Способ получения высокополимерной рнк из дрожжей

 

Спосо,б получения высокополимерной РНК из дроясжей путем суспендирования их в растворе литвческого агента с последукщим нагреванием суспензии и вьщерживания ее в нагретом состоянии,- охлазкдения, центрифугирования и осаждения полученной суммарной РНК этанолом из надосадочной жидкости, растворения суммарного РНК в воде и осветления раствора, осаждения высокополимерной РНК из полученного раствора хлористым натрием, центр11фугирования и растворения в воде полученного осадка высокополимерной РНК, осветления раствора и вьщеления конечного продукта, отличающийся тем, что, с целью ускорения процесса получения целевого продукта и его удешевления, дрожжи суспендируют в водном О,31 ,2 М растворе 2-этилгекрановой кислоты , содержащем 0,1-0,5 М NaCl (рН - 7,0-7,5), суспензию вццерживают при t 92-98С в течение Г0-40 мин, охлаждают до 20-30 С, центрифугируют при 0-4 С, к надосадочной жидкости добавляют этанол до содержания 5055 об.%, центрифугируют при 0-4°С, полученньш осадок суммарной РНК растворяют в воде до содержания 150 кл 200 об.ед., после центрифугирования образо1вавшегося раствора при 0-4°С к надосадочной жцдкос;ти добавляют NaCl, выдерживают смесь при 0-4°С в течение 1-2 ч и отделяют путем со центрифугирования осадок высокопо00 лш ерной РНК, который растворяют до О) 150-200 об.ед. 260 мм, после центы рифугирования получ 1ного раствора к надосадочной жцдкости добавляют NaCl до содержания 0, М и этанол до 50-55 об.% и отделяют целевой продукт.

СОЮЗ. СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ .РЕСПУБЛИК (l9) () ) ) 701

4(s() G 01 N 33/48

OllHGAHHE ИЗОБРЕТЕНИЯ

H АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 2657774/28-13 (22) 23,08 ° 79 (46) 23.04.85. Бюл. Р 15 (72) В. Ф. Подгорный, В. П. Гурьев, В. П. Клименко, Н. М. Подгорный и С. Н. Загребельный (53) 577.113(088.8) (56) 1 ° Crestfield А. М,, Smith К.S.

Allen Р. Q. J. Biological Chemistry, 216, 185, 1955. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВЫСОКОПОЛИИЕРНОЙ РНК Н3 ДРОЖЖЕЙ, (57) Способ получения высокополимерной PHK из дрожжей путем суспендиро.вания нх в растворе литнческого агента с последуюп(им нагреванием суспензии и выдерживания ее в нагретом состоянии,.охлаждения, центрифугирования и осаждения полученной суммарной PHK этанолом из надосадочной жидкости, растворения суммарного PHK в воде и осветлеиия раствора, осаждения высокополимерной РНК из полученного раствора хлористым натрием, центрифугирования и растворения в воде полученного осадка высокополимерной РНК, осветления раствора и выделения конечного продукта, о т— л и ч а ю шийся тем, что, с целью ускорения процесса получения целевого продукта и его удешевления, дрожжи суспендируют в водном 0,31,2 М растворе 2-этилгексановой кислоты, содержащем 0,1-0,5 М NaCl (рН вЂ” 7,0-7,5), суспензию вцперживают при t 92-98 С в течение 10-40 мин о

Э охлаждают до 20-30 С, центрифугируют при 0-4 С., к надосадочной жидкости добавляют этанол до содержания 5055 об.7, центрифугируют при 0-4ОС, полученный осадок суммарной РНК раст- о воряют в воде до содержания 150—

200 об.ед. после центрифугирования образовавшегося раствора при 0-4 С к надосадочной жидкости добавляют

11аС1, выдерживают смесь при 0-4 С в течение 1-2 ч и отделяют путем центрифугироваиия осадок высокополимерной РНК, который растворяют до

150-200 об.ед. 260 мм, после цент=, рифугирования полученного раствора к надосадочной жидкости добавляют

NaCl до содержания 0,1-0,5 М и ..этанол до содержания 50-55 об.X и отделяют целевой продукт.

