Способ получения микрокапсулы полипептида

 

Использование в медицине. Сущность изобретения: микрокапсула, предназначенная для высвобождения в нулевом порядке физиологически активного полипептида в течение по меньшей мере двух месяцев, готовится получением эмульсии вода-в-масле, включающей внутренний водный слой, содержащий около 20 - 70 мас% указанного полипептида, и масляный слой, содержащий сополимер или гомополимер со среднемассовой молекулярной массой 7,000 - 30,000 с соотношением молочной и гликолевой кислот от 80/10 до 100/0, с последующей микрокапсуляцией указанной эмульсии. 4 табл.

Изобретение относится к микрокапсулам, предназначенным для длительного высвобождения физиологически активного пептида.

Для препаратов, назначаемых на длительный период, предлагались различные формы дозировки. В заявках Японии Joku-kai Shd N 57118512 и N ЕР А-0052510 раскрывается приготовление микрокапсул способом фазовой сепарации с использованием коацервирующего агента, такого как минеральное масло или растительное масло. Joku-kai Shd 60-100516 (соответствующие патенты США N 4652441 и 4711782), 62-201-816 (ЕР-А-О 190833 и 63-41416) раскрывают способы приготовления микрокапсул посредством высушивания в воде. В соответствии с этими способами лекарство можно заключать в микрокапсулы с меньшим первоначальным высвобождением.

В случае назначения лекарства в форме микрокапсул требования к микрокапсулам, имеющим большую зависимость от взаимосвязи с функциями живого организма, можно разделить на ряд фаз. Поскольку это связано с медициной, нужны микрокапсулы, которые смогли бы по возможности удовлетворять эти различные требования.

Существует много ссылок по микрокапсулам, включающим водорастворимое лекарство с использованием биоразлагающего полимера. Однако при использовании водорастворимого лекарства, особенно физиологически активного пептида с относительно большим молекулярным весом, диффузия лекарства, заключенного таким образом в полимер, низкая, поэтому лекарство не высвобождается на первоначальной стадии до тех пор, пока не начнется разложение или пропитка полимера, и наоборот, в зависимости от способа приготовления трудно избежать большого выброса на первоначальной стадии. Таким образом, при использовании лекарства часто возникают практические трудности, в частности при длительном высвобождении фармацевтических композиций в течение большого периода времени постоянный выход лекарства с большой точностью является важным требованием, но микрокапсулы, удовлетворяющие эти требования, не были известны.

В соответствии с настоящим изобретением получают микрокапсулы, предназначенные для высвобождения в нулевом порядке физиологически активного полипептида на протяжении по меньшей мере 2 месяцев.

Физиологически активные пептиды, используемые в этом изобретении, включают пептиды, состоящие из двух или нескольких аминокислотных групп и имеющих молекулярный вес 200-100,000.

