Штамм вируса гепатита а,используемый для приготовления специфических диагностических препаратов

 

Изобретение относится к области вирусологии и касается штамма вируса гепатита А, используемого для приготовления специфических диагностических препаратов. Штамм вируса, гепатита А (ВГА) выделен из печеночной ткани яванской макаки, депониро - ван в государственной коллекции вирусов Института вирусологии . им. Д.И.Ивановского под номером ГКВ- 729. Штамм при введении яванским или бурым макакам вызывает гепатит А, При экстракции печеночной ткани зараженных макак вьоделяют антиген, который по антигенным свойствам близок вирусу гепатита А, вызьшающего заболевание людей. Полученный антиген может быть успешно использован для выявления специфических антител в сыворотках крови больных гепатитом А. 1 табл. (Л со ю 00 оо

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51) 4 С 12 N 7/00

®СЕСОИЩц -, вю Р

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н A BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4017809/31-13 (22) 29.01,86 (46) 07.08.87, Бюл, У 29 (71) Институт полиомиелита и вирусHblx энцефалитов АМН СССР

-(72) А,Г.Анджапаридзе, В,Ф,Полещук и И.С.Балаян (53) 576,858(088,8) (56) Tabor E., Purull R.Ì,, Gerety R.I. Primate animere models

and Titered inocula for the study

of human Hepatitis А, Hepatitis В, and Non-А, Non-В hepatitis. I,Bud, Primatol. 1983, 11 12, р. 305-318. (54) ШТА11М ВИРУСА ГЕПАТИТА А, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ (57) Изобретение относится к области вирусологии и касается штамма виру„,SUÄÄ 1328376 А1 са гепатита А, используемого для приготовления специфических диагностических препаратов, Штамм вируса, гепатита А (ВГА) вьщелен из печеночной ткани яванской макаки, депонирован в государственной коллекции вирусов Института вирусологии ." им. Д.И.Ивановского под номером ГКВ729. Штамм при введении яванским или бурым макакам вызывает гепатйт А, При экстракции печеночной ткани зараженных макак вьщеляют антиген, который по антигенным свойствам близок вирусу гепатита А, вызывающего заболевание людей. Полученный антиген может быть успешно использован для выявления специфических антител в сыно ротках крови больных гепатитом А.

1 табл.

Формула изобретения

Штамм вируса гепатита А ГКВ Р 729 (Всесоюзная коллекция вирусов Инсти1

13283

Изобретение относится к области вирусологии и касается получения диагностических препаратов, Цель изобретения - выделение нового штамма вируса гепатита А, способного вызывать инфекцию гепатита А на доступных видах обезьян и сопровождающуюся выделением вируса, используемого для специфическиой диагностики гепатита А, Штамм вируса гепатита А (ЯМ-55) выделен иэ печеночной ткани яванской макаки, спонтанно заболевшей гепатитом А после воздействия иммунодепрессантов.

Штамм депонирован в государственной коллекции вирусов Института вирусологии им, Д,И,Ивановского под номером ГКВ-729.

Штамм характеризуется следующими свойствами: диаметр полных и пустых вирусных частиц 27 нм, основная масса вирусных частиц имеет плавучую плотность 1,34 г/см> в градиенте плотности хлорида цезия и константу седиментации 1575 в градиенте плотности сахарозы. По электронно-микроскопическим радио и энзимо-иммунологическим данным штамм ЯМ-55 по своим антигенным свойствам не отличается от штаммов ВГА, выделенных от больных гепатитом А, Печеночная ткань яванских и бурых макак, инфицированных штаммом ВГА/ЯМ-55, накапливает вирус в количестве, достаточном для полу35 чения вирусного антигена и осуществления специфической диагностики гепатита А.

Пример l. Использование виру" са гепатита А, полученного иэ печени обезьян, для диагностики гепатита А, Из инфицированной печени яванских и бурых макак, зараженных ВГА (ЯМ-55), готовят экстракт (0,5 г ткани промы45 вают 0,1 М раствором фосфатно-солевого буфера (ФСБ) рН 7,2-7,4, гомогенизируют, добавляют 5,0 мл О,l М раствора ФСБ, вносят несколько стеклянных бус и смесь встряхивают 15 мин, затем.

10 центрифугируют 30 мин, 3000 об/мин, переливают надосадочную жидкость в пластиковые пробирки, осветляют центрифугированием 30 мин, 10000 об/мин, добавляют канамицин 0,5-1,0 мг/мл, который разводят в 0,1 М ФСБ 1:2-1:20 и исследуют на .содержание антигена

ВГА. Подбирают опытным путем оптимальное разведение экстракта и его в даль76 г нейшем используют в качестве антигена ВГА для выявления антител в исследуемых сыворотках больных к ВГА класcaN титрования суммарных антител к укаэанному вирусу и в качестве положительного контроля при обследовании материалов с помощью. радио и энзимо-иммунологических методов. Параллельное исследование 514 сывороток больных и здоровых лиц на наличие антител к ВГА с помощью ЗИМ при использовании экстракта печени обезьян (зараженных штаммом ВГА) и экстракта фекальных проб людей, больных гепатитом А (содержащих частицы ВГА) показало 100Х совпадение результатов: иэ

514 исследованных сывороток в 499 выявлены антитела к ВГА. Такое же пол" ное совпадение результатов получено при титровании антител к ВГА в исследуемых сыворотках. Данные приведены в таблице.

Штамм может быть использован также для моделирования гепатита А.

Пример 2. Иэ печеночной ткани яванской макаки готовят суспензию, содержащую вирус гепатита А:0,5 r печеночной ткани 3-кратно промывают

0,1 М раствором фосфатно-солевого буфера рН 7,2-7,4, гомогениэируют в керамической ступке, добавляют 5 мл

0,1 М раствора того же буфераи встряхивают с бусами в течение 14 мин на шуттель-аппарате, Затем гомогенат центрифугируют 30 мин при 3000 об/мин, Надосадочную жидкость отбирают и ос" ветляют, Полученный материал (с добавкой канамицина 0,5-1,0 мг/мл) используют для заражения яванской или бурых макак, Заражение проводят внутривенным введением 1 мл 10Х-ного экстракта, Через 14-16 дней после заражения обнаруживают характерные для острого гепатита гистологические изменения печеночной ткани и накопление частиц ВГА в печеночных клетках, Использование штамма вируса гепатита А ГКВ-729 позволяет получать вирусную массу для приготовления диаг" ностических препаратов с использованием доступного биообъекта, а также изучать в эксперименте данное заболевание, з 1328376

4 тута вирусологии им, Д,И,Ивановского товления специфических диагностичесАМН СССР), используемый для приго- ких препаратов.

Количество сывороток с титром антител к ВГА

Количество сывороток с as о

) °

) ° тнтеламн к ВГА

ы» ок

104,: 84 21

499

514

232

514

104 . 84 21

232

499

Редактор С.Патрушева

Заказ 3453/29 Тираж 499 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушскаянаб., д, 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул, Проектная, 4

Материалы испольэо ванные дл постанов

ЗИМ

Печеночвый экстракт обезьян (Штамм

ВГА-ЯИ-55) Фекальюяй экстракт больного человека

ГА (Иэо лят ВГА)407) (известный) Колнчес во сыво ток, не содержа щнх ант тела к ВГА

Составитель А.Маныкин

Техред А.Кравчук Корректор В.Гирняк