Аденозин -3 ,5 -циклосульфат для избирательного регулирования уровня аденозин-3 ,5 -циклофософта в клетке и способ его получения

 

Союз Соввтеиих

Социалистиивсиих

Республик

ОП И

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВв1ДИВЛевСТВУ (6!) Дополнительное к авт. свил-ву (22) ЗаЯвлено 20.12,74 (21) 2087085/23 — 4 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 15.02.76, Бюллетень № 6 (45) Дата опубликования описания 13,12.77 (11) 502887 (51) М. Кл, С 07 О 239/70

Государственник иоиитет

Совете Министров СССР во делам изобретений и открытий (53) УДК 547.963.32 (088.8) (72) Авторы изобретения

Н.Н. Гуляев, Л.А. Баранова и Е.С. Северин (71) Заявитель

Иисппут молекулярной биологии АН СССР (54) АДЕНОЗИН вЂ” 3,5 — ЦИКЛОСУЛЬФАТ ДЛЯ ИЗБИРАТЕЛЬНОГО

РЕГУЛИРОВАНИЯ УРОВНЯ АДЕНОЗИН вЂ” 3,5 — ЦИКЛОФОСФАТА

В КЛЕТКЕ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ формулы L,Õ;>

10 си

o>)

0 ON

Изобретение относится к новому классу химиI t ческих соединений — рибонуклеоэид ° 3,5

° циклосульфатам, конкретно к первому представи телю этого класса — аденозин - 3,5 - циклосульфату

I I юг 15 и к способу, его получения. Аденозин - 3,5

-циклосульфат обладает ценными биологическими свойствами и может быть использован в фармакологии и в научных исследованиях по химии нуклеозидов и нуклеотидов.

Известен в химии нуклеотидов его фосфатный аналог - аденоэин - 3,5 - циклофосфат. В последние годы проводятся широкие исследования по выяснению роли аденозин - 3,5 - циклофосфата в

t механизмах, регулирующих самые различные стороны биологии клетки. В настоящее время получены данные о влиянии указанного нуклеотида не биосинтез деэоксирнбонуклеиновых кислот, утлеводов, липидов, стероидов, а также на транспорт веществ через мембраны. Кроме того, в некоторых случаях установлена связь между уровнем аденозин

- 3,5»- циклофосфата в клетке и злокачественным перерождением клеток. °

Содержание аденозин - 3, 5/- пиклофосфата в клетке определяется активностью двух ферментов его метаболизма: аденилатциклазой — ферментом биосинтеза и специфической фосфодизстеразой— ферментом его гидролиза.

Цель изобретения — синтезировать аденоэин3,5 - циклосульфат, который можно использовать в качестве специфического ингибитора фосфодизстеразы аденозин - 3,5 - циклофосфата — важнейшего фермента метаболизма данного циклического нуклеотида.

Аденозин - 3, 5 - циклосульфат указанной

6 формулы получают путем взаимодеиствия N

-бенэоил - 2," 3"- 0 - изопропилнденаденозина с хлористым сульфурилом, затем полученное таким образом 5 - 0 - счльфохлоридное производное подвергают гидролизу и цнклиэуют образовавшийся продукт в присутствии N,N - дицнклогексилкарбодиимида с последующим дебензоили" Р:, „: —;";;, U — "

H,С "Си, где A - остаток адентша, 1 11С0Са11а

ЬА- а

Н

Пример.

А. К раствору 8,2 г (0,02 моля) N - бензоил-33»- 0 - изопропилндекаденозина в 60 мл диоксана„ содержащему 4,7 r (0,06 моля} пири ива, прибавляют при перемешивашя и охлахотешги 8,1 г (0,06 моля) хлористого сульфурила с такой скоростью, чтобы тампература реакционной смеси была

10-12 С. Через 30 мин, после смещения реагентов выделившееся масло отделяют,от раствора, затирают с диоксаном, затем с эфиром и сушат в вакуум1 над серной кислотой. Остаток pacraoparer в 120 мл

90% ного водного раствора трифторуксусной кислотьь Полученный раствор выдерживают 30 мин при 23 С, затем уаарнвают досуха. Остаток после трехкратной оттонки с водой растворяют в минимальном количестВе смеси этилОВОГО cGHpTa и воды (1:2) к наносят на колонку со смолой Go%ex-50х8 (100»200 ìåø; 70х3,5 ем; Н - форма, уравновешенная смесью зтанола и Воды, 1:2). Злюцию проводят той же смесью растворителей, фракции (по 5 мл), обладающие поглощением при 280 нм, собирают, упаривают до небольшого Обьема н оставляют для кристаллизации. Получают 3,5r йб ° бензоиладенозин - 5 - сульфа Га (40% or теоретичес кого) с злектрофоретической подвижностью при рН 7,5, равной приблизительно 0,5 подвюкностн аденозин - 5. - монофосфата. Вт 0,61 (и - бутанол» уксусная кислота-вода, 5:2:3).

