Способ приготовления питательной среды для культивирования бифидобактерий

 

Изобретение относится к микробиологической, медицинской и молочной промышленности и представляет собой способ приготовления питательной среды, используемой для культивирования бифидобактерий. Целью изобретения является повышение активности среды, т.е. придание ей бифидогенных свойств и возможности получения культур бифидобактерий с высокой кислотообразующей способностью. Для повышения активности среды, которая содержит печеночный бульон, пептон, лактозу, хлорид натрия, цистин, агар-агар в определенных соотношениях, дополнительно вносят ферментный препарат дрожжевой β -галактозидазы. Препарат предварительно растворяют в 1/10 - 1/2 части печеночного бульона вместе с лактозой, при определенных режимах проводят гидролиз, после чего в оставшейся части печеночного бульона растворяют остальные компоненты и обе части бульона смешивают. 2 табл.

Изобретение относится к микробиологической, медицинской и молочной промышленности и представляет собой способ приготовления питательной среды, используемой для культивирования бифидобактерий. Целью изобретения является повышение активности среды, т.е. придание ей бифидогенных свойств и возможности получения культур бифидобактерий с высокой кислотообразующей способностью. Сущность способа заключается в том, что для приготовления питательной среды из печеночного бульона, пептона, лактозы, хлорида натрия, цистина, агар-агара используют ферментный препарат дрожжевой β-галактозидазы, который предварительно вместе с лактозой растворяют в 1/2 части печеночного бульона, и проводят гидролиз, т.е. выдержку в течение 1-1,5 ч при температуре 30-35^oC, после чего смешивают с оставшимся количеством печеночного бульона и растворенными в нем компонентами, при этом компоненты используют при следующем соотношении, мас.%: Пептон 0,96-0,98 Лактоза 0,96-0,98 Хлорид натрия 0,37-0,39 Цистин 0,008-0,01 Агар-агар 0,073-0,075 β-Галакто- зидаза 0,097-0,098 Печеночный бульон Остальное Предлагаемый способ приготовления питательной среды для культивирования бифидобактерий повышает активность среды, а технологические приемы позволяют экономить фермент, исключают образование меланоидиновых соединений в результате взаимодействия пептона с углеводами в процессе выдержки. Все компоненты питательной среды аналогичны среде Блаурокк, отличительным является наличие ферментного препарата β-галактозидазы, который берут в количестве 0,075-0,10%, при активности фермента 1000 ед/г. Для выбора оптимального содержания фермента были проведены испытания количества вносимой β -галактозидазы. Для этого были приготовлены варианты сред, содержащие 0,97% пептона, 0,97% лактозы, 0,38% хлорида натрия, 0,009% цистина, 0,07% агар-агара, отличающиеся между собой содержанием β-галактозидазы от 0,090 до 0,1%, и соответственно в каждую среду внесено до 100% печеночного бульона. Полученные данные представлены в табл.1. Как видно из табл.1, оптимальной дозой вносимой β -галактозидазы является 0,097-0,098%, при этом количество жизнеспособных бифидобактерий составляет 10⁹-10¹⁰. При повышении дозы β-галактозидазы в 1,7 раза количество клеток остается почти на том же уровне. Влияние продолжительности обработки лактозы β-галактозидазой в печеночном бульоне на количество жизнеспособных клеток бифидобактерий показано в табл.2. Обработку лактозы β -галактозидазой проводили при температуре 35^oC. Данные табл.2. показывают, что при продолжительности выдержки 1,0-1,5 ч достигается достаточно высокое содержание жизнеспособных клеток. Увеличение продолжительности выдержки не приводит к более высокому эффекту. Таким образом, наиболее благоприятными условиями обработки лактозы в печеночном бульоне являются дозировка β-галактозидазы 0,097-0,098% и продолжительность выдержки 1,0-1,5 ч. Обработка лактозы β-галактозидазой в части печеночного бульона без добавления других компонентов обусловлена тем, что в результате гидролитического действия β-галактозидазы образуются монозы - глюкоза и галактоза, которые являются более реакционноспособными, чем исходная лактоза и могут вступать в реакцию с белками (пептоном) с образованием меланоидинов, что ухудшает состав питательной среды. Поскольку лактоза обладает плохой растворимостью, для более полного и быстрого растворения лактозы была взята 1/2 часть печеночного бульона. Однако дополнительно проведенные исследования показали, что минимальным количеством печеночного бульона, в котором можно растворить лактозу и который можно обработать β-галактозидазой, является 1/10 часть, что позволяет сократить дозу фермента. Растворение лактозы в меньшем количестве вызывает пересыщение раствора и кристаллизацию лактозы. Растворение лактозы в большем количестве бульона поведет к повышению количества вносимого фермента. Поэтому с целью экономии фермента выбрана для проведения ферментации 1/10-1/2 часть печеночного бульона. Кроме того, обработка лактозы β -галактозидазой в части печеночного бульона ускоряет процесс приготовления среды. П р и м е р 1. Берут 1 л печеночного бульона. В 1/2 части бульона растворяют 10 г лактозы, нагревают до 35^oC и вносят 0,97 г β-галактозидазы, проводят выдержку в течение 1,5 ч. В остальной части бульона растворяют, г: пептон 10, хлорид натрия 4, цистин 0,1, агар-агар 0,75. Затем смешивают обе части и доводят рН до 7,4. После этого среду разливают во флаконы по 50-100 мл и стерилизуют при 0,5 атм в течение 30 мин. П р и м е р 2. Берут 1 л печеночного бульона. В 1/2 части бульона растворяют 10 г лактозы, нагревают до 35^oC и вносят 0,98 г β-галактозидазы, проводят выдержку в течение 1 ч. В остальной части бульона растворяют, г: пептон 10, хлорид натрия 4, цистин 0,1, агар-агар 0,75. Затем соединяют обе части и доводят рН до 7,4. После этого среду разливают во флаконы по 50-100 ил и стерилизуют при 0,5 атм в течение 30 мин. П р и м е р 3. Берут 1 л печеночного бульона. В 1/10 части бульона растворяют 10 г лактозы, нагревают до 35^oC и вносят 0,97 г β-галактозидазы выдерживают 1 ч. В остальной части бульона растворяют оставшиеся компоненты, г: пептон 10, хлорид натрия 4, цистин 0,1, агар-агар 0,75. Затем соединяют обе части и доводят рН среды до 7,4. После этого среду разливают во флаконы по 50-100 мл и стерилизуют при 0,5 атм в течение 30 мин.

Формула изобретения

СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БИФИДОБАКТЕРИЙ, предусматривающий смешивание печеночного бульона, пептона, лактозы, хлорида натрия, цистина, агар-агара, отличающийся тем, что, с целью повышения активности питательной среды, в последнюю дополнительно вносят ферментный препарат β - галактозидазы в количестве 0,097 - 0,098% от объема смеси, который предварительно растворяют вместе с лактозой в 1/10 - 1/2 части печеночного бульона, и выдерживают при 30 - 35^oС в течение 1,0 - 1,5 ч, после чего смешивают с оставшимся количеством печеночного бульона и растворенными в нем компонентами, при этом компоненты используют при следующем соотношении, мас.%: Пептон 0,96 - 0,98 Лактоза 0,96 - 0,98 Хлорид натрия 0,37 - 0,39 Цистин 0,008 - 0,01 Агар-агар 0,073 - 0,075 β - Галактозидаза 0,096 - 0,098 Печеночный бульон Остальное

РИСУНКИ

Рисунок 1