Примеры указанных пептидов включают гормон, высвобождающий лютеинизирующий гормон (ЛГ-рилизинг гормон) и его аналоги, например вещества с похожей активностью как у ЛГ-рилизинг гормона (патенты США N 3853837, 4008209, 3972859 и 4234571, патент Великобритании N1423083 Proceеdings of the National Academy of the USA, vol. 78, p.6509-6512, (1981), антагонисты ЛГ-рилизинг гормона (патенты N 4086219, 4124577, 4253997 и 4317815). Далее можно упомянуть о пролактине, адренокортикотропном гормоне (АКТГ), меланоцитостимулирующем гормоне (МСГ), гормоне, высвобождающем тиреотропин (ТРГ), их солях и производных (СС. Joku-kai Shо N 50-121273, 51-116465), тиреостимулирующем гормоне (ТСГ), лютеинизирующем гормоне (ЛГ), фолликулостимулирующем гормоне (ФСГ), вазопрессине, производных вазопрессина (десмопрессин и т. п. ), окситоцине, кальцитонине, гормоне паращитовидной железы (ГПЩ) и его производных (Cc. Joku-kai Sho N 62-28799), глюкагоне, гастрине, вазоактивном кишечном пептиде (ВПК), липокортине, вазокортине, атриальном натримочегонном пептиде (АНП), эндотеллите, секретине, панкреозимине, холецистокинине, антгиотензине, лактогене человеческой плаценты, хорионическом гонадотропине человека (ХГЧ), энкефалине, производных энкефалина (патент США N 4382923, ЕП заявка N 31567) эндорфине, киоторфине, инсулине, соматостатине, производных соматостатина (патент США N 4087390, 4093574, 4100117 и 4253998), гормонах роста, факторах дифференцировки пролиферацин различных клеток, например инсулиноподобном факторе роста эпидермиса (ФРЭ), факторе роста фибробласта (ФРФ), факторе роста, полученного из тромбоцитов (ФРГ), факторе роста нервной ткани (ФРН), факторе трансформированного роста (ФТР), костно-морфогенном факторе (КМФ), факторе васкуляризации, факторе задержки васкуляризации, фиброниктине, ламинине и т.п., интерфероне α-, β- и γ -типа, интерлейкинах (I, II, III, IV, V, VI и VII), туфстине, тимопойетине, тимосине, тимостиулине, тимусном гуморальном факторе (ТГФ), сывороточном тимусном факторе (СТФ) и его производных (патент США N 4229438) и других тимусных факторах (Proc. Nalt. Acad. Sci. U.S.A. vol. 78, pp. 1162-1166, 1984, факторе некроза опухоли (ФНО), коллоние-стимулирующем факторе (КСФ), мотилине, эритропойетине (ЭП), динорфине, бомбезине, нейтротензине, церулиене, брадикинине, урокиназе, проукокиназе, тканевом плазминогенном активаторе (ТПА) и его производных (Терапевтические пептиды и протеины. Cold. spring Harbor Laboratory, New-Jork, pp.69-74, 1989, стрептокиназе, аспарагиназе, калликреине, веществе II, факторах свертываемости крови VIII и IX, лизозим хлориде, полимиксине В, колистине, гармонцидине, бацитрацине и т.п.

В микрокапсуле, содержащей в качестве физиологически активного полипептида аналог ЛГ-рилизинг гормона, который является водорастворимым и имеет молекулярную массу 1,000 или больше, напр, ТАР-144, выраженный (пир) Glu-His-Jrp-Sor-Jyr-D-Leu-Arg-ProNHC₂H₅, или антагонист ЛГ-РГ, выраженный (пир) Gly-His-Jrp-Ser-Jyr-Leu-Arg-Pro-GlyNHC₂H₅, непрерывное длительное высвобождение осуществляется на протяжении большого периода времени.

Эти физиологически активные пептиды используются в количествах, выбранных в зависимости от вида пептида, желаемых фармакологических действий, длительности этих действий, от 0,01 мг до 5 г, более предпочтительно от 0,1 мг до 2 г как дозировка микрокапсул. Концентрация в микрокапсуле зависит от физико-химических свойств лекарства и она выбирается в пределах около 0,01 - 50 мас.%, более предпочтительно 0,1 - 30 мас.%.

Концентрация во внутренней фазе микрокапсулы около 20-70 мас.%, предпочтительно 25-65 мас.%, еще более предпочтительно 35-60 мас.%, зависит от физико-химических свойств, таких как растворимость в воде.

Примеры полимера, используемого в качестве вещества, контролирующего высвобождение, включают сополимеры или гомополимеры из молочной кислоты - гликолевой кислоты - которые имеют кислотную группу в молекуле, слабо растворимы или нерастворимы в воде и биосовместимы. Их соотношение зависит от срока, необходимого для длительного высвобождения, и выбирается в пределах от 100/0 до 80/20, предпочтительно 100/0-90/10, еще более предпочтительно 100/0. В качестве молочной кислоты можно использовать L=, D= и DL=молочную кислоту, в частности сополимер или гомополимер, полученный полимеризацией мономера или олигомера DL-молочной кислоты.

Как сополимер или гомополимер, состоящий из DL-молочной кислоты - гликолевой кислоты, хорошо используются такие полимеры, практически не содержащие катализатора, полученные полимеризацией в отсутствие катализатра (Joku-kai. Sho 61-285215). Предпочтительны полимеры со степенью дисперсии (коэффициент среднемассовой молекулярной массы к среднечисловой молекулярной массе) 1,5-3,0, особенно 1,5-2,5.