50 мг полученного вещества растворяют в 2 мл, смеси метнлового спирта и концентрированного водного аммиака (1:1). Раствор выдеряивают 3 ч при 50 С, затем упаривают gocyxa Остаток затирают со спиртом, затем с эфиром и получают с количественным выходом аденозю-5- ссяьбат. и 0,32 (н- бутанол-уксусная кислота-вода, S:2:Ç

Найдено,%: 8 9,31, 9,42.

С оН»з 40уS.

Вычислен,%: S 9,23, рованнем обычными методами. Дебенэоилнрование можно проводить, напрнмер, действием водно-метапольного раствора аммиака.

Синтез протекает по следующей схеме

А

0 3 — 0 0П 0=(О 0И

0

5. 90 мг (0,2 моля) Nа - бензонладенозин - 5сульфата высушивают трехкратной отгонкой с сухим пириднпом, используя порции по 2-3 мл. Сухой остаток растворяют в 8 мл сухого пнридина и полученный раствор прибавляют по каплям к слабокипящему раствору 82 мг (0,4 ммоля) N,N»-дищп".логексилкарбодиимида в 10 мл сухого пири. дица. Затем реакционную смесь перемешивают 1 ч при температуре, близкой к кипению, н после

28 охлаждения упзрнвают досуха. Остаток растворяют в мшп1мальном количестве смеси метилового спирта и хлороформа (1:1) и наносят узкой полосой на две пласпики (12х16см) с снликагелем (слой

2,9 ьм). Хроматографию проводят в системе и ° э5 -бутанол-вода (85:15) в течение 2-3 ч. Полосу силикагеля, содержащую продукт, локализуют (Q

"0,65), отделяют н высушивают. После элюции мета. иолом и отгонки растворителя получают 40 айаг N - бензоиладенозин - 3,5 - циклосульфата (47% от теоретического) Rf. 0,76 (я ° бутанол — уксусная кислота — вода, 5:2:3) .

При дебензоилировании М - бензоиладенозин-3,5 - циклосульфата в условиях, описанных для получения аденозин - 5 - сульфата (А), получают с

M количествеьптым выходом аденозин - 3,5 - цикло- сульфат, R =0,52 (к - бутанол — уксусная кислота — вода, 5:2:3), Ъмакс -"259 нм, е макс = 13600, рН 6,0.

Найдено, %", С 36,18, 36,30; Н 3,44, 3,51;

N21,49, 21,63;

40 8 10.17 10,34.

С1 О Н Ч а Оа .

Вычислено,%: С 36,47; Н 3,36; N 21,27; $973.

При проведении ферментати нных испытаний аденозин - 3,5 - циклосульфата была выявлена

45 существенная ингибирующая активность даниота соединения в отношении фосфодизстеразы аденознн

- 3 5 - циклофосфата.

На основании проведенных испытаний было признано, что аденозвн - 3,5 - циклооульфат может

N быль использован для избирательного регулиро. ванин уровня аденозин - 3,5 - циклофосфата в клетке.

Результаты испытаний приведены в таблице.

502887

Соединение

Фосфодиэстераза

Аденилатциклаза

Аденозин-3,5 - циклофосфат

Субстрат

К -1,310зМ

Продукт

Аденозин-3,5 - циклосульфат

Ингибитор

К -3,5 1О" М

Не активен

iЩ

Ф

Е 05 е4

Составитель С. Чернова техред Í. Alglyeailyx

1едактор Е. Хорнна

Корректор С. Ямалова

Заказ 1128/540 Тира:к 576 Подписи ое

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР до делам изобретени» и откръпя»

113035, Москва, Ж-35, Раушскаа иаб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Улсгород, ул. Проекп аа, 4

Формула изобретения

1. Аденозин - 3,5 - цяклосульфат формулы,для избирательного регулирования уровня аденозин"

- 3,5 - цнклофосфата в клетке.

2. Способ получения аденозин - 3,5 - циклофосфата по п 1, отличающийся тем, что и - бена зоил - 2,3 - 0 - изопропилиденвденозин подвергают взаимодействию с хлористым сульфурилом, затем по. лученное 5 - 0 - сульфохлорндное производное подвергают пщролизу и циклизуют образовавшийся продукт в присутствии N,N - днциклогексилкарбодиимща с последующим дебензоилированием и выделением целевого продукта.