Способ определения концентрации ацетилхолина в структурах мозга

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

ОП ИСАНИЕ

ИЗЬБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

934377

Союз Советсинк

Социалистические республик (6l ) Дополнительное к авт. саид-ву (5l)N. Кл. (22) Заявлено 09. 07. 80 (21) 2952762/28-13

Ь с присоединением заявки М =

G О1 M 33/48

3ЬеударстееаныИ кшеятет

СССР (23) ПриоритетвЂ”,Опубликовано 07.06.82 Бтоллетень М 21

Дата опубликования описания07.06.82 ае делен яеебретенк» и еткрытяй (53) УДК616-07 (088.8) (72) Авторы изобретения

Б.А. Ройтруб, P.Ñ. Златин и И.Я. Иосим

Институт физиологии им. А.A.Áîãoìîëüöà, (71) Заявитель (54) спосОБ ОпРеДЕлениЯ конЦентРАЦии АЦетилхолинА в структуРАх иозгА

Изобретение относится к медицине, в частности к нейрохимии физиологически активных веществ, и может быть: использовано для определения микроколичеств свободного ацетилхолина в структурах мозга. Известен способ

5 определения концентрации ацетилхолина в структурах мозга путем воздействия испытуемой пробы на изолировайную мышцу пиявки и электрографической регистрации сокращений препарата(1)..

Однако известный способ не обеспечивает достаточной точности, посколь. ку полученные известным способом препараты обладают недостаточной стабильностью высокой чувствительности.

Цель изобретения - повышение точности способа.

Указанная цель достигается тем, что при осуществлении способа определения концентрации ацетилхолина

I в структурах мозга путем воздействия испытуемой пробы на изолированную

2 мышцу пиявки и электрографической ре" гистрации сокращений препарата, пиявку предварительно выдерживают в воде при 4-боС в течение 4-6 сут, а затем изолированную мышцу - в растворе Рингера в течение 46-50 ч.

Пример. В день опыта изолированную спинную мышцу пиявки перемещают из охлажденного раствора

Рингера в раствор Кребса+прозерин такой же температуры на 1 ч.

Непосредственно перед опытом изолированную мышцу пиявки помещают на пенопластовый препаровальный столик и поперечным разрезом с помощью спаренных лезвий, находящихся на расстоянии 8-12 мм, вырезают участок мышцы в области оральной присоски на 5 мм каудальнее головных ганглиев.

Вслед за этим обрезают продольнобоковые участки мышцы с таким расчетом, чтобы препарат имел ширину

3-4 мм. Препарат укрепляют двумя сер-. финками в плексигласовой ванночке, 93437

Формула изобретения

Составитель Р.Катосова

Техред A. Дч Корректор В.сутяга

Редактор В.Пилипенко

Заказ 3927/40 Тираж 887 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Moñêâà, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r.yæãoðoä, ул.Проектная, 4 заполненной аэрируемым раствором Креб. са с прозерином, и присоединяют к механической части электронного устройства. Исследование проводят при температуре раствора в ванночке 1015 С. Перед началом опыта готовят с стандартные растворы ацетилхолина (тестирующие) на растворе Кребса с прозерином.

Опыт проводят в следующей после- о овательности, определение минимальной концентрации ацетилхолина,,вызывающей сокращение участка спинной мышцы пиявки, определение степени повторяемости отношения "доза- 15 ,эффект" до четырех определений) оп.ределение концентрации ацетилхолина в исследуемых растворах, затем в интервале между определениями раствором Кребса с прозерином производят отмывание препарата от связанного с рецепторами ацетилхолина, а также мышцу освобождают от натяжения на срок не менее 15 мин. После - отдыха мышцу вновь натягивают и в натянутом состоянии стабилизируют в течение

10 мин.

