Способ выявления аутоаллергического компонента при увеитах

 

Изобретение относится к медицине, предназначено в офтальмологии для иммунодиагностики аутоаллергии при увеитах. Цель изобретения - повыигение точности диагностики. Для этого перед постановкой реакции пассивной гемагглютинаини (РПГА) эритроцитов слезную жидкость инактивируют в водяной бане 30 мин при 56°С, затем абсорбируют бараньими эритроцитами 18 ч. РПГА эритроцНгов проводят в микротитраторе Таккачи. В качестве диагно стикума используют 1%-ную взвесь сенсибилизироваииых эритроцитов в объеме 0,025 мл каждого разведения исследуемой слезной жидкости, начиная с 1:16. Определяют тканеспецифические антитела к S-антигену сетчатки в слезной жидкости. Анализ соотношения содержания S-антнтел и клинических особенностей цвета показывает, что S-антитела обнаруживаются в слезной жидкости больного глаза чаще, чем в сыворотке крови больных увеитамн. Это связано с активностью увеита и тяжестью поражения сетчатки . При титре антител (1:64) - (1:128) делают вывод об активности аутоаллергического процесса при увеитах. lO (Л С mri. СО оэ nU

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СО!.1ИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (5I) 5 О 01 N 33 53, А 6! К 39 00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

Й@s - . ."

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ вЂ” " - —" -;" !

К ABT0PCH0MV СВИДЕТЕЛЬСТВУ (46) Э7 09.92. Бюл. гг 33 (21) 3822741/14 (22) 06.12.84 (71) Московский научно-исследовательский институт глазных болезней им. Гельмгольца и Институт химической физики AH СССР (72) О. С. Слепова, Н. С. Зайцева, М. А. Островский, Т. Ф. Шевченко, Г, P. Каламкаров, В. Ф. Краюшкина и В. И. Севрюков (53) 615.36(088.8) (56) Экстракты сетчатки и гинериммунные к ним сыворотки.

Ромашенков Ф. А., Семенов А. Д. и Тереньтьев А. A. Некоторые вопросы патогенеза серозных хориоретинитов и их лечение аргоновым лазером.— О. Ж., 1978, № 5, с. 333 — 336. (54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ АУТОАЛЛЕРГИЧЕСКОГО КОМПОНЕНТА ПРИ

УВЕИТАХ (57) Изобретение относится к медицине, предназначено в офтальмологии для иммунодиагностики аутоаллергии при увеитах.

„„Я0„„1334406 А !

Цель изобретения — повышение точности диа гностики. Для этого перед постановкой реакции пассивной гемагглютинации (РП ГА) эритроцитов слезную жидкость инактивируют в водяной бане 30 мин при

56 С, затем абсорбируют бараньими эритроцитами 18 ч. РПГА эритроцнз ов проводят в микротитраторе Таккачи. В качестве диагностикума используют 1%-ную взвесь сенсибилизированных эритроцитов B обьеме 0,025 мл каждого разведения исследуемой слезной жидкости, начиная с I: l6 Определяют ткане- специфические антитела к S-антигену сетчатки в слезной жидкости. Анализ соотношения содержания S-антител и клинических особенностей цвета показывает, что S-антитела обнаруживаются в слезной жидкости больного глаза чаще, чем в сыворотке крови больных увеитами. Это связано с активностью увеита н тяжестью поражения сетчатки. При титре антител (I:64) — (1:128) делают вывод об активности аутоаллергического процесса при увеитах.

1334406

1!зобретение относится к медицине, к офтальмологии, и предназначено для иммунодиагностики аутоаллергии при увеитах.

1.!елью изобретения является повьнцеиие точности диагностики.

Способ осуществляется следующим образом.

Забор слезной жидкости проводят с помощью меланжера, перед постановкой реакции пассивной гемагглютинации эритроцитов (РПГЛ) слезную жидкость инактивируют в водяной бане в течение 30 мин при 56 С и затем абсорбируют бараньими эритроцитами в течение 18 i. ! еакцию пассивной гемагглютийации эритроцитов проводят в микротитраторе Таккачи по об|цепринятой методике; диагностикум используют в виде I %-пой взвеси сенсибилизированых эритроцитов в объеме

0,025 мл на 0,5 мл каждого разведения исследуемой слезной жидкости, начиная с

1: 16.

Приготовление стойкого эритроцитарного диагностнкума: 1/ в качестве сенситина используют S-аптнген — очищенную от примесей водорастворимую фракцию белков наружных сегментов палочек (НСП) сетчатки, полученную из глаз крупного рогатого скота. НСП выделя1от из сетчаток и очищают от примесей путем нескольких последовательных центрифугирований в растворах сахарозы, содер>кащих 0,1 М KCI и буфер (0,05М трис-HCI, рН 7,4). Затем НСП подвергают осмотичсскому шоку в 10-кратном объеме дистиллированной воды и центрифугнруют при 100 000 д; надосадочну1о жи,з,кость концентрируют диализом против

50% раствора полиэтиленгликоля (м. в.

l5 000). Полученный раствор, содержащий водорастворимую фракцию белков (1 мг/мл)

HCI — S антиген используют для сенсибилизации эритроцитов; 2/ бараньи эритроциты, стабилизированные ацетатальдегидом по Чиен (в течение 20-сут) и танизированные в те.ение 15 мин при 37 С, сенсибилизируют 3-антигеном в дозе 68 мкг/мл в те.ение 60 мин/рН среды 6,4; температура

45 — 48 C/; 3) сенсибилизированные эритроциты консервируют 0,3% "Hûì раствором, формалина.

