Способ получения гидрохлорида антрациклингж5^ида

 

О П И С А.Н И Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

Союз Советских

Социалистических

Респубпик

<щ826956 (61) Дополнительный к патенту (22) Заявлено 211277 (21) 2556950/23-0 (23) Приоритет — . (32) 221276 (31) 5 34 5 4/76 (33) Ит алия

Опубликовано 300481 Бюллетень М16

Р1)М. Кл.

С 07 Н 15/24//

А 61 К 31/70

1осударственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (53) УДК 547.673..1;615.07 (088.8) Дата опубликования описания 300481

Иностранцы

Джузеппе Кассинелли, Федерико Аркамоне н Аурелио ди Марко „: (Йталия) (72) Авторы изобретения

Иностранная фирма

"Сочиета Фармасьютичи Италиа (Италия) (71) Заявитель

БИиГщт;..;-;д (54) спОсОБ пОлучения ГидРОхлОРидА АнтРАциклинГтИ идА о ez и б- © 3 ок 3gl., (I)

ОСЦз о ОН

03 где R представляет собой о

OCH3 или 3R

Изобретение относится к способу получения новых соединений, обладающих противоопухолевой активностью, антрациклингликозидов, получаемые в виде гидрохлоридов.

Цель изобретения — получение новых полезных соединений, расширяющих арсенал средств воздействия на живой организм. 10

Поставленная цель достигается путем синтеза, основанного на известной реакции Кенигса-Кнорра )11 .

Предлагаемый способ получения гидромлорида нового антрациклингликозида формулы

1 заключающийся в конденсации дауноми" цинона, растворенного в сухом метилендихлориде с хлоридом 3-трифторацетамидо-2, 3, 6-тридеокси-4-0.-метил-L-ликсогексоопиранозила или с хлоридом З-трифторацетамидо-2,3,6-тридеокси-4-О-метил-g-L-арабиногексопиранозила при комнатной температу ре в течение 1-2 ч в присутствии катализатора трифторметансульфоната серебра в эфирном растворе и дегидратирующего агента молекулярного сита с последующим мягким щелочным гидролизом в ацетоне полученного М-защищенного гликоэида действием 0,1 и. водной гидроокисью натрия и обработкой полученного свободного гликозид ного основания метанольным раствором хлористого водорода.

Изобретение иллюстрируется примерами, в которых используемые блокированные амидодезоксигалоидсахара получают следующим обраэом.

Получение в качестве промежуточного продукта 3-тряфторацетамидо-2,3,6-тридезокси-4-0-метил-L-ликсо» гексопиранозилхлорица.

Раствор метил-3-трифторацетамидо-2,3,6-тридезокси-а-L- ëèêñîãåêñîïèранозида (2,57 r, 10 ммоль) в сухом метилендихлориде (45 мл) подвергают обработке при 0 С эфиратом трехфто826956

50 ристого .бора (0,1 мп}. В период времени, пока температура поддерживает ся на уровне 0 С, добавляют диаэометан в метилендихлорид до появления устойчивой слабожелтой окраски.,Спустя 90 мин при 0 C путем фильтрации удаляют твердое белое вещество (поли5 метилен), а фильтрат последовательно промывают 10%-ным водным раствором бикарбоната натрия, а также водой и просушивают над безводным сульфатом магния. Остаток, полученный при испарении, выделяют кристаллизацией из диэтилгексанового эфира, в результа.те чего получают чистый метил-3-трифторацетамидо-2,3,б-тридезокси-4-0-метил-c(-L-ликсогексопиранозид 15 (2, 3 г, 85%); т. пл. 137-138ОС,Pgg О

=-150 (C=1, в хлороформе };масс-сйект" рометрические данные n/å 271 (М+}.

Спектр парамагнитного резонанаса (C0 СВ1} имеет поглощение на 1,23 (a, СН, -С-5); 3,23 и 3,40 (два S- . . -OCH ) и 4,70 е (широкое 5, С-1 Í).