936701

ВНИИПИ Заказ 2787/2 Тираж 897 Подписное

Филиал ППП "Патент", г,Ужгород, ул.Проектная, 4

Изобретение относится к области органической химии, более точно к химии физиологически активных соединений.

Известен способ получения высокополимерной РНК из дрожжей путем суспендирования их в растворе литического агента с последующим нагреванием суспензии и выдерживания ее в нагретом состоянии,. охлаждения, центрифу- 10 гирования и осаждения полученной суммарной РНК этанолом из надосадочной жидкости, растворения суммарной PHK в воде и осветление раствора, осаждения высокополимерной PHK из полу- 15 ченного раствора хлористым натрием, центрифугирования и растворения в воде .полученного осадка высокополи-. мерной РНК, осветления раствора и выделения конечного продукта Я . 20

Однако известный способ является трудоемким и требует использования дорогого дефицитного реагента додецилсульфата.

Целью изобретения является уско" 75 рение процесса получения целевого продукта и era удешевление, Цель достигается. тем, что дрожжи суспендируют в водном 0,3-1,2 M растворе 2 -зтилгексановой кислоты, содер- () жащем 0,1-0,5 И NaCl (рН 7,0-7,5}, суспензию выдерживают цри 92-98оC о

10-40 мин, охлаждают до 20"30 С, центрифугируют при 0-4 С, к надоса0 дочной.жидкости добавляют этанол до содержания 50-55 o6., центрифугируют при 0-4оС, полученный осадок

:суммарной РНК растворяют в воде до содержания 150-200 об.ед.упосле цейтрифугирования образовавшегося о раствора при 0-4 С к надосадочной жидкости добавляют ЛаС1, выдержио вают смесь при 0-4 С в течение 1-2 ч и отделяют пуч ем -центрифугирования осадок высокополимерной РНК, который 4 растворяют до 150-200 об-,.ед. 260 мл, после центрифугирования полученного раствора к надосадочной жидкости добавляют NaCl до содержания 0,1-0,5 M и этанол до содержания 50-55 об-, и отделяют целевой продукт.

Пример осуществления способа.

100 r. дрожжей (Saccharamyces cexevisiae, раса 14, содержание PHK — 1 на сырой вес, содержание влаги 75 ), суспендируют в 400 мл водного 0,5 М раствора 2-этилгексановой кислоты (рН 7,3), содержащего 0,15 M NaC1, и подают со скоростью 250 мл/мин в спиральный трубчатый реактор (двойная спираль Архимеда1, внутренний диаметр трубки 4 мм, термастатируемый

0 при температуре 97 С. Время пребывания смеси в реакторе 40 мин. Из р=:— актора смесь подают в охлаждаемый водой холодильник, где смесь охлаждают о до температуры 20 С. Охлажденную смесь центрифугируют при 4000 o6/мин о в течение 15 мин при 0-4 С. Из надосадочной жидкости осаждают суммарную РНК, добавляя равный объем этанола (около 400 мл). Выпавший осадок суммарной РНК собирают центрифугированием (4000 об/мин, 15 мин, 0-4 С), отделяют от надосадочной жидкости и растворяют в воде до концентрации

200 об.ед, 260 мл (около 200 мл).

Раствор осветляют центрифугированием при 20000 об/мин в течение 20 мин при О-4 С. Затем к надосадочной жидкости добавляют NaC1 до концентрации

2 М, выдерживают при 0-4 С в течение с

1 ч, центрифугируют (4000 об/мин, 15 мин, О-4 С) и получают осадок высокополимерной PHK. Осадок высокополимерной PHK растворяют в воде до концентрации 200 об.ед. 260 мл (около 100 мл) и раствор центрифугируют при 20000 об/мин в течение о

20 мин при 0-4 С. Из надосадочной жидкости осаждают натриевую соль РНК, добавляя NaC1 до 1,5 M и равный объем этанола (около 100 мл). Осадок

PHK собирают центрифугированием при о

0-4 С, к надосадочнай жидкости добавляют NaC1 до 0,1-0,5 M и .этанол до содержания 50-55 oá., полученный осадок высокополимерной PHK отделяют и высушивают обычными способами.

Предложенный способ позволяет упростить получение высокомолекулярной PHK из дрожжей и удешевить его, поскольку используется 2-этилгексановая кислота, являющаяся отходом производства.