Высокая специфичность и чувствительность диагностикума подтверждена в опытах исследования гипериммунных кроличьих сывороток (нарастание титров в процессе иммунизации от 0 до (1:512) — (1:16384), контрольных гетерологичных сывороток (от кроликов, иммунизированных экстрактами увеальной ткани и роговицы, титры — 0— — 1:8) и сывороток от контрольных интактных животных) поло>кительнь1х РПГА не наблюдалось) .

Анализ соотношения содержания 5-антител и клинических особенностей увеита показал, что S-антитела обнаруживаются в слезной жидкости больного глаза чаще (p(0,01) и в значительно более высоких титрах

f0

25 (l.= — 5,6), чем в сыворотке кропи больных увеитами. У здоровых доноров и больных каратитами н канъюктивитами S-антитела в сыворотке и слезе практически нс выявляются.

Таким образом, наиболее информативными в плане выявления аутоаллергических реакций при увеитах является исследования слезной жидкости.

Частота обнаружения и уровень S-антител в слезной жидкости достоверно связаны с активностью увеита и тяжестью поражения сетчатки. Повышение содержания S-антител в слезной жидкости больного глаза выше (l:64) — (1:! 28) свидетельствует об активности аутоаллергического процесса при увеитах

Определение антител предлагаемым методом позволяет выявить аутоаллергические . реакции как в период индукции увеита, так и в период нарастания дистрофизических изменений в сетчатке. Наиболее вероятным периодом для выявления S-антител в слезной жидкости являются первые 5 — 7 дней от начала обострения хронического увеита. У больных с подострым течением увеита, при нарастающем снижении остроты зрения и помутнении преломляюн1их сред, определение S-антител може служить признаком аутоаллергического поражения сетчатки.

Пример I. Больная В, !3 лет. Диагноз: хронический рецидивируюгций периферический увеит ОИ, предположител,но гсрпетической (инфекционно-аллергичсс кой) этиологии. Давность заболевания 5 лст.

Первое обследован ие прои. дено в начале обостроения хрони (ccKoiо увеита, через 5 дней после выраженного усиления воспалительных симптомов на ОИ. Объективно:

ОД вЂ” преципитаты, мелкоточечная запотелость эндотелия, взвесь в стекловидном теле, глазное дно за густым флеро,; visus===0,2 с корр. 0,50 — прони питатов больше, взвесь в стекловидном теле более грубая; глазное дно за флером, vtsus=— - 0,1 с корр. 0,3 — 0,4.

Титры S-антител в слезной жидкости

OJ1,=I:512; 0S=-1:128. В сыворотке крови

5-антитела не обнаружены.

В соответствии с клииико-иммунологическими показателями больной назначена патогенетически направленная терапия, включающая гипосенсибилизирующие препараты, преднизолои, ангиопротекторы.

При обследовании спустя 4 дня на фоне лечения отмечено снижение титров S-антител в слезной жидкости ОД до 1:32 и OS до

1:8.

Следуюгцее обследование проведено через

6 месяцев в период стойкой ремиссии увеита на ОИ (на фоне псддер>киваюгцей кортикостероидной терапии) . Объективно:

ОИ; единичные старые отложения на энлотелии роговицы, несвежие (тяжистые) помутнения в стекловидном т:ле; глпзнсн дно 1ОсTYIEEI<> осмотру, BHдны сеp<)BOITE I(<>чажкн с довольно четкими границами. В слезной жидкости ОД 5-антитела не пыявля(отея; в

OS --- титр 1:64. В сь)воротке крови антитела не обнаружены.

К опт рол ьное и м м у пологи ч еское обследование проведено через месяц при стойкой клинической ремиссии увеита на ОИ. Титр

S-антител в слезной жидкости OД= 1:32.

В слезной лсидкости OS u R сыворотке крови

5-антитела не обнаруже>.ы.

Снос<>б позволяет днагн<>стнровать рлзвитие аутоаллср гиенского ком понентл и ри увеитах. Точность диагностики повып>ается в 2 раза, что позволяет своевременно н(>значить пят<)гене r»чс(кн <)C><)a

Фо/>« и;«пб/и r< ннч (.по< Об выявления аутолллергll геског<> компонента нри увеитах путем определения тклнеспепнфнч cKI<)< антител к лнтиген а м сетч л т>< «. отл т к S-лнтигену сетчатки в слезной жидкости и при титре антител выц>с {1:64) — {1:1281 выянля>от нллици". аутоаллергического компонента нри увеитах.

Составитель Т. 1(рюкоаа

Pp:èêTîI) Т 11илипеик<) Те х ред И. В е <)ес 1(орректор A. Ильин

За каз 4<154 Подписное

f3HИИПИ 1 осуларстпеиного ко«итета СССР по дела.,< изобретений н открытн<< ! 3035, Москва, Ж вЂ” 35. Раун)ска«иаб., д 4/5

11роиаполсTR(í))-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. <1роектиая, 4