Длительность периода непрерывного пролонгированного высвобождения микрокапсул этого изобретения в большой степени зависит от молекулярной массы полимера и соотношения состава молочной кислоты - гликолевой кислоты. В случае приготовления, например, микрокапсул с непрерывным высвобождением нулевого порядка на три месяца по меньшей мере при соотношении состава молочной-гликолевой кислот 100/0 предпочтительно средняя молекулярная масса полимера колеблется от 7,000 до 25,000, при 90/10 - от 7,000 до 30,000 и при 80/20 - от 12,000 до 300,000.

В предлагаемом способе средняя молекулярная масса и степень дисперсии означают величины, которые определяются посредством хроматографии гельпроницаемости с использованием коммерчески доступного полистирена стандартной молекулярной массы.

Концентрация полимера в масляной фазе при приготовлении микрокапсул выбирается в пределах 0,5-90 мас.%, более предпочтительно 2-60 мас.%.

Раствор (масляная фаза), содержащий указанный полимер, представляет собой полимер, растворенный в органическом растворителе. Данный органический растворитель может быть любым органическим растворителем с точкой кипения не выше 120^о С и плохо смешиваемым водой. Примерами являются галогенированные алканы, например дихлорметан, хлороформ, хлорэтан, трихлорэтан, тетрахлорид углерода и т.п., этиловый ацетат, этиловый эфир, бензол, толуол и т.п. Их можно использовать как смесь двух или несколько компонентов.

В настоящем изобретении нужные микрокапсулы с меньшим первоначальным высвобождением можно приготовить без добавления вещества, сохраняющего лекарство, но его можно дополнить в соответствии с ситуацией. Веществом, сохраняющим лекарство, является соединение, придающее повышенную вязкость внутренней водной фазе или затвердение под действием введения в температурных условиях иона или соединения с основной остаточной группой с протонным зарядом, которое взаимодействует с примером и увеличивает вязкость эмульсии типа в/м.

Примеры упомянутого вещества, сохраняющего лекарство, включают желатин, агар, альгиновую кислоту, поливиниловый спирт или основную аминокислоту, такую как аргинин, лизин и т.п., полипептид, содержащий основную аминокислоту, органическое основание, такое как N-метил глюкамин и природный или синтетический основной полимер. Эти соединения могут использоваться отдельно или как смесь двух или нескольких из них. Хотя количество используемых соединений зависит от их вида, желательно иметь концентрацию во внутренней водной фазе 0,05-90 мас.%, более предпочтительно 0,1-80 мас.%.

В качестве традиционных способов контроля высвобождения из этих микрокапсул используется способ изменения скорости гидролиза (Biomaterials, vol. 5, 237-240, 1984) и способ, включающий введение водорастворимого соединения в матрицу микрокапсул для создания водных каналов для высвобождения лекарства. Однако первый способ грешит тенденцией сокращать длительность высвобождения, а второй стимулирует только первоначальный выброс. Таким образом, вряд ли можно достичь высвобождения нулевого порядка. В способе Chem. Pharm. (Bull. vol 36/4/1502-1507, 1988) возникает опасность появления нежелательных побочных действий благодаря увеличению лекарства в крови на первоначальной стадии. Кроме того, существует способ (Joku-kai Sho 57-150609), который включает такое соотношение полимеризации молочной - гликолевой кислот (ПМТК), которое увеличивает время длительности высвобождения. Однако этот способ направлен на увеличение скорости разложения полимера, который естественно сокращает длительности высвобождения, что является ограничением в реализации непрерывного высвобождения в течение долгого периода времени.

Микрокапсулы с пролонгированным высвобождением по настоящему изобретению готовятся следующим образом.

Вначале физиологически активный пептид добавляется к воде в количестве для упомянутой концентрации, к которой далее при необходимости добавляется вещество, сохраняющее лекарство, такое как вышеупомянутый желатин или основная аминокислота, чтобы раствор или суспензия имели нужную концентрацию для получения внутренней водной фазы.

