Среда для репродукции вирусов гриппа в культуре клеток

 

Изобретение относится к области вирусологии и касается среды для репродукции вирусов грипг а в культуре клеток. Цель изобретения - упрощение среды с сохранением стабильных высоких титров вирусов. Среда для репродукции вирусов гриппа содержит панкреатический гидролизат т-, куриньк эмбрионов 150-220 г (35-40 мг% аминного аэота); раствор Хенкса с феноловы 1 красным 99-101 г; 0,25%-ый раствор трипсина в фосфатном буфере 1,6-2,0 г; аминопептид 50-100 г; канамицин (100000 мкг/мл) 0,5-1,0 г; би(три)дистиллированн ю воду до 1 л; рН среды 7,4-7,5. Гемагглютинирующ1 Й титр на 3-4 день репродукции 16-32; ЭВД 50 5, 1-6,55.. 8 табл. со со 4:;

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

„„SU,.„, 13374Î7

А1!

511 4 С 12 Х 7/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

H Д ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

i (21) 3989920/28-13 (22) 16,! 2.85 (46) 15,09.87. Бюл. !1- 34 (71) Уфимский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И,И,»!ечникова (72) Г. Н.Поез»ка»»ова, С. Н. Горбугп»на, Л.И.Игнатьева и В,А.Гудков (53) 576.8.093.1 (088,8) (56) ТУ 42 ° 14 ° 166-79, (54) СРЕДА ЧЛЯ РЕПРОДУКЦИИ ВИРУСОВ

ГРИППА В КУ И ТУРЕ КЛЕТОК (57) Изобретение относится к области вирусологии и касается среды для репродукции вирусов гриппа в культуре котлеток, Цель изобретения — упро»»»ение среды с сохранением стабильных высоких титров вирусов. Среда для репродукции вирусов гриппа содержит панкреатический гидролизат ту»век куриных змбрионов !50-220 г (35-40 мгЕ аминного азота); раствор Хенкса с феноловым красным 99-101 г; 0,25/-ый раствор трипсина в фосфатном буфере

1,6-2,0 г; аминонептид 50-100

»;анамицин (100000 мкг/мл} 0,5-),0 г; би(три)дистил.-»ированную воду Ло 1 л; рН среды 7,4-; „5. Гемагглюти»и1рующкй т»г»р на 3-4 де..н;ь репродукции 1 6-32 „

ЭЦЦ о 5 1-6 55. 8 табл.!

337407 тушек куриных эмбрионов

Раствор

Хенкса с

150 — 220 сне нол ов ым

99 — 101

1,6 — 2,0

50 — 100

0,5 — 1,0

До 1 литра .

Таблица1

Гидролизат

Пептон, X

Хлориды, 7

Степень (NH.), м Я (N), мг 7; расщепления (МН 2

167 32.8

326,5 4 44,4 !,О О,? 0,305

+G,200

Гидролизат лактальбумина (57-ный концентрат) 0„481

Гидролизат куриных эмб рионов для микробиологлческих целей

170 t 10,0

300,0 30,0 1,3 t 0.2 0.300

+0,100

0,566

Предлагаемый гидролизат тушек куриных эмбрионов

318,0+87,5 0,53+0,13 0,610 0,620

0,200

195 + 36,6

Таблица 2

Аминокислотный состав ГЛА и ГКЭ одинаковой концентрации

Е по отношению к прототипу

Аминокислоты, г/л

Гидролизат

Гидролизат лактальтушек куриных эмббумина (прототип) рионов (предлагае мый) 0,082

0,021 400

Аспарагиновая кислота

250

О, 048

О,!20 рLонин би (три) дис ти!(пиров анную вnqу о л и ч а ю щ а я с ятем,что,спелью упрощения среды с сохранением cràбильности высоких титров вирусов,она дополнительно содержит 0,25 -ый раствор трипсина на фосфатном буфере и аминопептид, и качестве источника белка она содержит панкреатический гидролизат тушек куриных эмбрионов с содержанием 35-40 мг7. аминчого азота, при следующем количественном соотношении компонентов, г/.я:

Панкреатический гидролизат

Аминный азот; Общий а -.îò к расным

Раствор трипсина

Аминопептид

Канамипин (100000 мкг/мл)

Би(три)дистиллированная вода

0 ) U

Се )3 (.(н 1 0:> >

1 1 с . (>

А(ГНJ;c(>(((HH

0 j

1 (?

