Супрессор синтеза иммуноглобулинов

 

(72) Авторы изобретения

Е. В. Бененсон, В. Г. Панов и В. В. Василе (7l) Заявитель

Семипалатинский государственный медицинский (54) СУПРЕССОР СИНТЕЗА ИММУНОГЛОБУЛИНОВ

Изобретение относится. к медицине, а именно иммунологии и может быть использовано для подавления трансплантационных реакций и лечения аутоиммунных заболеваний.

Известно применение поливинилпирролидона в качестве противовоспалительного средства (13.

Цель изобретения - расширение ассортимента супрессоров синтеза иммуноглобулинов.

Поставленная цель достигается применением поливинилпирролидона в качест ве супрессора синтеза иммуноглобулинов.

Супрессия синтеза иммуноглобулинов иммунокомпетентными клетками (например

3$ лимфоцитами) поливинилпирролидоном включает следующие этапы. Получение лимфоцитов периферической крови боль- ных, культивирование лимфоцитов, опре20 деление иммуноглобулинов в культуральной жидкости методом диск-электрофозе- ра, регистрацию полученных данных на. спектрофотометре, обработку получен2 ных спектрофотограмм с целью коли чественного ойределения иммуноглобулиновых функций.

М етодом, осаждения венозной гепаринизированной крови получают лейкоциты периферической крови больных.,Выделение. лимфоцитов производят в градиенте плотности верографина. Затем в чистый пени"циллиновый флакон помешают 2.10 лимфо, цитов в 2,0 мл среды 199 с 0,5 мл поли винилпирролидона. Экспозицию продолжают.в течение 60 мии при 37©С. Затем культуральную жидкость сливают, лимфоциты заливают 2,0 мл среды 199 и ин кубируют в течение 5 - 7 сут в термоста-.. те при 37 С. Во втором флаконе инкубируют лимфоциты не обработанные поЛи винилпирролидоном.

Культуральную жидкость в количестве

0,2 мл подвергают диск-электрофорезу в полиакриламидном геле (система геля

М 1 рН разделяющего геля 8, 6, рН концентрирующего геля 7,3, рН электродного триг» лицинового буфера 8, 5, электрофореЬ в раз

Уровень иммуноглобулинов, мг%

Обследуемый конт нгент

А Б

Э(gM .1

11 1>3

0,016

93,5+

0,43 1 г,е

0,018

5,9

Вольные ревматоидным артритом

0,01

1,2 й

< 0,001 < 0,001

0,08

0,24

0,27

11 1,2+

3700 g 045 «+

140,0 0,07

Больные ревматизмом

0,2

3 89724 деляюшем геле при 5 милиамперах на гель

1 ч, окрашивание амидовым черным).

Количественное определение полученных фракций иммуноглобулинов производят на спектрофотометре, снабженном микрометрической приставкой и подставкой для геля. При перемещении столбика, геля с находящимися в нем фракциями . иммуноглобулинов относительно источника света и фотоэлемента .по показаниям 10 спектрофотомера на миллиметровой бумаге строят спектрофотограмму. По оси абсцисс откладывают длину соответствуюшей фракции, определяемую по шкале микрометрической приставки, По оси ординат откладыва- 1% ют соответствующее фракции количество единиц поглощения.

Окончательный результат определяют площадью под кривой на спектрофотограмме и выражают в единицах поглощения, уй

Площадь под кривой определяют по формуле. бсК.C o > где

Я - плошадь под кривой;

К - 1 064;

С вЂ” ордината максимума кривой; а — длина отрезка, соединяюшего две точки кривой, проходяшего,параллельно оси обцисс на уровне с/2.

По калибровочной кривой, построенной 36 по контрольным иммуноглобулинам с известной концентрацией, единицы поглощения переводят в мг%.

Пример 1. Выделяют культуру лимфоцитов из венозной крови больного

Диагноз — ревматоидный артрит. Инкубацию проводят в двух пенициллиновых флаконах по 2 10 клеток в 2,0 мл среЬ о ды 199 в течение 5 — 7 сут при 37 С.

В одном флаконе лимфоциты инкубируют после взаимодействия с 15% водным раствором поливинилпирролидона с молекулярным весом 10000 в течение 60 мин, в другом флаконе лимфоциты, не подвергавшиеся взаимодействию с поливинилпирролидоном. Культуральную жидкость 5—

7 суточной культуры лимфоцитов в количестве 0,2 мл подвергают диск-электрофорезу в полиакриламидном геле с последующей спектрофотометрией иммуноглобулиновых фракций. В культуральной жидкости лимфоцитов, не подвергавшихся взаимодействию с поливинилпирролидоном содержится 1,3 мг% иммуноглобулинов M и 2,6 мг% иммуноглобулинов J

В культуральной жидкости лимфоцитов, подвергнувшихся взаимодействию с поливинилпирролидоном содержится 0,43 мг% иммуноглобулинов M и 0,021 мг% иммуноглобулинов J

Были проведены исследования у 20 больных достоверным ревматоидным артритом, 11 больных ревматизмом, 8 больных системной красной волчанкой, 9 больных неревматическими заболеваниями (хронический гастрит, язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, гипертоническая болезнь, ишемическая болезнь сердца и др.) и 12 здоровых доноров. Во всех случаях наблюдается эффект супрессии синтеза иммуноглобулинов поливинилп ирролидоном.

Данные исследований по супрессии синтеза иммуноглобулинов поливинилпирролидоном при различных заболеваниях сведены в таблицу. (уровень иммуноглобулинов 3g М, с у мг%, в культуральной жидкости лимфоцитов, не обработанных поливинилпирролидоном А и обработанных поливинилпирролидоном 5) .

0,021. + <0,001 <0,05

0,006

0,04 (0,01 (0,05

0,03

897245

Проаолжение таблицы

Уровень иммуноглобулинов, мг%

Обслецуемый контиБ нгент!

19,4 0,55 < 00,024 р с0,01 <0,001

1,75 +

Больные 8 системной красной волч анкой

0,4 1,7 0,08 0,018,0,032 й. (О 01 с. 0,001

0,01

1,46 g 0,14 g

0,3

0,022

Больные 9 неревматическими забо0,03

0,15 лев ания ми

0,015 g <0,001 с0,001

0,011

0,08

0,018

1,15 3

0,18

0,27

0,038

Здоровые 1 2 доноры !!

Больные хроническими гастритами, язвенной болезнью 12-ти перстной,кишки, гипертонической болезнью, хроническим бронхитом, ишемической болезнью сердца и др.

°" дит к сокращению сроков лечения больных.

Фор мула изобретения

Составитель С. Малютина

Редактор К. Воловик Техред С. Мигунова Корректор О. Билак

Заказ 11781/7 Тираж 716 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская иаб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент, г . Ужгород, ул. Проектная, 4

Как видно из. таблицы, при всех заболеваниях и у здоровых поливинилпирролидон обладает достоверным супрессорным действием на клетки, синтезирующие им» щ мунноглобулины.

Применение поливинилпирролидона обеспечивает значительное уменьшение возникновения у больных нежелательных побочных действий при лечении аутоиммунных заболеваний и подавлении трансплантационных реакций. Это позволяет получать высокий лечебный эффект, привоПрименение поливинилпирролидона в качестве супрессора синтеза иммуноглобулинов.

Источники информации, принятыр во внимание при экспертизе

1. Рабинович И. М. Применение поли меров в медицине, Л., Медицина", 1972.