Раствор указанного 4-О-метильного соединены (2,17 г, 8 ммоль) в уксусной кислоте (40 мл) добавляют к 25 воде (160 мл) и разогревают до 100 С в течение 1 ч. Кристаллизация остатка, полученного путем испарения из ацетонгексана дает 3-трифтор- ацетамидо-2,3,6-трйдезокси-4-0-метил- З0

- -L-ликсогексопиранозу (2 г, 97%); т. пл. 193-194О С, 5aJ О =-130 О (C=Î, 97, в хлороформе) данные масс-спектрометрии n/å 257 (М ). спектр парамагнитного резонанса . 35 (СДС R ) имеет поглощения на 1,23 (4, CÍ3-С-5), 3,50 (S, СНБО) и 5,40

S (широкое S, С-1-Н).

Раствор указанного пиранозного соединенны (1,68 г, 6,53 ммоль) в: безводном пиридине (48 мл) энергич- 40 но перемешивают при О С п-нитроо бензолхлоридом (2,52 r). Спустя 14 ч после пребывания при комнатной температуре смесь, полученную в результате реакции, переливают в охлаждаемую 45 льдом воду, а выпавший осадок отфильтровывают и промывают водой до ней тральной реакции. Получающийся п-нитробензоат (смесь 0(H p -мономера) растворяют в хлороформе и просушивают над сульфатом магния. Остаток, получаемый в результате выпаривания, дает 2,4 r 3-трифторацетамидо-2, З,б-тридеэокси-4-0-метил-1-0-п-ннтробенэоил-L-ликсогексопираноэы (,92% ) т. пл. 168-170оC i (oc$ -39 55 (C--0,45, в хлороформе). Данные масс-спектрометрического анализами Ф/Е =

=240 (М-P-нитробензоильный гидроксид).

Раствор этого и-нитробензоильного соединения (1 05 г, 2,5 ммоль) в dO безводном метйлендихлориде подвергают насыщению при ООС безводным хлористым водородом. Выпавшую в осадок и-нитробензойную кислоту в безводном состоянии подвергают отфильтровыва- 65

1 нию, а фильтрат выпаривают до сухого остатка. Получающийся 3-трифторацетамидо-2,3,6-тридезокси-4-0-метил-L-ликсогексопиранозилхлорид (0,69 г) используют для реакции сочетания беэ дальнейшей очистки.

Получение 3-. трифторацетамидо-2, З,-б-тридезокси-4-0-метил-g,-L-арабиногексопиранозилхлорида в качестве промежуточного продукта.

Обработка метил-3-трйфторацетамицо-2,3,6-тридезокси-<-L-арабиногексопиранозида (2,57 г, 10 .ммоль) в метилендихлориде с помощью диазометана и эфирата трехфтористого,бора, как указано выше, дает соответствующее

4-0-метилпооизводное (1,7 г, 63%), т. пл. 185 С, @1 =101 (С=1, в хлороФорме). Данные масс-спектрометрии

n/е 271 (М ) .

Спектр парамагнитного резонанса (СДС1) имеет поглощение приг 1,31 (d, СН3 -С"5), 3,30 и 3,43 (два S, ОСЙ )» и 4,70, 5 (широкое S, С-1-Й).

3 идролизом в кислой среде 4-О-метильного соединения (1,6.3-,г, 6 ммоль), получают З-трифторацетамидо-2,3,6-тридезокси-4-0-метил-L-арабийогексоиираноэу (1 51, 98%); т.пл. 201 С, -12,7 (С=0,48, в хлороформе). Данные масс-спектрометрического анализа n/е 257 (М+).

Обработка пиранозного соединения (1,41 r, 5,5 версоль) с помощью и-нитробензоильного хлорида в пиридине дает соответствующее 1-0-и-нитробензоильное производное (1,78 r, 80%); т.пл. 159-160» Ci50Q D =33,5 (С=0,47, в хлороформе). Данные масс-спектрального анализа, m/e--240 (м-п-нитробенэойный гидроксид).

