAB) 802 (М+1). а) BOC-.òðàíñ-АСС-LPhe-L-His(DNP)-(1S-циклогексилметил- 2R,ÇS-дигидрокси-5(2-пиридил)-п-пентиламид.
Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 17 а способом из описанных в примерах За и 19б соединений., RF 0,40 (LM2).
MS (FAB) 968 (М+1). б) Н-гис(ЭИР)-(ÇS,4R,5S)-2-(5-амино-6циклогексил-3,4- дигидрокси — п-гексил)-пиридин-гидрохлорид.
400 мг соединения из примера 17) перемешиваются в 10 мл насыщенного раствора
DME/HCI в течение 2 ч. После концентрирования раствор дважды растворяется в толуоле и каждый раз вновь концентрируется.
1836382
Получают указанное в заголовке соединение в виде желтой пены.
MS (FAB} 596 (M+1).
Пример 20. Транс-АСС-L-Phe-L-Hls(tS-циклогексилметил- 2R,3S-дигидрокси-5(2-пиридил))-п-пентиламид.
Укаэанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 18 способом из описанного в примере 19 соединения Выход составил 49 мг.
Ms (FAB) 702 (M+1).
Пример 21. BOC-транс-АСС-{=Ту {0метил)-{:Н(з- (IS-циклогексилметил-2R,3Sдигидрокси-5-(2-пиридил)-п-пентиламид.
Указанное в заготовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 17 способом из описанного в примере
21а) соединения.
MS(FAD) 832 (М+1). а) ВОС-транс-АСС-L-Туг(О-метил)-!.-Hts
DNP)-(lS- циклогексилметил-2R,3$-дигидрокси-5-{2-пиридил))-п-пентил-амид.
Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 17а) способом из описанных в примерах 21 б и 19 б соединений.
М$ (FAB) 998 (М+1). б) ВОС-транс-ACC-тир(ОСНз)-ОН.
0,05 моль BOC-транс-АСС-тир(ОСНз)ОСНз растворяют в 250 мл DME, перемешивают количеством в однонормальном растворе NaOH s течение 5 ч. После этого раствор концентрируется, остаток растворяется водой, подкисляется с помощью
KHSO4 до получения водородного показателя рН4 и экстрагируется с помощью EE.
Исходный продукт перекристаллизовывается из и-гептан/EE и получается указанное в заголовке соединение в виде белого порошка. Температура плавления 181 "С, Разложение. Rt-. 0,20 (толуол/этанол 8;2).
MS (DCl) 421 (М+1). с) ВОС-транс-АСС-Туг(ОСНз)-ОСНз
0,1 моль BOC-транс-АСС-ОН и 0.1 моль
L-тирозин(ОСНз)-метилового эфира растворяют в 500 мл ОМР и смешивают при температуре 0 С в присутствии N2 со 100 Мп и-PropPA (50-процентный раствор в CH2CI2) и 0,5 моль триэтиламина. Раствор в течение ночи приводится в состояние реакции. После окончания реакции (DC-контроль} растворитель отгоняется в глубоком вакууме и остаток растворяется в ЕЕ. Органическая фаза соответственно дважды экстрагируется с помощью 10-процентной лимонной кислоты, воды, полунасыщенного раствора
ЙаНСОз и насыщенного раствора NaCI, высушивается с помощью Mg$04, концентрируется в вакууме и хроматаграфируется (селикагель, LM5). Температура плавления
150-155 С.
MS (FAB) 435 (M+1).
Пример 22. Транс-АСС-1=Туг(0-ме5 тил)-{:His (1S- циклогексилметил-2R: 3$-дигидрокси-5-(2-пиридил)-п-пентиламид.
Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 18 способом из описанного в примере
10 21 соединения.
MS (FAB) 732 (М+1).
Пример 23, ВОС-цис-АСС-L-ТуКО-метил)-(;His-(1$-циклогексилметил-2R,3$- дигидрокси-5-(2-пиридил)-п-пентиламид.
15 Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 17 способом из описанного в примере
23а) соединения. RF 0,21 (LM2).
MS {FAB) 832 (М+1).
20 а) В ОС-цис-АСС-1.-Туг(0-метил)-{ -Hls(Ой Р)-(1 S-циклогексиметил -2R,3S-дигидрокси-5-(2-и и ридил))-п-пентиламид.
Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в при25 мере 17а) способом из описанных 8 примерах 23б) и 196) соединений.
MS (FAB) 998 (М+1). б) DOC-цис-АСС-Туг(ОСНз)-ОН.
Указанное в заголовке соединение пол30 учается по аналогии со способом примера
21б), а 5д =+18,6 C (c-1, метанол).
MS (DCl) 421 (М+1). с) BOC-цис-ACC-Туг(ОСНз)-метиловый эфир.Укаэанное в заголовке соединение получается по аналогии со способом примера
21 с).
MS (DCt) 435 (М+1).
Пример 24. Цис-АСС-(=Туг (О-метил){=Н! з-(1S- циклогексилметил-2R,3$-дигидрокси-5-(2-пиридил))-п-пентиламид.
Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 18 способом из описанного в примере
"5 23 соединения. RF 0,56 (LM4).
MS (FAB) 732 {М+1), Пример 25. ВОС-цис-АСС-Phe-His(1S-циклогексилметил-2S -гидрокси-5-(Nпропил-2-имидазолил))-пентиламид.
Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 17 способом из описанного в примере
25 соединения.
М$ (FAB) 817 (М+1).
a) BOC-цис-АСС-Phe-Hls-(DNP)-(1$-циклогексилметил-2S- гидрокси-5-{N-пропил-2имидазолил))-пентипамид.
80 мг соединения из примера 8 перемешиваются с 4 мп НО s насыщенном ОМЕ в
1836382 течение 2 часов. После концентрирования в вакууме остаток абсолютно растворяется в
3 мл DMF. Добавляется 44 мг BOC-цис-ACCPhe-OH и по 0,11 миллимоля DCC u HOB(.
Водородный показатель раствора с помощью NEM доводится до значения 9 и раствор перемешивается в течение 24 часов.
После фильтрации раствор разбавляется с помощью ЕЕ и каждый раз дважды промывается 3 -ным раствором ИаСОз, Н20 и на- 10 сыщенным раствором NaO, высушивается с помощью М9$0 и концентрируется. Хро4 матография на селикагеле дает указанное в заголовке соединение в виде желтой смолы, MS (FAB) 983 (M+1). 15 б) BOC-His-(DNP)-(1$-циклогексилметил-2S-гидрокси-5- (N-пропил-2-имидазолил))-пентиламид.
100 мг соединения из примера "с" перемешиваются с 5 мл HcN в насыщенном 0МЕ 20 в течение 2 ч, После концентрирования в вакууме остаток абсолютно растворяется в
3 мл DMF. Добавляется 105 мг BOC-Hls(OMP)-ОН и по 0,3 миллимоля DCC и HOBt, Водородный показатель раствора с по- 25 мощью НЕМ доводится до значения 9 и раствор перемешивается в течение 24 ч. После фильтрации раствор разбавляется с помощью ЕЕ и дважды промывается 3-процентным раствором ИаСОз, Н20 и насыщенным 30 раствором NaCI, высушивается с помощью
MgSO4 и концентрируется, Хроматография на селикагеле дает указанное в заголовке соединение в виде желтой смолы.
MS (FAB) 711 (M+1). 35 с) 500 мг соединения из примера "6" абсолютно растворяются в 5 мл THF в атмосфере аргона при температуре 60 С, добавляют 1,9 мл 1,5 молярного раствора и-бутил-лития в и-гексан. По истечении 15 40 минут присоединяют 500 мг соединения из примера "е", абсолютно растворенного в 5 мл THF. По истечении 1 ч при 60 С добавляют 10 мл насыщенного раствора йаНСОз.
После нагревания до комнатной температу- 45 ры, раствор трижды экстрагируется с помощью ЕЕ, высушивается с помощью йа2$04 и концентрируется. Путем хроматографии на селикагеле (LMEE) получают указанное в заголовке соединение. 50
R(f) 0,3 (Е Е); MS (FAB) 408 (М+1). б) 2-метил-N-и-пропил-имидазол, 10 r 2-метил-имидазола нагреваются в
40 мл и-пропилбромида в течение 2 часов до кипения. Затем до 150 мл доливается 5-про- 55 центный раствор МаНЯОа раствор трижды экстрагируется с помощью ЕЕ, высушивается в помощью Ма2$04 и концентрируется.
