Способ совместного получения инсулина и панкреатина

 

ОП ИС

АНИ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

" 651656 (61) Дополнительный к патенту (51) М. Кл. (QQ) заявлено 171275 P1) 2301056/28-13 (23) ПриоритЕт — (32) 20. 12. 74 (31) Р 2460334. 7 (33) ФРГ

A 61 К 37/24

Государстве ни ы и ком итет

СССР по делам изобретений и открытий

/ (53) УДК 615.361..37(088.8) Опубликовано 050379. Бюллетень № 9

Дата опубликования описания 050379 (72) Авторы изобретения

Иностранцы

Леонард Хефнер, Вильхельм Шрамм, Ханс Каргль и Фридрих Кизер (ФРГ) Иностранная фирма

" Хехст AI (ФРГ) (71) Заявитель (54) СПОСОБ СОВМЕСТНОГО ПОЛУЧЕНИЯ

ИНСУЛИНА И IIAHKPEATHHA

20

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается получения биологически активных веществ.

Известен способ совместного получения Инсулина и панкреатина вз под- желудочной железы свиньи путем экстракции органическим растворителем с последующим центрифугированием и выделением из экстракта инсулина и из осадка-панкреатина (1) .

Однако известный способ не обеспечивает высокого выхода и высокой активности препаратов.

Целью изобретения является повышение выхода и активности препаратов.

Эта цель достигается тем, что экстракцию исходного сырья осуществляют при рН 5-7 40-80о-ным ацетоном в присутствии нейтральных солей, в полученном после центрифугирования осадке устанавливают рН более 5,6 и отделяют примеси экстракцией 60-70Ъным ацетоном, кроме того, экстракцию инсулина из исходного сырья осуществляют ацетоном при его содержании 5060%, Способ осуществляют следующим образом.

Свежую или консервированную путем быстрого замораживания поджелудочную железу свиньи размельчают и суспендируют в смеси, например, из 24 о5.% воды и 76 об.Ъ ацетона, к которой в случае необходимости добавляют нейтральные соли, а также соли многоос-

1 новных кислот. Для экстракции и последующего отделения нерастворимых составных частей желез поддерживают концентрацию ацетона в жидкой фазе между 40 и 80 об. -o oчтобы было возможным растворение инсулина из ткани желез и для предотвращения активации проферментов благодаря автоматическим процессам в исходной смеси.

Содержание твердого вещества в суспензии составляет 10-20%. К этой смеси добавляют соль кальция, лучше всего в форме водного раствора. Суспензию доводят до.значения.рН 5,7, предпочтительно 5,4-5,6, перемешивают. Время экстракции составляет 0 5-1,5 часа.

Затем твердые вещества отделяют путем центрифугирования, Твердое вещество можно экстрагировать многократно, однако для хорошего

651656

Формула изобретения

Составитель Г.Смирнова

Техред Л. Алферова Корректор А.Кравченко

Редактор О.Иванова

Заказ 833/55 Тираж 671 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.,д. 4/5

Филиал ППП Патент, r.Óæãoðoä, ул.Проектная, 4 качества панкреатина число экстракции должно быть незначительным.

Осветленные экстракты объединяют и устанавливают рН 7-8, предпочтительно 7,3-7,7, благодаря добавке щелочных растворов. Для, этого применяют слабо аммиачную воду, раствор едкого натра или водный раствор гидролизующейся со щелочной реакцией соли, например динатрийгидрофосфат. Коагулирующую инертную протеиновую фракцию отделяют путем центрифугирования. Прозрачный экстракт снова подкисляют, освобождают в вакууме от ацетона, обезжиривают, концентрат осаждают поваренной солью и полученный осадок известным способом перерабатывают в инсулин, Выделенное после отделения содержащего инсулин экстракта твердое вещество составляет исходный материал для панкреатина. Для сохранения ферментативной активности в нем устанавливают рН 6-7 путем добавки раствора буферной соли или смеси образующих буфер солей и затем известным способом перерабатывают в панкреатин.

Пример 1. 50 кг быстрозамо- 25 роженной поджелудочной железы свиньи размельчают с помощью волчка для мяса и суспендируют в заранее приготовленной смеси из 120 л ацетона и 50 л воды при 15 С, 30

Путем добавки водного раствора хлористого кальция (100 г хлористого кальция в 150 мл воды) устанавливают значение рН 5,6. Перемешивают 30 мин при 15 С, смешивают с 45 л ацетона и о затем отделяют твердое вещество центрифугированием.

Прозрачная фаза содержит инсулин, твердое вещество перерабатывают в панкреатин. 40

Твердое вещество растворяют с 40 л водного раствора Иа НРО,который устанавливает значение рН 6,0-6,5, и пу тем вакуумной перегонки при 25оС доводят до содержания ацетона 15%. Остаток после дистилляции в держивают 45 до 3-х часов при 25 С, затем растворяют с 250 л ацетона и подогревают до 30 С, Твердое вещество отделяют от прозрачной фазы путем центрифугирования. 50

Твердое вещество еще раз экстрагируют при 25 С в 150 л ацетона, который соа держит 10 л воды, отделяют путем центрифугирования и для сохранения ферментативной активности высушивают в вакууме при 25-30 С.

Выход: 9 кг панкреатина, Полученный после центрифугирования инсулиновый экстракт выпаривают в вакууме до удаления ацетона. Выделяющийся при этом жир отделяют, Из водного остатка после перегонки растворенный инсулин выделяют известным способом.

Выход: 3 r инсулина с 25 1Е/мг-750001E инсулина (l E — международная единица), Пример 2. Примененная для экстракции инсулина смесь. состоит из

120 л ацетона и 50 л воды, в которых растворены 1 кг хлористого аммония и

0,5 кг первичного фосфорнокислого натрия.

Другие исходные количества и условия выхода как в примере 1.

Предлагаемый способ обеспечивает высокий выход с высокой активностью препарата., 1„ Способ совместного получения инсулина и панкреатина из поджелудочной железы свиньи путем экстракции органическим растворителем с последующим центрифугированием и выделением из экстракта инсулина и из осадкапанкреатина, отличающийся тем, что, с целью повышения .выхода и активности препаратов, экстракцию исходного сырья осуществляют при рН 5-7 40-80%-ным ацетоном в присутствии нейтральных солей, в полученном после центрифугирования осадке устанавливают рН более 5,6 и отделяют примеси экстракцией 60-70%-ным ацетоном, 2. Способ по п.l, о т л и ч а ю— шийся тем, что экстракцию инсулина из исходного сырья осуществляют ацетоном при его содержании 50-60%.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Заявка ФРГ Р2146275, кл, 30 И 2/04, 1973р по которой принято положительное решение о выдаче авторского свидетельства.