Способ приготовления питательной среды для продуцентов пектолитических ферментов

 

О П И -C А Н И Е 345198

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Соеетокиа

Сециалиотичеоииа

Реооубдии

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 29.Х.1970 (л" 1487108/28-13) М. Кл, С 12d 13/10

С 12Ь 3, 00 с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 14.V11.1972. Бюллстсш, N 22

Дата опубликования описания 14.ИП.1972

Комите ло делам изобретений к открытий ори Совете Мииистрое

СССР

УДК 577.15.07(088.8) Авторы изобретения

К. А. Калунянц, Б. А. Величко, Г. А. Чернова, Э. Д. Фалалеева, П А. Станкевич, Я. Т. Степанов, М. А. Дорофеева, Б. О. Валтере, И. А. Брунс и С. М. Малей

Заявитель

СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ

ДЛЯ ПРОДУЦЕНТОВ ПЕКТОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ

Изобретение относится к области микробиологического синтеза ферментов и касается способа приготовления питательной среды для глубинного культивирования микроорганизмов — продуцентов пектолитических ферментов и может быть использовано для глубинного культивирования плесневых грибов, например Asp. niger, Asp. awamori, Asp. foetidus.

Известен способ приготовления питательной среды для глубинного культивирования продуцентов пектиназы путем смешивания пектинсодержащего сырья, например свекловичного жома, с водой, нагревания полученной смеси, выдерживания и охлаждения ее, отделения водного экстракта от твердой фазы и введения в экстракт минеральных солей— источника фосфорного и азотного питания.

Для обеспечения интенсификации процесса культивирования продуцентов и повышения активности продуцируемых ферментов по предлагаемому способу экстракт перед смешиванием с солями подвергают гидролизу пектолитическими ферментами, например пектиназой. При этом нагревание пектинсодержащего сырья осуществляют до 125 — 130 С, а продолжительность выдерживания равна

2 час. Количество вводимых пектолитических ферментов равно 0,2 — 5,0 ед/мл экстракта.

Охлаждение смеси пектинсодержащего сырья с водой осуществляют до 40 — 55 С, а значение рН устанавливают 3,25 — 4,75.

Предлагаемый способ прпготовления питательной среды для глубинного культиви5 ровапия продуцентов пектиназы, например плеснсвого гриба Asp. awamori 16, заключается В слсдугощем.

Берут 3,/о-ную суспснзию свекловичного жома и гидролизуют прп 125 — 130 С при по10 стоянном нсремсшивании в течение 1 — 2 час.

Б полученном экстракте определяют кислотность и в случае необходимости корсгируют ортофосфорной кислотой до рl-1 3,25 — 4,75 и охлаждают до 40 — 55 С п добавляют водный

15 раствор фермента пектиназы из расчета от

0,2 до 5,0 ед/лг.г экстракта. Ферментативный гидролиз проводят в течение 60 — 120 лшн при постоянном перемешивашш и поддержании температуры в интервале от 40 до 55 С.

20 К подготовлсгшолгу таким образом экстракту свекловичного жома добавляют вытяжку из солодовых ростков, автолизат мицслия и необходимые соли. Приготовленную питательную среду хорошо перемешивают и рсгулиру25 ют величину активной кислотности от 3,25 до

5,5 — в зависимости от того, какой состав ферментного комплекса необходимо получить.

Питательную среду с установленным pll стерилизуют в установке непрерывной стерилп345198

Предмет изобретения

Составитель P. Шахмейстер

Тсхред А. Камышиикова

Редактор В. Смирягииа

Корректор T. Гревцова

Заказ 2493/8 Изд. М 1040 Тираж 405 Подписное

ЦПИИПИ Еомизета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Я-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 зации и направляют в стерильный ферментатор.

Культивирование продуцентов пектиназы на полученной питательной среде ведут известным способом.

Пример. Свекловичный жом в количестве

3 кг заливают 100 л водопроводной воды и нагревают в течение 2 час при температуре

125 †1 С и постоянном перемешивании мешалкой. Затем суспензию охлаждают до 45 С и экстракт отделяют от твердой фазы. Добавлением ортофосфорной кислоты доводят рН до 4,0 и добавляют ферментный раствор пектиназы в количестве по 5 ед/мл экстракта.

Ферментативный гидролиз проводят в течение

2 час при температуре 45 С и рН субстрата

4,0. По истечении вышеуказанного времени к экстракту добавляют вытяжку из солодовых ростков 10%, автолизат мицелия (40) и минеральные соли.

Приготовленную питательную среду стернлизуют на установке непрерывного действия и подают в стерильный ферментатор. На этой среде культивируют продуцент пектиназы, Для этого производят посев водной суспензии спор плесневого гриба Asp, awamoI.i 16, выращенных известным способом в количестве

50 г на 1 м питательной среды, с содержанием спор 1 — 2)(10 на 1 г питательной среды. Добавляют пеногаситель марки А-50 в количестве 0,1% от объема питательной среды.

Культивирование проводят в условиях аэрации при подаче 1 мз стерильного воздуха на

1 м питательной среды в 1 мак давлешш

0,6 QTLL и скорости вращения мешалки

300 об/мин. Время культивирования 52 час.

Культуральную жидкость отделяют от биомассы на барабанном вакуум-фильтре, Пектолитическая активность полученной культуральной жидкости составляет 282 ед/мл.

1. Способ приготовления питательной среды для продуцентов пектолнтических ферментов путем получения водного экстракта смешиванием пектинсодержащего сырья, например свекловичного жома, с водой, нагревания полученной смеси, выдерживания и охлаждения ее, удаления твердой фазы из экстракта с последующим смешиванием его с минеральными солями, отличающийся тем, что, с целью интенсификации процесса культивирования продуцентов и повышения активности проду20 цирусмых ферментов, экстракт перед смешиванием с солями подвергают гидролизу пектолитичсскими ферментами, например пектиназой.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что

25 пектолитические ферменты для гидролиза вводят в количсстве, равном 0,2 — 5,0 ед/мл экстракта.

3. Способ по пп. 1 и 2, отличающийся тем, что нагревание пектинсодержащего сырья

30 осуществляют до 125 — 130 С, а выдерживание — в течение 2 час.

4. Способ по пп. 1 — 3, отличающийся тем, что охлаждение смсси пектинсодержащего сырья с водой осуществляют до 45 — 55 C.

35 5. Способ по пп. 1 — 4, отличающийся тем, что рН экстракта устанавливают 3,25 — 4,75.