Раствор укаэанного п-нитробензоильного соединения (1,6 г, 4 ммоль) в безводном метилендихлориде подвергают насыщению при ООС с помощью безводного хлористого водорода. После отфильтровывания выпавшей в.осадок п-нитробензойной кислоты, раствор подвергают выпариванию до сухого остатка с получением 3-трифторацетамндо-2,3,6-тридезокси-4-0-метил -1.-арабиногексопираноэилхлорида (1,1 г).

Спектр его парамагнитного резонанса (СДС1з) имеет поглощение при 1,34 (d, СН -С-5), 3,44 (5, СНз -О-С-Н ) и при 6,17 8 (широкбе 5, С-1-Н) .

Пример 1. 4 -О-Метилдауномицин (1N1-69) .

Раствор дауномицинона (1 r, 2,5 ммоль) в безводном метилендйхлориде (100 мя) вводят в 3-трифторацетамидо-2,3,6-тридеэокси-4-0-метил-L-ликсогексопираноэилхлорид (0,(9 r) и 7 r молекулярного сита (4 А} и обрабатывают с помощью

AgS0g CF (0,78 r) в безводном диэтиловом эфире при энергичном перемешивании.

826956 и З-трифторацетамидо-2,3,6-тридезокси-4-О-метил-6(- -арабнногексопиранозилхлорид и осуществляют этот синтез в соответствии с процедурой примера 1.

4-Эпи-4-О-метилдауномицин получа-. ют в виде гидрохлорида в форме оран-ъО жезо-красных кристаллов; т.пл. 192 С (с разложением); ыД Д =+270О (С=

=0,047, в метаноле.).

Соединения 4-0-метилдауномицин, i

4-0-метиладриамицин, и 4-эпи-.4-0-ме1 тилдауномицин и. 4-э пи- 4-О-метиладриамицин, проявляя антимототическую активность, являются полезными терапевтическими средствами прн лечении экспериментальных туморов у животных.

Соединения подвергают испытанию на ьышах ВВЕJ (С57 BL/6 ° ДВА)J, которым делают инъекции in р. (в пахо-. вую область) дозы 10 клеток íà мышь

Ь асцетической лейкемии P 388. Лечение начато в виде инъекций в паховую область спустя 1 день .после появления прививки новообразования, лекарственные препараты растворены в дистил-лированной воде в виде гидрохлоридов.

Дауномицин и производные дауномицина испытаны в отношении их действия .йротив лейкемии P 388, которая очень чувствительн: к антитуморному возлействию антрациклинов.

Данные, приведенные в табл. 1, показывают, что 4 -О-метилдауномицин, нри дозе 4,4 мг/кг имеет большую активность, чем дауномицин; 4-эпи-4 -0-метилдауномицин при целом ряде доэировок (от 4,4 до 20 мг/кг) проявляет активность и имеет меньшую токсичность, чем дауномицин., При -оптимальных нетоксйчных дозах

1 даумомицин (2,9 мг/кг) и 41-эпн-4-0метмддауномицин (20 мг/icr) имеют одинаковую антитуморную активность. Представленные результаты показывают, что замена гидроксильной груп пы в положении 4 аминосахара на метоксиальную группу обеспечивает увеличение аититуморной активности, придание эпиконфигурации замещающему радикалу в положение 4, приводиi к общему уменьшению токсичности, как это можно заключить на основе,наблюдений за мыами с привитыми новообразованиями. В табл. 1 приведена активность против лейкемии P 388.

В табл. 2 приведена активность против лейкемии1. 1210.

После 2 ч выдерживания при комнатной температуре реакционную смесь нейтрализуют с помощью водного раствора бикарбоната натрия и органическую фазу выделяют испарением под вакуумом..

Осуществляют хроматографическую очистку получаемого осадка на колонке с окисью кремния, в качестве элюента используют смесь хлороформа с ацетоном в отношении 99:1, полу- о чают 0,9 г 4-О-метил-N-трифторацетилдауномицина; т.пл. 151-162 С.(Ы) и

=+250 (C=O 06, в хлороФорме).

Спектр парамагнитного резонанса (СДС1 ) имеет поглощение при 1,33 (4, СН СО-5) 2,40 (5, СНЗ-СО), !