Г. >От(!((Ин

О 0) 1 >1>,((:. с>" (л(п! ин

",. Об7

0 1(19

Аланич

0„090

> 0(О, 1В=>

Валин с

11ис тин е ле)(.((О>058

1 i .c!1 ;

Метиони((,с >, с> сИ а о. (е . й((r,g (-(О, .>б? (i 9

:!ейцин

О 109

1ироаHH

09=

1 о

> j(5(:)изин

Г ие" Г(,с-(н с((О,С >9

0.,0 . 1 р Г(н т о ф а и

0>10ч,, Р (- и и И (1

i(.(1. I p OJ(HH ц (л

I,((>)> Э ОЛИ ".. с. . Г. il jH

>с> се мк 1..—; а

Г J((aтя! (ино>3 au кис. (ота ()> ((Н И Л с (. l cl H J l)с)н:"ре,;(..е i(1; .

Раствор Хенк, а

О „2 > -Hb(» рае-н о р i ри((е i(H ý.

>,О Jr И», cl с

Π— с - : -:.: > „ë (» j K r-» > C " i l p

И)1, 1 ). К (> Н:." Р i ". 1: с (HH >с> *Ь: r> Н

1337407

-- родолжен!-:е г"-.C!. !. 1

2

Аминопептид

5. (об.i с!б.,:

Канамииин (!00 тыс.ед. на мл) 0 о

50 мкг/:гл

Би(три)дистиллированная вода

До 1 !! а 0; x x! x! а 4 Т

Титры вируса, мл Характеристика клеток

-!. т

Сас тояние монослоя 1 1 .. !

Дни репр 1 . Зу1 1 Бо ",г1:!о!!!но!!. бе 3 пе т- ет!с— рации

Начало дегенерации

Островки разрушс!:ия кле ".îê (из--зà Lli1 .) 6,2

CpT x Téxx моно лоя вирусно! о происхождения

Таблицами

Конечная концентраИнгредиенты одержание, л/1 л ция

Гидролизат тушек куриных эмбрионов

37,6 мг i аминного азот .

179

Обычная

100

Раствор Хенкса

ГБ — титры представляют величину, обратную разг.едению вируса в реакции гемагглютинации;

"Э!"„ 1„-- . !огарифмы инфекционньгх 50% доэ вируса на куриных эмбр!!онах, 0 в ыч исленные по Риду и Менчу:

" 1П1Д вЂ” цитопатогенное действие вируса на клетки, 3

I1pn;)0:.)-<)Е < Н) с т;l r, )

t .) ИК(, 1.:! 00 ".(к, 5 (Об, Об. 1 -" <3,О,|;,ак-„,,„,„, „,.

00ст< янин кне ) Ок

Е0

l-- -)1(1;Iс.И К(ОНОС с(с)Ц

111)l ()1-;1)iи е;(с()31)ч«:,);:. с сс < l;,<1 ;k!k((,Ë<< Т:1!с ((j <-,0 (Р -,Нксс ) 1 Р „Р(Рс. <с,. Т<) .:

< 5 Ь! 1) а )К с с(и 3 Я,(Е <) Г Е Н Р-,):; 11 è j3; О н О с л О я е3. < И, 1 Р <) Т P О Е) К О и

j;! )pe()!<.Ния (ЦПД;) КОki< чk а я к<)н .)," ." Pm (НИЕ.-. J ("I3Ä 1 -т цент jс,ци7 . ренин

< k

1 < — <

1 Р! 31)О.". и 3 сl Т Т ;

P B 0 . lJ 0",) Х еk! Ii; а

,J)l,Н с

0 „2 57-и: н-(.::: с т—

<.1 )г );3 а

Т1) и((с ин,:1

0 )) — и(1 р- l— вор (.,)И((с<)на

Р а с т (3 . "1) к. а l (а м и

Нина () 00000 к" < I 3

А((.(НС .«I(1 НЦ

БИ (ТРИ) ЦИС (3(31 с(ИР О Å) са Н I (а Я Б ) б, Л

Лни 1итрь(нируса

РЕНЕ),. с.ч 32 <:,, )) 111(гpe )1;.е н1 (с( (Н Е К К )с"() И Е (b К (3Н Р) (01-(i)kl

ЕДИН(!!ik, !!:3сис

1! 01 0 3() " а, 1пгдос; ние табл. 7

Раствор канаминина (100000 мкг/мп) 100 .кг на ) ;л

Би(три)дистиллированная вода l а б л и ц а 8

Характеристика кгеток

Дни

Титры BH I) ". а мя ре- Р °

ГЕ

Состояние культуры 1П!Д

311Д

Сплоян",É DHocлой

11пизнаки дегенерац ги отдельных клеток

6,0 Островки раэруз ения и де гевар;акция

16 клеток «ир ГcHo. о, а р а к т е - а

32 6,, 55 Б:-лее в, раженная

+ А сетчатая трукту-... (II и ) составитель A,Ìàíûêèí

Техред M.Ходанич

Ред",ктор ".,, Товтин

Корректор С.Черни

Зака-. 4092/23

Тираж 499 11од: исно;

ВНИ1П1И Государственного комит=-та СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д.А/5

11рои s».-:лс гвенно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Прося:ная, ч