Остаток растворяется в эфире и путем фильтрации отделяется от нерастворимого исходного материала. Таким образом получается указанное в заголовке соединение в виде бесцветного масла.
R(fj 0.2 (ЕЕ/СНзОН 10:1).
d) З-Вос-циклогексилметил-2,2-диметил-5-(2-бромэтил)-оксазолидин, К 690 мг 3-Вос-1S-циклогексилметил2,2-диметил-5-(2- гидроксиэтил)-оксазолидина,.2 6 r трифенилфосфина и 1,6 г пиридинбромида в 15 мл СН2С!2 каплями при температуре 20 С в присутствии аргона добавляется 1,6 мл диэтилового эфира азодикарбоновой кислоты, После выдержки в течение 16 ч при комнатной температуре добавляется вода и раствор разбавляется
100 мл CHzCIz. Органическая фаза дважды промывается насыщенным раствором
МаНСОз и один раз раствором NaCI. Высушенная с помощью Naz$0< органическая фаза концентрируется, остаток растворяется в небольшом количестве ЕЕ и фильтруется для отделения РРпз. Очищение на селикагеле дает указанное в заголовке соединение (1 М6).
R(f) 0,3 (LM6); MS 404 (M+1).
f) З-ВОС-4S-циклогексилметил-2,2-диметил-5-(2-гидроксиэтил) -оксазолидин.
10 r BOC-ACHPA-OCzHs в 500 мг р- толуолсульфокислоты и 7,2 мл диметоксипропана нагреваются в 160 мл толуола в присутствии аргона в течение 2 ч 80 С. Затем раствор концентрируется, Остаток при
ООС добавляется каплями к суспензии из 2 г
LiA 1 Н4 в 200 мл THF. После выдержки в течение 2,5 ч при 0 С добавляется 100 мл
5%-ного раствора NaHS04 и раствор экстрагируется трижды с помощью EE. Очищенные .органические фазы промываются насыщенным раствором йаНСОз. После высушивания с помощью Na204 раствор концентрируется и хроматографируется с помощью селикагеля (LM6).
R(f) 0,1 (LM6); MS (DCI) 342 (М+1).
Пример 26. Цис-АСС-Phe-Hls-(1S-циклогексилметил -2S-гидрокси-5(й-пропил-2имидазолил))-пентиламид.
Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в и римере 18 способом из описанного в примере
25 соединения.
MS (FAB) 717 (М+1).
Приведены биологические испытания соединений по изобретению, 1. Принцип испытания.
Плазма человека, которая содержит как ренин, так и ангиотензиноген, например, инкубируется при 37 С с помощью испытываемого соединения. При этом из ангиотензиногена под воздействием ренина высвобождается внгиотензин 1. который за1836382
Концентрации испытываемых препаратов выбираются таким образом, что перекрыт примерно диапазон подавления фермента в 10-90 (по меньшей мере пять концентраций), В конце времени инкубации из каждой исходной смеси три пробы по 100 мкл в предварительно охлажденных сосудах Эппендорфа замораживаются на сухом
55 тем может быть измерен с помощью стандартного радиоиммуноанализа, Это высвобождение.ангистензина затормаживается с помощью ингибиторов ренина.
2. Получение плазмы. 5
Кровь получается от добровольцев (око. ло 0,5 л на каждое лицо, прибор для взятия крови фирмы "Азид Банц унд Зон", Унтершлайсгейм) и собирается при охлаждении на льду в бутылки, в которых частично создано 10 разрежение. Свертывание предотвращается путем добавления этилендиаминтетрауксусной кислоты (EDTA) (конечная . концентрация 10 миллимолей). После центрифугирования (ротор HS4 (Сорвалл), 3500 15 об/мин, 0-4 С, 15 мин; при необходимости повторяется) плазма осторожно отбирается пипеткой и замораживается соответствующими порциями при температуре -30ОС.
Для испытания используются только плаз- 20 мы с достаточно высокой активностью ренина. Плазмы с низкой активностью ренина активизируются путем обработки холодом (температура -4 С в течение 3 дней) проренин превращается в ренин). 25
3. Проведение испытания.