3,53 (S, С-4 -О-СН ), 4,03 (S, C-4Р

-0-СН ), 5,20 (широкое S, С-7-Н);

5,50 (широкое 5, С-. 1 -H); 6,43 (NH);

6,43 (МН), 7,16-8 (N, ароматические . протоны); 16,26 H 17;74 S (два Sg Фе- о нольный радикал ОН). .Раствор укаэанного блокированного соединения (0,5 г) в ацетоне (30 мл) подвергают обработке 0,1 н. водным . раствором гидроокиси натрия (30 мп), 25 при активном перемешивании в атмосФере азота. Спустя 1 ч рН реакцион-. ной смеси доводят до 3,5 за счет добавления 1 н. водного раствора хлористого водорода, затем чтобы устра- р нить некоторые загрязняющие примеси, производят экстракцию хлороформом.

Экстракцию проводят иэ водной фа-. зы после установления рН 8 5 хлорофор у мом (порциями 50 и 30 мл). Органическую экстрагированную часть просушивают над безводным сульфатом натрия, концентрируют до небольшого объема и подвергают окислению при рН 4,5 с помощью- 0,5 н. метанольного раствора 4О хлористого водорода. Добавление избытка диэтилэфира дает в осадке 4-О-метилдауномицин в виде гидрохлорида (0,4 г, 90%); т.пл. 173 С (с разложением), faJ =+210 е (С=О, 04, в 45 метиловом спирте), тонкослойная хроматография на пластине марки Кизельгур F с использованием смеси раст254 ворителей хлороформ-метанол -вода дает и 0,40 (дауномицин и у 0,25). $Q

Пример 2. 4 -Эпи-4-О-метилдауномицин (1 М 1 — 74 ) .

Для синтеза препарата, имеющего данное наименование, в качестве ис.— ходного соединения берут дауномицин

826956

Таблица 1 т(СЛ), В

Препарат

Доза, мг/кг

Число погибк(их при отравлении животных (к общему числу) Дауномицин

2/10

7/10

4-0-Иетилдауно-. мицин, НС1

2,9 156

4,4 191

6,6 139

3/7

7/10.

t. (4 -Э пи -4-0-метилдауномицин НС1

4,4 150

10,0 143

20,0 174

40,0 34

9/9

П р н м е ч а н и е. Среднее время выживания мы4 шей, подвергнутых лечению, по сравнению со средним временем выживания контрольных мааей, умноженное на 100..

Таблица 2

Доза, мг/кг.

Препарат

169

175

4 4

6,6

Адриамицин

175

3 20

187

187 10,0

4-0-Метиладриамицин НС1

4,4

1/20

17/18

6,6

10i0 где R представляет собой радикал формулы

Формула изобретения

Способ получения гндрохлорида антрациклингликозида структурной форeely,, еяе а, о т л и ч а ю щ и и с я тем, что дауномицинон, растворенный в сухом метилендихлориде, подвергают взаимо65 действию с хлористом 3-трифторацетами(4-Эпи-4-0-метиладри амицин ° HC1 б,б

10,0

15 0

22,5

2,9 169

4,4 169

6,6 160

287

231

169

187

181.

312

62.

Число погибких животных при отравлении (к обцему числу) 826956

Составитель О. Скородумова

Редактор A Герасимова Техред С.Мигунова Корректор Н. Швыдкая

Заказ 2581/85 Тираж 397 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. ужгород, ул. Проектная, 4 до-2,3,6-.тридеокси-4-0-метил- -ликсогексопираноэкла или с хлоридом

З-трифторацетамидо-2,3,6-тридеокси-4-0-метил-К,-L-арабиногексопираноэила при комнатной температуре в, те-. чение 1-2 ч в присутствии катализатора трифторметансульфоната серебра в эфирном растворе и дегидратирующего агента молекулярного сита с последующим мягким щелочным гидролизом в ацетоне полученного й-защищенного

1О гликозида действием 0,2 н. водной гидроокисью натрия и обработкой полученного свободного гликоэидного основания метанольным раствором хлористого водорода.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Фиэер Л., Физер М. Реагенты для органического синтеза. М., "Иир", 1970, с. 187 (прототип).