К этой внутренней водной фазе можно добавить рН регулирующий агент для поддержания стабильности или растворимости физиологически активного пептида, такой как угольная кислота, уксусная, щавелевая, лимонная, фосфорная, соляная кислота, гидроокись натрия, аримин, лизин и их соли. Еще можно добавить в качестве стабилизатора физиологически активного пептида белок, желатин, лимонную кислоту, натрий этилендиамин тетраацетат, декстрин, кислый сульфит натрия или полиоловое соединение, такое как полиэтилен гликоль. В качестве консерватора можно ввести обычные вещества, такие как параоксибензойной кислоты эфир, например метилпарабен, пропилпарабен, бензиловый спирт, хлорбутанол или тимерозал.

Полученная таким образом внутренняя водная фаза добавляется к полимерсодержащему раствору (масляная фаза) с последующей процедурой эмульгирования для получения эмульсии типа в/м. Для процедуры эмульгирования используется известный способ получения дисперсии. Как, например, способ перемежающегося встряхивания, использующий миксер типа пропеллерной мешалки, турбинной мешалки или т.п., коллоидную мельницу, способ гомогенизации или ультразвуковой способ.

Далее приготовленная таким образом эмульсия подвергается микрокапсулированию. Как средство для микрокапсуляции может использоваться способ высушивания в воде или фазовой сепарации. В случае приготовления микрокапсул высушиванием в воде указанная в/м эмульсия далее добавляется к третьей водной фазе для получения тройной в/м/в эмульсии, после этого растворитель в масляной фазе выпаривается до получения микрокапсул.

К внешней водной фазе может быть добавлен эмульгирующий агент. В качестве такового можно использовать любой агент, способный образовать стабильную м/в/м эмульсию, например анионное поверхностно-активное вещество, например олеат натрия, стеарат натрия, натрий лаурил сульфат и т.п., неионное поверхностно-активное вещество, например полиоксиэтиленсорбентный эфир жирной кислоты (Twenn 80, Twenn 60, продукты Atlas Powder Co), полиоксиэтилен производное касторовое масло (НСО-60, НСО-50, продукты Nikko Chemicals) и т. п. , поливинил пирролидон, поливиниловый спирт, карбоксиметилцеллюлозу, лецитин или желатин. Такие эмульгаторы можно использовать по отдельности или в комбинации. Концентрация эмульгирующего агента выбирается в пределах 0,01-20%, предпочтительно 0,05-10%.

Для выпаривания растворителя из масляной фазы используется любой из традиционных способов. Способ осуществляется постепенным снижением давления с одновременным перемешиванием пропеллерной или магнитной мешалкой или использованием вращающегося испарителя с регулированием степени вакуума. В этом случае необходимое время можно уменьшить постепенным согреванием в/м/в эмульсии после затвердевания полимера до некоторой степени, чтобы полнее удалить растворитель.

Полученные таким образом микрокапсулы собираются центрифугированием или фильтрацией, промываются несколько раз дистиллированной водой для удаления свободного физиологически активного пептида, вещества, сохраняющего лекарство, и эмульгирующего агента, прилипшего к поверхности микрокапсулы, с последующей дисперсией полученного вещества в дистиллированной воде и высушиванием при температуре ниже 0^оС, при необходимости согреванием при пониженном давлении для более полного удаления влаги в микрокапсулах и растворителя в стенке микрокапсулы.

В случае приготовления микрокапсул способом фазовой сепарации агент коацервации медленно добавляется к упомянутой в/м эмульсии при перемешивании, чтобы дать полимеру осесть и затвердеть. Агентом коацервации может быть любое способное смешиваться с растворителем полимерное соединение, соединения минерального или растительного масла, например силиконовое масло, кунжутное, соевое, кукурузное, хлопковое, кокосовое, льняное масла, минеральные масла, н-гетан, н-гептан, и т.п. Их можно использовать в смеси из двух или нескольких.

Полученные микрокапсулы собираются фильтрацией и промываются, например, гептаном повторно, чтобы удалить бедный растворитель полимера. Далее удаление свободного лекарства и отделение растворителя проводится так же, как в способе высушивания в воде. Для противодействия слипанию микрокапсул одна с другой во время промывания может быть добавлен агент.

Микрокапсулы настоящего изобретения, предназначенные для продолжительного высвобождения, полученные способом высушивания в воде, обладают лучшими и более стабильными свойствами длительного высвобождения на протяжении большего периода времени.

