Способ получения раневого покрытия "дигестол"

 

Изобретение относится к медицине, а именно к способу получения раневого покрытия. Способ получения раневого покрытия "Дигестол" заключается в смешении раствора коллагена с комплексом протеолитических ферментов, выделяемых из печени камчатского краба под названием "Дигестаза". Дигестаза обладает коллагенолитической активностью. Смесь растворов коллагена и дигестазы разливают по кюветам, замораживают и подвергают сублимационной сушке. Сухой продукт может подвергаться структурированию формальдегидом. Высокопористое покрытие - дигестол обладает коллагенолитической активностью и эффективен при лечении ран различной этиологии. 3 з.п.ф.-лы, 2 табл.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способам изготовления раневых покрытий на основе склеропротеинов.

Известен способ получения коллагеновой пленки с иммобилизованной на ее поверхности протеиназой. Для этого пленку активируют цианобромидным [1] или азидным [2] способом, а затем к активированной поверхности ковалентно привязывают различные протеиназы. Недостатком способов является небольшое количество иммобилизированной протеиназы, которая находится исключительно на поверхности покрытия.

Известен способ получения коллагенового порошка с иммобилизованным на поверхности плазмином после активирования водорастворимым карбодиимидом [3]. Недостатком способа является сложная технология, требующая удаления активатора, а также иммобилизация плазмина только на поверхности частиц.

Известные способы [1-3] не позволяют иммобилизовать внутри массы сухого коллагена значительных количеств протеиназ. Особенно трудно включать в состав коллагенового покрытия коллагеназы, так как коллаген является специфическим субстратом и гидролизуется коллагеназой уже при 4^oC; при повышении температуры скорость гидролиза резко возрастает.

Коллагенолитической активностью обладают коллагеназы, выделяемые из некоторых анаэробных бактерий и некоторых тканей животных. Из печени камчатского краба выделили комплекс протеиназ, проявляющих высокую коллагенолитическую активность. Этот комплекс протеиназ назвали "ДИГЕСТАЗОЙ". Включение дигестазы в состав коллагена позволяет получать раневое покрытие с коллагенолитической активностью, что весьма важно для очистки ран и их лечения.

Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому изобретению является способ получения коллагенового материала с иммобилизированным субтилизином [4]. По этому способу 0,5-2,5% водный раствор коллагена смешивают с 0,02-5,0% водным раствором субтилизина при объемном соотношении 20-0,25 затем воду удаляют испарением при 17-25^oC и получают пленку, которую дополнительно обрабатывают 1-10% водным раствором глутарового альдегида в течение 30-60 с при pH 7-8 и температуре 17-25^oC.

Недостатком этого способа является невозможность включения в состав коллагена дигестазы, которая обладает достаточно высокой коллагенолитической активностью. При совмещении коллагена и дигестазы начинается гидролиз коллагена с потерей вязкости и других свойств, характерных для трехспиральной структуры. Гидролиз коллагена резко усиливается в процессе длительной сушки при комнатной температуре, так как повышение ее для ускорения сушки вызывает денатурацию и быстрый гидролиз коллагена.

Технической задачей является способ получения коллагенового раневого покрытия "дигестол", обладающего коллагенолитической активностью путем смешивания 1,00-2,50% раствора коллагена с pH 3,5-8,5 и 0,3-3,0% раствора дигестазы в объемном соотношении 20:1 с последующим замораживанием и сублимационной сушкой тонкого слоя смеси. Для пролонгирования действия дигестазы сухой продукт подвергают структурированию в парах формальдегида.

В специальных опытах установили, что после смешения дигестазы и раствора коллагена происходит изменение его физико-химических свойств: падение вязкости, оптической активности. Это свидетельствует о разрушении трехспиральной структуры коллагена. На процесс гидролиза коллагена существенное влияние оказывает pH смеси. Из таблицы 1 видно, что время истечения, а следовательно, и вязкость нейтрального коллагена быстро падает, указывая на распад макромолекул коллагена. В случае уксуснокислого раствора коллагена падение вязкости незначительное, следовательно, деградация коллагена практически отсутствует. Ингибирование коллагенолитической активности в комплексе коллаген-дигестаза не происходит, так как после повышения pH смеси до нейтральных значений pH наблюдается восстановление коллагенолитической активности.

