Способ определения днк в клетках на цитологическом препарате
. I
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Союз Советских Социалистических Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 040181 (21) 3232839/28-13 с присоединением заявки М2(23) Приоритет.— Опубликовано 23.02,83. Бюллетень Йо 7 РЦМg з G 01 N 1/28 A 61 В 10/00 Государственный комитет СССР но делам изобретений и открытий I (ЗЗ) УД 615. 475 (088. 8,) Дата опубликования описания 230283 (72) Авторы изобретения С.Ф. Серов, С.И. Иржанов и В.Н. 3 а Ленинградский городской онкологический исследовательский институт онкологии и (71) Заявители (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДНК В КЛЕТКАХ НА ЦИТОЛОГИЧЕСКОМ ПРЕПАРАТЕ Изобретение относится к медицине и- касается приготовления цитологических препаратов изолированных клеток из соскобов тканевых блоков. Известен. способ определения ДИК в клетках на цитологическом препара.те включающий их фиксацию, заключение в,парафин и окрашивание реактивом Фельгена (1). Однако известный способ не позволяет точно определить. ДНК в клетках. Цель изобретения - повышение точности способа при использовании длительно хранящегося материала. Эта цель достигается тем, что-при осуществлении способа определения ДНК в клетках на цитологическом препарате, включающего их фиксацию, заключение в парафин и. окрашивание реактивом Фельгана, из парафиновых блоков готовят соскобы клеток, далее их депарафннируют, центрифугируют и готовят мазки из клеточной массы. Способ осуществляют следующим об.— разом. Соскоб готовят, например с поверхности парафинового тканевого блока, предварительно смоченным в ксилоле инструментом, лучше всего глазным скальпелем. Для удаления парафина материал соскоба помещают в пробирку с кснлолом . (три порции), где интенсивно размешивают тонкой стеклянной или металлической палочкой. После осаждения материала соскоба тонкой пипеткой осторожно отсасывают ксилол и добавляют абсолютный спирт, вновь взбалтывают и так последовательно проводят через 9бо, 70Р спирты и дистиллированную воду. Ксилол, спирты и воду добавляют в количестве,. превышающем осадок тканевого соскоба в "три раза. Иэ последней манипуляции с дистилированной водой воду удаляют не всю, а часть ее оставляют на изготовление мазков из осадка .. обработанного соскоба тканевых блоков. -20 Подсушенные мазки окрашивают по Фельгену (при необходимости другими методами ), заключают в бальзам и покрывают покровными стеклами. В препаратах обнаруживаются в основном изолированные клетки, а иногда комплексы клеток или даже мелкие кусочки тканей. Наличие свободных клеток и комплексов их дает основание считать - данные препараты цитологическими, хотя при изготовлении соскоба часть 998910, Среднее содержание ДНК (относительная единица) Группы больных с доброкачествен-. ной опухолью (20 случаев) 7,36 -0,20 Составитель С. Малютина Техред A.Áàáèíåö Корректор Ю. Макаренко Редактор В. Лазаренко Подписное Заказ 1143/65 Тираж 871 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 клеток травмируется, остается достаточное количество их, чтобы судить о структуре органа или ткани, а также. для,количественного определения содержания ДНК тех или иных компонентов в цитоплаэме и ядрах клеток. Кроме того, данные препараты. можно подвергнуть гистохимическому, энзимохимическому и люминесцентному исследованиям. Пример 1. Больная Н., 56 лет, поступила в клинику. Клинический диагноз: Киста правово яичника. По содержанию ДНК цитологического препарата, приготовленного предлагаемым .способом, диагноз должен быть как злока15 чественная цилиоэпителиальная кистома яичника. Больная поступила в клинику через 6 месяцев с обширными метастазами опухоли s сальник .и внутренние органы. Пример 2. Больная Б., 24 года, поступила в клинику. Клинический диагноз Пролиферирующая киста правого яичника. Go содержанию ДНК цитологического препарата диагноз должен быть 25 как злокачественная цилиоэпителиальная кистома яичника. Через 8 5 месяцев у больной обнаружен рецидив опухоли и несмотря на химиотерапию имелись обширные метастизированные опухо-.30 ли. В обоих случаях по содержанию ДНК гистологических срезов имелись незначительные отклонения от доброкачественной опухоли. 35 Была изучена группа больных из 20 человек с доброкачественными кистами яичников и 20 человек со злокачестввнными кистами яичников. При выявлении ДНК (препараты получены предло-40 женным способом) отмечено резкое уве» личение содержания ДНК в группе со злокачественными кистами яичников по сравнению с доброкачественными кистами, яичников статически доcTQBерное. В таблице представлено содержание ДНК в доброкачественных и злокачественных кистах яичников в цитологических препаратах со злокачественной опухолью (20 случаев) 16,61+ 0,61 Как видно из таблицы, предложенным способом удается более точно определить степень злокачественности серозных кист яичников. Предложенный способ позволяет повысить точность, а также использовать архивный материал, проводить определение ДНК в самых различных тканях и органах, полученных не только при операциях, но и в эксперименте на животных. Формула изобретения Способ определения ДНК в клетках на цитологическом препарате, включающий их фиксацию, заключение в.парафин и окрашивание реактивом Фельгена, отличающийся тем, что, с целью повь3шения точности способа при использовании длительно хранящегося материала, из парафиновых блоков готовят соскобы клеток, далее их депарафинируют, центрифугируют и готовят мазки из клеточной массы. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Меркулов Г.A. Курс патогистологической техники. М., Медицина, 1969, с. 73.
