Способ получения гипериммунной антиэритроцитарной сыворотки

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИПЕРИММУННОЙ АНТИЭРИТРОЦИТАРНОЙ СЫВОРОТКИ путем внутривенного введения суспензии эритроцитов лабораторным животHbD4 с последующим забором крови и отделением сыворотки, о т л и ч аю щ и и с я тем, что, с целыо получения целевого продукта с повышенным содержанием антител класса М, упрощения и ускорения способа, животным однократно внутривенно вводят суспеНзию , содержащую 1 Ю эритроцитов на 100 г массы тела животного, с последующим забором крови на 5-й день после иммунизации.

Зир А 61 В 10 00 (21) 3447365/28-13 (22) 28.05.82 (46) 15.06.84, Бюл. У 22 (72) В.В.Николаевский, А.Е.Еременко, И.К.Иванов и В.Д.Курченко (71) Ялтинский научно-исследовательский институт физических методов лечения и медицинской климатологии им. И.М.Сеченова (53) 615.373.3(088.8) (56) 1. Вязов О.E. Лабораторная иммунология. М,, "Медицина",1967, с. 67.

2, Кабот Е., Мейер М., Экспериментальная иммуиохимия..М., "Медицина", 1967, с. 156-157.

SU„„1097278 Д (54) (57). СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИПЕРИММУННОЙ АНТИЭРИТРОЦИТАРНОЙ СЫВОРОТКИ путем внутривенного введения суспензии эритроцитов лабораторным животным с последующим забором крови и отделением сыворотки, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью получения целевого продукта с повышенным содержанием антител класса М, упрощения и ускорения способа, животным однократно внутривенно вводят суспензию, содержащую 1.10 эритроци о тов на 100 г массы тела животного, с последующим забором крови на 5-й день после иммунизации.

1 1097

Г

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, в частности к способу получения иммунных сывороток, и может быть использовано для получения антиэритроцитарных гипериммунных 5 диагностических сывороток с повышенным содержанием антител класса М, при пересадке органов, диагностике иммунодефицитных состояний и др.

Для дифференцированной количественной оценки иммунорегуляторных популяций Т-лимфоцитов необходимы гиперим. мунные антиэритроцитарные сыворотки с повышенным содержанием антител класса М. 15

Известен способ получения антиэритроцитарной сыворотки путем внутривенного введения петухам взвеси эритроцитов 5 раз с интервалом в три дня с последующей реиммунизацией спус- о тя 2 недели. Реиммунизация включает две внутривенные инъекции с интервалом в три дня. Курс иммунизации состоит из 7 инъекций в течение 35 дней

L1 3.

Данным способом невозможно получить антиэритроцитарную гипериммунную сыворотку с повышенным содержанием антител класса M. Кроме того, способ требует больших затрат времени и тру-30 да.

Известен также способ получения гипериммунной антиэритроцитарной сыворотки иммунизацией животных суспензией эритроцитов. Способ заключается в двухнедельном внутривенном введении животным эритроцитов барана (11 инъекций)(2 3.

Однако в полученной сыворотке содержится повышенное количество 40 антител класса G.

Целью изобретения является получение гипериммунной антиэритроцитарной сыворотки с повышенным содержанием антител класса М, а также упрощение и ускорение способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения гипериммунной антиэритроцитарной сыворотки путем внутривенного введения суспензии эритроцитов лабораторным животным с последующим забором крови и отделением сыворотки, животным однократно внутривенно вводят суспензию, содержащую 1 10"Оэритроцитов на 100 r

55 массы тела животного с последующим забором крови на 5-й день после иммунизации.

278 2

Пример. В опытах используют крыс-самцов весом 280-300 r. Для иммунизации применяют эритроциты, например, барана. С .помощью центрифу" гирования эритроциты трижды отмывают физиологическим раствором по 15 мин при 3 тыс. об/мин. Затем эритроциты в количестве 1 ° 10 на 100 г массы тела ю животного разводят физиологическим раствором до объема, например, 2,0 мл и перемешивают встряхиванием до получения эритроцитарной суспензии.

Суспензию вводят крысам в хвостовую вену. Забор крови для получения гипериммунной антиэритроцитарной сыворотки производят на 5-й день после иммунизации.

Сыворотку отделяют от сгустка, инактивируют с помощью нагревания при 56 С в течение 30 мин и определяют в реакции гемагглютинации титр антиэритроцитарных антител.

Средняя величина титра антител

1:38400+420, что более чем в 5 раз превышает титр антиэритроцитарных антител, полученных известным способом (1:6820т350).

Для подтверждения повышенного содержания в сыворотке антиэритроцитарных антител класса M в селезенке иммунизированных животных определяют прямые антителообразующие клетки (АОК) по методу Ерне. Высокие показатели количества прямых AOK в селезенке иммунизированных животных свидетельствуют о продукции иммунной системы антител класса M.

В селезенке животных, иммунизированных предлагаемым способом, среднее количество прямых антителообразующих клеток 2292+212 AOK на 10 ядросодержащих клеток селезенки. При имму- . низации известным способом число АОК

594+256 на 10" клеток (р (0,05).

Предлагаемым способом от одной крысы можно получить 4,0-5,0 мл гипериммунной антиэтрироцитарной сыворотки с повышенным содержанием антител иммуноглобулиевого класса M. Этого количества сыворотки достаточно для поставки 1500-2000 анализов (поскольку иммунная сыворотка для поставки реакции разводится в 35-40 тыс.раз).

Предлагаемая гипериммунная сыворотка представляет собой прозрачную, слегка опалесцирующую жидкость соломенно-желтоватого цвета. Титр антиэритроцитарных антител 1:38400+420.

Относительное количество Т-лимфоцитов-помощников ("халперов") E+ Т+ см, определяющихся в использовании сыворотки, 7.

Проба крови Ф

1 известной предлагаемой

32,6

32,0

33,2

33,5

31,0

30,5

31,5

32,0

30,0

30,6

Составитель Г.Крюкова

Техред О.Неце Корректор А.Ференц

Редактор M.Òîâòèí

Заказ 4086/4

Тираж 688 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

3 109

Использование в клинике предлагае мой сыворотки дает результаты, соответствующие результатам, полученным с помощью известной сыворотки, (см.таблицу).

Сопоставительный анализ результатов, полученных с использованием предлагаемой и известной сывороток, показывает, что между ними существует1б прямая достоверная корреляционная связь (i =0,85, р 4 0,05).

Практическое использование.в клинике предлагаемой гипериммунной сыворотки заключается в опре) еленин

rl в крови больных количества Т-лимфоцитов-помощников ("халперов"), что имеет очень важное значение для адекватной оценки иммунологической реактивности. 20

Для определения количества Т-помощников ("халперов") эритроциты

7278 4 инкубируют с 0,5-1,0 мл субагглютинирующего разведения гипериммунной сыворотки (в данном случае, при титре сыворотки 1:38000, рабочим, субагглютинирующим разведением, будет 1:40000), после чего подготовленные таким образом эритроциты используют в реакции розеткообразования с Т-лимфоцитами обследуемого., количество розеток соответствует количеству Т-лимфоцитов-помощников ("халперов")

Таким образом, предлагаемый способ позволяет получить гипериммунную антиэритроцитарную сыворотку с повышенным содержанием антител клас,са М; сократить время иммунизации с двух недель до 5-и дней, упростить технику иммунизации (вместо 11 инъекций при иммунизации известным способом — 1 инъекция предлагаемым способом) .