Микрокапсулы по предлагаемому способу назначаются в виде инъекций, имплантаций и в виде агентов, поглощаемых слизистой оболочкой прямой кишки или матки. После легкого дробления при необходимости микрокапсулы просеиваются для удаления слишком больших из них. Средний размер гранул микрокапсул 0,5-1000 μ м, желательно и предпочтительно 2-500 μ м. Если микрокапсулы используются в виде инъекций в форме суспензии, размер гранул должен быть достаточным и удовлетворять требованиям дисперсности и введения в виде инъекций, например в пределах 2-100 μ м.

Микрокапсулы, полученные способами по этому изобретению, имеют много преимуществ. Например, они почти не подвержены слипанию при изготовлении. Можно изготовить микрокапсулы, которые могут быть сферическими по форме с разными размерами. Ступень удаления растворителя из масляной фазы легко проконтролировать, следовательно, также можно контролировать поверхностную структуру микрокапсул, что является решающим фактором в скорости высвобождения лекарства.

Микрокапсулы, полученные данным способом, можно свободно назначать в виде инъекций и имплантировать внутримышечно, подкожно, внутривенно или на орган, составную полость или на поражение, такое как опухоли. Их также можно назначать в различной дозировке и использовать как материал при приготовлении таких форм дозировок. Например, в приготовлении микрокапсул по этому изобретению для инъекций они диспергируются в водной среде вместе с диспергирующим агентом, например Tween 80, НСО-60, карбоксиметилцеллюлоза, алгинат натрия и т.п., консервантом, например метилпарабен, пропилпарабен и т.п., изотонирующим агентом, например хлорид натрия, маннит, сорбит, глюкоза и т.п., или суспендируются в водной среде вместе с растительным маслом, таким как кунжутное масло или кукурузное масло. Такая дисперсия или суспензия формируется в практически используемый инъекционный раствор пролонгированного действия.

Микрокапсулированный инъекционный раствор с пролонгированным действием можно преобразовать в более стабильный инъекционный раствор добавлением дополнительного наполнителя, например маннит, сорбит, лактоза, глюкоза и т. д. , повторным диспергированием полученной смеси и отвердением посредством высушивания при температуре ниже 0^оС или распылительным высушиванием с добавлением дистиллированной воды для инъекций или какого-либо соответствующего диспергирующего агента.

Доза препарата с длительным высвобождением в соответствии с данным изобретением может меняться в зависимости от вида и количества физиологически активного пептида, который является активным ингредиентом, формы дозировки, длительности или высвобождения лекарства, животного-реципиента, например теплокровных животных, таких как мышь, крыса, кролик, овца, свинья, корова, лошадь, человек, и цели назначения, но должна быть в пределах диапазона эффективной дозы данного активного ингредиента, например разовую дозу микрокапсул на данное животное можно адекватно выбрать в пределах от 0,1 мг до 100 мг/кг веса тела, предпочтительно 0,2 мг - 50 мг/кг веса тела.

Таким образом, получена фармацевтическая композиция, приготовленная в форме микрокапсул, которые включают эффективность, но большее количество физиологически активного пептида по сравнению с обычной единой дозой и биосовместимый полимер, и способная высвобождать лекарство непрерывно на протяжении длительного периода времени.

Препарат длительного высвобождения в соответствии с настоящим изобретением обладает среди других следующими характеристиками: 1) Непрерывное длительное высвобождение физиологически активного пептида достигается в различных формах дозировки. В частности, там, где требуется долгосрочное лечение, желаемых терапевтических эффектов можно достичь при стабильном действии инъекцией препарата раз в три месяца или раз в шесть месяцев вместо ежедневного назначения. Таким образом, указанный препарат достигает длительного высвобождения лекарства на протяжении большего периода по сравнению с обычными препаратами такого действия; 2) Если препарат, в котором используется биоразлагаемый полимер, назначается в форме инъекций, такой хирургической операции, как имплантация, больше не требуется, препарат можно назначать подкожно, внутримышечно или на орган или пораженный участок с легкостью таким же образом, как обычные суспензионные инъекции. Нет необходимости удалять матрицу из тела после завершения высвобождения лекарства.

Следующий стандартный пример и примеры иллюстрируют изобретение более подробно.

