Способ получения инсулина

 

Изобретение относится к производству медицинских препаратов, может быть использовано для получения различных модификаций препарата инсулина. Изобретение позволяет получить неиммуногенный инсулин и снизить его себестоимость. Инсулин выделяют кислотно-спиртовой экстракцией поджелудочной железы, удаляют липиды и проводят очистку алифатическими спиртами , а затем на ионообменной колонке с использованием в качестве элюента водных растворов оснований. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 А 61 К 37/26

ГОСУДАРСТВЕН-ЮЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОспАтент сссР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Э

О

1 ! (Я

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4906513/14 (22) 30.01.91 (46) 07.08.93. Бюл. М 29 (71) Тверской государственный университет (72) Т.Ю.Салова, Е.И.Милородова. Л.Л.Осипова и В.А.Зубцов (55) Донецкий И.А. и др. Разработка и внедрение новой технологической схемы получения инсулина с использованием сульфокатионита ку-23. В сб. Применение ионнообменных материалов. Воронеж, 1981, с.41. (54) СПОС06 ПОЛУЧЕНИЯ ИНСУЛИНА

Изобретение относится к производству медицинских препаратов, может быть использовано для получения различных модификаций препарата инсулина.

Выпускаемые ранее в СССР формы инсулина содержат неинсулиновые протеины, которые являются антигенными и иммуногенными препаратами.

Целью изобретения является получение инсулина и снижение его себестоимости.

Для достижения цели предложен способ, включающий кислотно-спиртовую экстракцию поджелудочной железы, удаление липидов и очистку. Согласно изобретению очистку инсулина проводят алифатическими спиртами. а затем на ионообменной колонке с использованием в качестве элюента водных растворов оснований. На первой стадии очистка осуществляется добавлением алифатического спирта, содержащего три-четыре атома углерода при значении рН раствора меньше шести, преимущественно 1,5-3,5, в присутствии достаточного количества растворимой в воде неорганической соли (от 5 до 25% веса исходного рас.,.. Ж 1832032 А1 (57) Изобретение относится к производству медицинских препаратов, может быть использовано для получения различных модификаций препарата инсулина. Изобретение позволяет получить неиммуногенный инсулин и снизить его себестоимость. Инсулин выделяют кислотно-спиртовой экстракцией поджелудочной железы, удаляют липиды и проводят очистку алифатическими спиртами, а затем на ионообменной колонке с использованием в качестве элюента водных растворов оснований. 2 табл. твора инсулина). После осуществления реакции инсулин осаждается ацетоном, взятым в количестве 100-300 от объема спиртового раствора.

На второй стадии очистка осуществляется на ионообмен ной колонке. Подходящими ионообменниками для очистки инсулина являются Вофатит=й, ЭДЭ-10 11. Водный раствор инсулина доводят основанием до рН выше шести. Удобными для этой цели являются основания: гидроксид лития, аммония и другие, Лучший вариант — гидроксид натрия. Среда для элюирования может иметь значения рН=-7,5 — 9.5. Обычно такой средой является водный раствор того же основания, который использовался для получения раствора инсулина. Среда для элюирования может содержать от 0,03 до 0,3 моля неорганической соли: хлорида калия, натрия, .аммония, Оптимальный вариант концентрации соли 0,1 моль, а в качестве соли взят клорид натрия. Соль такого рода используют для лучшего разделения и препятствия абсорбции баз: оных субстанций через ионн1. Элюировзние колонки мо:кчо

1832032 Э=(Ц1-Ц2) П2, Таблица1 проводить при температуре от 5 до 30"С, оптимальное значение 20 С.

Таким образом, только использование двухступенчатой очистки инсулина животного происхождения приводит к получению монопикового инсулина в масштабе промышленного производства.

В патентной и технической литературе признаков, входящих в отличительную часть формулы, а именно двухступенчатая очистка инсулина: первоначально алифатическими спиртами, а затем водными растворами .оснований на ионообмен ной колонке, не обнаружено, следовательно, заявляемый способ соответствует критерию "существенные отличия". Положительный эффект достигается тем, что получают чистый инсулин животного происхождения более дешевый, чем известные его формы фирмы "Sigma", Пример 1, 2 кг измельченной поджелудочной железы подвергаются двухступенчатой кислотно-спиртовой экстракции.

Первая экстракция проводится 807-ным этанолом при поддержании рН=2,9 ортофосфорной кислотой, Вторая экстракция проводится 60 -ным этанолом при рН9,9, Экстракты объединяются, центрифугируются, фильтруются и конденсируются до объема 20 л дя удаления этанола.

Полученный концентрат доводят дистиллированной водой до 200 л и обрабатывают четыреххлористым углеродом в ооъемном соотношении 2:1 для отделения липидов. Собранная верхняя фракция, содержащая инсулин, корректируется на рН=2,9, затем объем фракции доводится до

600 л.

В водный раствор инсулина добавляют при перемешивании н-пропанол в объемном соотношении 2:1 и соль NaCI 120 кг, Через один час фазы отделяют центрифугированием, концентрируют и осаждают двойным. объемом ацетона, Осадок отфильтровывают, его вес равен 9,5 r.

Инсулин после очистки на первой стадии растворяется в дистиллированной воде с доведением рН-9 основанием натрия.

Раствор инсулина в количестве 3400 мл наносится на ионитную колонку размером

5х100 см, заполненную смолой ЭДЗ-10 11 и уравновешенную водным раствором основания натрия с рН=9, Элюирование проводится также водным раствором NaOH при рН=9 и градиенте

5 соли NaCI от 0 до 0,3 М Скорость элюирования 300 мл/ч. Монопиковый инсулин собира.ется в первых l400 мл фракциях. Контроль отбора фракций проводится в области УФпоглощения при 1 =280 нм на спектрофотометре.. Выход чистого инсулина 7,03 г, что составляет 74 .

Примеры 2 и 3 проводились по аналогичной методике, Состав и количество применяемых растворителей, ионообменной

15 смолы, электролита представлены в табл.1.

Практическая ценность заявляемого способа по сравнению с прототипом состоит в получении монопикового инсулина животного происхождения при использовании . смол отечественного производства, применение которого не приводит к образованию антител у больных. На основе высокоочищенного инсулина можно получить разнообразные модификации препарата пролонгированного метоболического действия инсулина.

Ожидаемый экономический эффект от использования заявляемого способа составляет 162 393 руб, Расчет представлен в

30 табл.2. где Ц .— цена инсулина формы Sigma, 35 руб. за 1 мг, Ц =4, 10&=24,6 руб;

Цг — цена инсулина, получаемого по предлагаемой технологии, руб/ за.1 мг;

Az — производительность установки за цикл, Пр=7,03 г/за цикл. LL=1.50 руо.

Формула изобретения

Способ получения инсулина из поджелудочной железы йутем измельчения сырья, экстра кция сырья подкислением 80 С спир45 том при рН 2,9, отделение экстракта с последующей очисткой целевого продукта ионообменной сорбцией, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения качества целевого продукта, очистку дополнительно проводят алифатическими спиртами.

1832032

Продолжение табл. 1 одже дочн лез сви говя

Таблица2

Составитель Т.Салова

Техред М.Моргентал Корректор И.Щулла

Редактор

Производственно-издательский комоинвт Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина. 101

Заказ 2599 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5