Ангиотенэин 1 определяется с помощью ренин-маиа -кит(Яепопо 0iagnostics
S.À., Швеция), Инкубация плазмы проводится в соответствии с укаэанной там инструк- 30 цией:
Инкубационный состав: 1000 мкл плазмы (разморожена при 0-4 С), 100 мкл фосфатного буфера (рН 7,4), добавка 10 4 моль рамиприлата), 10 мкл раствора РМ, 10 мкл 35 . 0,1 генапола PFIC, 10 мкм диметилсульфоксида или испытываемого препарата.
Испытываемые препараты с концентрацией 10 моль в 100 диметилсульфоксида и соответственно разбавляются диметил- 40 сульфоксидом, инкубационная. исходная смесь содержит максимум 1% диметил сульфоксида.
Исходные смеси смешиваются в присутствии льда и помещаются для инкубации на 1 ч в водяную ванну (37 С). Иэ дополни- 45 тельной исходной смеси без ингибитора отбирается без дальнейшей инкубации всего
6 проб (соответственно по 100 мкл) для определения исходного содержания ангиотензина 1 использованной плазмы. 50 льду и хранятся при температуре около25 С для определения ангиотенэина 1 (среднее значение из трех отдельных проб).
Торможение очищенного почечного ренина человека.
Ангиотензин 1 применяется в следующей опытной смеси: 3,75 мкм ренин-субстрата, Asp-Arg-Val-Tyr-Je-His-Pro-Phe-Н! в
-Leu-майе-Mls-Азп- (Бахем АГ, Бубендорф, Швейцария). 0,24 мг альбумина бычьей сыворотки(сигма М А-7638), 1,.6 мм ЭДТА,О,OS
М фосфатного буфера, значение рН 7,5, 1 мм фенилметилсульфонилфторида, Генаполь (R) PF 10 (в качестве детергента; Кальбиохем
ГмбХ, Франкфурт, Германия) и почечный ренин человека, достаточный для получения около.3-5 нг ангиотензина 1мл/ч.
Общий объем теста составляет 1,2 мл.
Тест-соединения вводятся как растворы в диметилсульфоксиде (1 (, конечная концентрация), Смешивание происходит при 0 С, детергент удаляется и 2 ч инкубируется при
37 С. После 40/80/120 мин берутся пробы
250 мкл и посредством нагрева выдерживаются при 96 С в течение 2 мин.
Результаты испытания сведены в таблице.
Проведенные испытания показали, что соединения, полученные описываемым способом малотоксичны и обладают более высокой ренин-ингибирующейактивностью.
Ф.ормула изобретения
Способ получения производных дипептидов общей формулы
Rg ОН Р, Р 1-Ю-А- -NH-CH-СН-CH-йл, где Ri — (С4-C6)-циклоалкил, причем циклоалкильный заместитель может быть аминоил и (C>-С4)-алкоксикарбониламинозамещенным;
W — -CO-;
R2 †(C4-Ст)-циклоалкил-(С1-С4)алкил;
Яз — водород или гидрокси;
R4 — остаток общей формулы
СН2 СН2 0 где 0 — 2-, 3- или 4-пиридиновый или 2-, 4-имидазольный остаток, которые могут быть замещены (C > — С4)-ал килом, Аи В независимодруготдруга-связанный N-концом с R> или А, или С-концом.с В, или с NH-CHR2 CHOH-СНРэ-R4 радикал аминокислоты из ряда: фенилаланин, гистидин, тирозин, лейцин, изолейцин, валин, аланин, (м)-метилгистидин; о-метилтирозин, о-третбутилтироэин, норвалин, норлейцин или фармацевтический приемнемых солей, отличающийся тем, что
1836382
Реннин-ингибирующая активность описываемых соединений
Составитель О.Волкова
Техред М.Моргентал Корректор М.Мэксимишинец
Редактор
Заказ 3006 Тираж Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101 подвергают взаимодействию кислоту
R WAOH или ее реакцонноспособное производное с HzN —  — NH — СН(йг) — CH(OH) — CH(Rg)R<, при необходимости, с последующим отщеплением временно введенных защитных групп и выделением целевого продукта в свободном виде или в виде фармацевтически приемлемых солей.