С т а н д а р т н ы й п р и м е р . Четырехгорлая колба, снабженная термометром, холодильником и вводом для азота, загружалась 160 г 85%-го водного раствора DL-молочной кислоты. Раствор нагревался при пониженном давлении 6 ч в потоках азота при внутренней температуре и давлении в пределах от 105^оС и 350 мм рт.ст. до 150^оС и 30 мм рт.ст. для удаления дистиллированной таким образом воды. Реакция продолжалась при 175^оС 90 ч при пониженном давлении 3-5 мм рт.ст., далее охлаждалась до комнатной температуры для получения 98 г практически бесцветного плотного полимера. Этот полимер растворялся в тетрагидрофуране, среднемассовая молекулярная масса и степень дисперсии определялась посредством гелеопроницаемой хроматографии с использованием коммерчески доступного полистирола со стандартной молекулярной массой 17,200 и 1,89 соответственно.

П р и м е р 1. ТАР-144 (400 мг) растворялся в 0,5 мл дистиллированной воды для получения водной фазы. Водный раствор добавлялся к раствору 4 г поли-DL-молочной кислоты (Lot N 870818, среднемассовая молекулярная масса 18.000 [микрокапсула Lot N 244, 245] и Lot N 880622, среднемассовая молекулярная масса 18,200, дисперсность 1,76 [микрокапсула Lot N 248]) в 7,5 мл дихлорметана. Смесь перемешивалась в гомогенизаторе небольшого размера (Polytron продукт Kinematica, Швейцария) около 60 с для получения в/м эмульсии. Эта эмульсия охлаждалась до 15^оС. Затем она выливалась в 1,000 мл 0,25% -го водного раствора, ранее охлажденного при 15^оС, поливинилового спирта (ПВС) и перемешивалась небольшим гомогенизатором для получения в/м/в эмульсии. После этого дихлорметан выпаривался при перемешивании в/м/в эмульсии, чтобы таким образом отвердить внутреннюю в/м эмульсию с последующим сбором такого отвердевшего материала центрифугированием.

Материал вновь диспергировался в дистиллированной воде с последующим центрифугированием, промыванием лекарства и диспергирующий агент затем выделялся в свободном состоянии.

Собранные таким образом микрокапсулы подвергались высушиванию при температуре ниже 0^оС для удаления растворителя, более полного обезвоживания и получения порошкообразного продукта. Содержание лекарства, захваченного в капсулах (Lot 244.245.248), указывалось как 9% и коэффициент захвата составлял 100% или больше.

Эти микрокапсулы назначались крысам (n = 5) для подкожного применения, затем ТАР-144, оставшийся в микрокапсулах, определялся количественно в месте введения инъекции для измерения "ин виво" скорости высвобождения лекарства. Результаты даны в табл.1. Эти капсулы не показывают первоначального выброса, а продолжительное высвобождение ТАР-144 наблюдалось в течение 14 недель, т.е. больше 3 месяцев с хорошей воспроизводимостью.

П р и м е р 2. Таким же образом ТАР-144 (400 мг) растворялся в 0,5 мл дистиллированной воды для получения водной фазы 4 г поли-DL-молочной кислоты со среднемассовой молекулярной массой 8,400 (Lot 870304, микрокапсула Lot 312) и затем растворялся в 5 мл дихлорметана для получения масляной фазы. Водная фаза и масляная фаза смешивались, как описано выше, для получения в/м эмульсии.

Эта эмульсия охлаждалась до 13^оС, выливалась в 1,000 мл 0,25%-го водного раствора поливинилового спирта (ПВС). Смесь обрабатывалась таким же образом, как описано выше, для получения в/м/в эмульсии, которая готовилась в микрокапсулы.

Далее 550 мг ТАР-144 растворяли в 1 мл дистиллированной воды. С другой стороны 4 мг каждого из трех образцов поли-DL-молочной кислоты (Lot N 890717, молекулярная масса 14,100, дисперсность 2,00, микрокапсула Lot N 402; Lot N 890720, молекулярная масса 17,200, дисперсность 1,89, микрокапсула Lot N 405; Lot N 890721, молекулярная масса 17,500, дисперсность 1,87, микрокапсула Lot N 406) растворяли в 7,5 мл каждый в дихлорметане. Указанный водный раствор добавляли к каждому из трех образцов, растворенных в дихлорметане с последующей обработкой таким же образом, как и ранее для получения трех образцов в/м эмульсии. Полученные эмульсии выливались в 1.000 мл каждого из трех образцов 0,25%-го водного раствора ПВС, предварительно охлажденного при 15^оС (первый) и при 18^оС (второй и третий), которые обрабатывались соответственно таким же образом для получения микрокапсул. Коэффициенты захвата лекарства были 101, 113 и 103 соответственно.