После приготовления смеси коллаген-дигестаза ее следует в течение часа разлить по кюветам, заморозить и подвергнуть сублимационной сушке.

Пример выполнения способа.

Пример 1.

1. 220 г уксуснокислого коллагена с концентрацией белка 1% и pH 3,5 смешивают с 22 мл 1% раствора дигестазы /соотношение ф/с = 1:10/ и разливают в кювету площадью 300 см².

2. Кювету с композицией коллаген-дигестаза помещают в морозильную камеру с температурой -35^oC и выдерживают 10 ч.

3. Сублимационная сушка при вакууме, 0,1 мм рт.ст., температура досушки 40^oC, продолжительность 16 ч.

4. Упаковка пластин препарата размером 50х50 мм в полимерные пакеты, стерилизация.

Пример 2.

1. 220 г раствора коллагена в карбонате аммония с pH 8,5 и концентрацией белка 1,2% смешивают с 22 мл 0,12% раствора дигестазы /соотношение ф/с = 1: 100/ и разливают в кювету с толщиной слой 8 мм.

2. Кювету с композицией помещают на полки аппарата сублимационной сушки и охлаждают до температуры -30^oC, включают вакуум и после достижения его 0,1 мм рт. ст. сублимируют влагу, постепенно повышая температуру до 40^oC. Общая продолжительность замораживания сушки 20 ч.

3. Сухой продукт помещают в камеру с парами формальдегида: комнатная температура, продолжительность 4 ч.

4. Проветривание при комнатной температуре в течение 18 час до отсутствия запаха формальдегида.

5. Упаковка в полимерные пакеты пластин размером 5х5 см, маркировка, стерилизация.

Пример 3.

1. К 200 г 1% уксуснокислого раствора коллагена добавляют 10 мл 0,4% раствора дигестазы и 20 мл 0,05% раствора сангвиритрина. Тщательно перемешивают и разливают в кюветы с толщиной слоя 8 мм.

2. Далее по п.п.2-5 примера 2.

Пример 4.

1. К 200 г 1% раствора коллагена с pH 3,5 добавляют 20 мл 0,5% раствора дигестазы и 20 мл 1% раствора гентамицина. Тщательно перемешивают, разливают в кюветы, слой 8 мм 2. Далее по п.п 2-5 примера 2.

Приготовленное по описанному способу раневое покрытие с дигестазой без структурирования и после структурирования парами формальдегида проявляет высокую коллагенолитическую активность /таблица 2/. Причем активность струтурированных губок ниже, чем неструтурированных, что может свидетельствовать о ковалентной иммобилизации дигестазы к коллагену. По мере резорбции коллагена происходит высвобождение фермента.

Полученное по предлагаемому изобретению раневое покрытие "дигестол" использовалось в эксперименте для лечения ожоговых ран у кроликов, подвергшихся действию средних доз радиации. Все препараты полностью резорбировались на ранах, очищая их от некротических тканей и ускоряя процесс заживления ожоговой раны в сравнении с другими покрытиями. Время резорбции покрытия зависело от степени его структурирования и природы альдегида.

Формула изобретения

1. Способ получения раневого покрытия путем смешивания диспергированного в водном растворе коллагена и лекарственного вещества с последующим сублимационным выслушиванием, отличающийся тем, что в качестве лекарственного вещества используют раствор дигестазы, причем смешивают 0,75 - 2,4%-ный раствор коллагена с рН 3,5 - 8,5 и 0,3 - 3,0% раствор дигестазы в объемном соотношении 20 : 1, затем замораживают тонкий слой смеси и высушивают.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что сухое покрытие дополнительно структурируют в парах формальдегида.

3. Способ по пп.1 и 2, отличающийся тем, что дополнительно содержит в качестве лекарственного вещества до 2,0% от массы покрытия антисептика.

4. Способ по пп.1 и 2, отличающийся тем, что дополнительно содержит до 25,0% от массы покрытия антибиотиков.

РИСУНКИ

Рисунок 1