Регистрацию сокращения участка изолированной спинной мышцы пиявки производят на движущейся диаграммной ленте электронного чернильного регистратора, соединенного с электронной системой преобразователя механического натяжения мышцы. Регистрацию проводят до получения прямой (нулевой) линии, характеризующеи исходное

35 натяжение мышцы.

Показателем концентрации ацетилхолина является изменение тангенса угла, образованного в результате от Щ клонения писчика от нулевой линии (исходный фон) после добавления опытного или тестирующего раствора. По7 4 строив калибровочную кривую зависимости угла отклонения от концентрации ацетилхолина, определяют содержание ацетилхолина в опытных растворах.

Предлагаемый способ дает возможность стабильно определять микроколичества свободного ацетилхолина

-2o (до 10 " г/мл) в малых навесках (1-2 мг} ткани мозга с использованием широко доступного тест-объекта (медицинской пиявки), а также аппаратуры, изготовленной на базе стандартных устройств, что дает возможность внедрить его в практику не только научно-исследовательских, но и лечебных учреждений для определения функционального состояния парасимпатической нервной системы.

Способ определения концентрации ацетилхолина в структурах мозга путем воздействия испытуемой пробы на изолированную мышцу пиявки и электрографической регистрации сокращений препарата, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, пиявку предварительно выдерживают в воде при 4-6 С в течение

4-6 сут, а затем изолированную мышцу в растворе Рингера в течение 46-50 ч.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Kadota К., Nagata М. Bioassay

of acetylcholine with thin muscle

strip of the Japanese mediса1 leech . а preliminary note of the геарргаlsal

of the evai!àÜ!1Ну nf this method

Jap.J..Pharmacol 1975, 25 ° 5, р. 602-605.

Способ определения концентрации ацетилхолина в структурах мозга

Способ количественного определения саркоплазматического ретикулума в мышечной ткани // 934375

Способ диагностики острого затяжного и хронического активного гепатитов // 934300

Способ определения чувствительности опухолей легкого к химиопрепаратам // 934299

Способ получения синтетической двунитчатой рнк, обладающей интерферониндуцирующей активностью // 933001

Способ определения активности фенилаланингидроксилазы в биологическом материале // 932400

Способ ингибирования синтеза рибосомных рнк // 932399

Способ получения глицеральдегидфосфатдегидрогеназы из скелетной мышцы млекопитающих // 930124

Способ определения димедрола в биологических объектах // 930123

Способ определения активности малатдегидрогеназы в биологических тканях // 930122

Способ контроля состояния сельскохозяйственных и пищевых веществ или лекарственного препарата и устройство для его осуществления // 2100805

Способ определения в пробе цельной крови распределения вероятностей в популяции эритроцитов их подмножеств и устройство для его осуществления // 2100807

Способ определения гетероциклических нитросоединений в биологическом материале // 2100808

Способ выявления лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах // 2101699

Изобретение относится к медицине, а именно к анатомии, топографической анатомии, патологической анатомии и может быть использовано для изучения лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах макромикроскопическом поле видения в норме, в возрастном аспекте, в эксперименте и патологии

Способ ионного парамагнитного резонанса на нервном волокне // 2101700

Изобретение относится к медицине, в частности к способам неинвазивной диагностики функционирования биологических мембран и соответствующей оценке метаболических процессов в организме на клеточном уровне

Способ прогноза хронического рецидивирующего течения заболевания у лиц, перенесших первичную рожу // 2101701

Изобретение относится к медицине, а именно инфекционным болезням и дерматологии, и может найти применение как в стационарных, так и поликлинических условиях

Способ определения реактивного лизиса клеток // 2101702

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской биохимии, и может быть использовано для определения реактивного лизиса клеток в содержащей комплемент биологической жидкости в клинической практике и в научных исследованиях

Способ определения наличия активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите // 2101703

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите путем биохимического исследования сыворотки крови

Способ дифференциальной диагностики миокардита и миокардитического кардиосклероза // 2102749

Устройство для локального подведения биологически активных веществ // 2102750