В табл. 2 показаны скорости выхода лекарства в соответствующих микрокапсулах, измеряемых так же, как указано выше.

Высвобождение лекарства после небольшого количества первоначальной дозы демонстрирует непрерывное продолжительное высвобождение на протяжении свыше двух месяцев. Срок высвобождения зависел от скорости гидролиза используемого высокомолекулярного полимера.

П р и м е р 3. Микрокапсулы готовились так же, как в примере 1, из водной фазы, полученной растворением 400 мг ТАР-144 в 0,5 мл дистиллированной воды, масляная фаза готовилась растворением 4 г полимолочной-гликолевой кислот (90/10) Lot N 870320 (среднемассовая молекулярная масса 19,000), микрокапсула Lot N 315, Lot N 891020 (среднемассовая молекулярная масса 13,800) микрокапсула Lot N 410. Относительно микрокапсулы Lot N 410 водный раствор готовился растворением 550 мг ТАР-144 в 1 мл дистиллированной воды и использовался как внутренняя водная фаза; температура в/м эмульсии и внешней фазы доводилась до 15 и 18^оС соответственно. Коэффициенты захвата лекарства в этих микрокапсулах были 106 и 100% соответственно. Эти микрокапсулы вводились крысам подкожно так же, как описывалось выше и "ин виво" оценивали скорости высвобождения лекарства. В табл.3 показано действие микрокапсул с продолжительным высвобождением на протяжении непрерывного периода свыше двух месяцев.

П р и м е р 4. Микрокапсулы готовились так же, как в примере 1, из водной фазы, полученной растворением 280 мг 'ТРГ (тиреорилизинг гормон - гормон, высвобождающий тиреотропин, в свободной форме) в 0,25 мл дистиллированной воды, и маслянной фазы, полученной растворением в 6 мл дихлорметана поли-DL-молочной кислоты (средняя молекулярная масса 17,200, дисперсность 1,89), используемой в примере 2, и доведением температуры в/м эмульсии и внешней водной фазы до 15^оС. Коэффициент захвата лекарства в полученных микрокапсулах (Lot N Р-103) составлял 85,8%.

Табл. 4 показывает, что высвобождение лекарства в таких микрокапсулах составляло большой период - около трех месяцев.

Формула изобретения

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МИКРОКАПСУЛЫ ПОЛИПЕПТИДА, предназначенной для высвобождения физиологически активного полипептида по нулевому порядку в течение по меньшей мере двух месяцев путем диспергирования эмульсии типа вода в масле в водной среде с последующим высушиванием, отличающийся тем, что эмульсию вода в масле получают смешением водной фазы, содержащей 20 - 70 мас. % полипептида, возможно, поливиниловый спирт, с масляной фазой, содержащей сополимер или гомополимер молочной и гликолевой кислот со средней мол. м. 7000 - 30000, причем соотношение молочной и гликолевой кислот 80 : 20 - 100 : 0.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что полипептид представляет собой полипептид, содержащий два или более аминокислотных остатка с мол.м. до 200 - 100000, или лютейнизирующий гормон, или аналогичный, растворимый в воде с мол.м. 1000 и более, или полипептид формулы (Pyr) Glu - His - Jrp - Ser - Jyr - D - Leu - Leu - Arg - Pro NHC₂H₅, или гормон, высвобождающий тиреотропин.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что сополимер представляет собой сополимер молочной и гликолевой кислот с соотношением 90 : 10 - 100 : 0.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что гомополимер представляет собой полимолочную кислоту с мол.м. 7000 - 25000.

5. Способ по п.1, отличающийся тем, что водная фаза содержит 25 - 65 мас.% полипептида.

6. Способ по п.1, отличающийся тем, что водная фаза содержит 35 - 60 мас.% полипептида.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2