Способ прогнозирования рецидивов острого лимфобластного лейкоза

 

Изобретение относится к разделу медицины, в частности гематологии, и касается ранней доморфологической иммунологической диагностики рецидивов острого лимфобластного лейкоза (ОЛЛ). Цель изобретения - повышение точности ранней диагностики рецидива заболевания до появления его клинико-морфологических признаков. Способ выполняется следующим образом: в острой фазе заболевания с помощью панели моноклональных антител (МКА) выявляют дифференцировочные антигены, характерные для лимфобластов каждого больного, в реакции непрямой иммунофлуоресценции в микролуночной модификации разработана панель из МКА к антигенам: Т6, Т9, Т10, CALLA, Ia, ИКО-II . Лейкозные лимфобласты получают из периферической крови или костного мозга больных в острой фазе заболевания. Учет реакции проводят с помощью люминесцентного микроскопа с дополнительным просмотром препаратов в фазовом контрасте. Аналогичным образом с той же панелью МКА проводят исследование антигенов лимфоцитов, выделенных из периферической крови больных в периоде ремиссии. Исследования повторяют регулярно на всем протяжении ремиссии с интервалом 1-4 мес. Появление лимфоцитов, положительно реагирующих хотя бы с одним из применяемых МКА, в количествах, превышающих пределы их нормальных значений, являются предвестником начинающегося рецидива заболевания. Положительный эффект способа заключается в том, что предложенная панель МКА позволяет распознать лейкозные клетки 96% больных и проводить раннюю доморфологическую диагностику рецидивов заболевания в максимальном числе случаев по появлению на зрелых лимфоцитах любого из антигенов, характерных для лейкозных лимфобластов в остром периоде.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) (51)5 Са 01 N 33/53

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ г

1 с

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

IlO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4311926/28-14 (22) 30.09.87 (46) 30.08.90. Бюл. М- 32 (71) Центральный научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови (72) Г.10.Митерев, M.Ñ.Íîâèêîâà, Т.И.Булычева, Е.M.Àáàêóìîâ, В.Г.Исаев и Н,Г.Морозова (53) 615.373 (088.8) (56) Veerman А.З.P., Huismas L.D.R., van zantwijt ICH, 1985, Lenk. Les, 9, и 9, р. 1195 †12. (54) СПОСОБ. ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РЕЦИДИВОВ ОСТРОГО ЛИМФОБЛАСТНОГО ЛЕЙКОЗА (57) Изобретение относится к разделу медицины, в частности гематологии, и касается ранней доморфологической иммунологической диагностики рецидивов острого лимфобластного лейкоза (ОЛЛ). Цель изобретения — повышение точности ранней диагностики рецидива заболевания до .появления его клиникоморфологических признаков. Способ выполняется следующим образом. В острой фазе заболевания с помощью панели моноклональных антител (МКА) выявляют дифференцировочные антиге.ны, характерные для лимфобластов каждого больного, в реакции непрямой иммунофлуоресценции в микролуночной моИзобретение относится к разделу медицины, в частности гематологии, и касается вопроса ранней доморфологической иммунологической диагности2 дификации разработана панель из МКА к антигенам: Т6, Т9, Т10, CALLA, Ia, ИКО-11. Лейкозные лимфобласты получают из периферической крови или костного мозга больных в острой фазе заболевания. Учет реакции проводят с помощью люминесцентного микроскопа с дополнительным просмотром препаратов в фазовом контрасте. Аналогичным образом с той же панелью MKA проводят исследование антигенов лимфоцитов, выделенных из периферической крови больных в периоде ремиссии.

Исследования повторяют регулярно на всем протяжении ремиссии с интервалом 1-4 мес ° Появление лимфоцитов, положительно реагирующих хотя бы с @ одним из применяемых MKA в количествах, превышающих пределы ик нормальных значений, являются предвестником начинающегося рецидива заболевания. Положительный эффект способа заключается в том, что предложенная панель МКА позволяет распознать лейкозные клетки 96 больных и проводить О раннюю доморфологическую диагностику рецидивов заболевания в максимальном числе случаев по появлению на зрелых лимфоцитах любого из антигенов, характерных для лейкозных лимфобластов в остром периоде..ки рецидивов острого лимфобластного лейкоза (ОЛЛ).

Цель изобретения — повышение точности ранней диагностики рецидива за1589215 болевяния да появления его клиникоморфолагических признаков.

Способ осуществляют следующим о!>разам, В острой фазе заболевания с помощью разработанной панели МКА выяв- ляют дифференцировочные антигены, характерные для лимфобластов каждо-го больного, в реакции непрямой иммунофлюоресценции. В периоде ремиссии с той же панелью МКА регулярно с интервалом в 1-4 мес проводят исследование марфалагически зрелых лимфацитав периферической крови. Появление лимфоцитав, положительна реагирующих хотя бы с одним из приме.няемых МКА в количествах, превышающих пределы их нормальных значений (М + 36), является предвестником начинающегося рецидива заболевания. !

Исследование антигенав лейкозных лимфобластав проводят в реакции непрямой иммунофлюоресценции в микролуночнай модификации с использованием шести препаратов NKA входящих в разработанную панель. Лейкозные лимфабласты получают после лизирования эритроцитов из 5-10 мл гепаринизированной периферической крови или

1 мл костного мозга, взятых у больных в острой фазе заболевания. Суспензию доводят до концентрации 4

5 « 10 клеток в 1 мл раствора Хэнка и прикрепляют к поверхности стекла

35 микролунок с помощью поли-Ь-лизина „

Клетки обрабатывают сначала указанными препаратами МКМ (по 20 мкл) при

:инкубации в течение 30 мин при 4 С, а затем после двукратного отмывания микролунок раствором Хэнка на клетки наносят ФИТЦ-меченые козьи антите ла против мышиного >=глобулина (па

Г

20 мкл). После инкубации при 4 С в течение 30 мин препараты двукратно оТмывают растворам Хэнка и в микролунки вносят по 5 мкл 50%-ного раствора глицерина. Препараты накрывают покровым стеклом и запаивают.

Учет реакции проводят ня люминесцентном микроскопе с контрольным просмотром клеток в фазовом контрасте. Диффе. ренцировачные антигены лимфобластов определяют по наличию поверхностного свечения на клетках. Аналогичным об55 разом с той же панелью NKA проводят исследование антигенав лимфацитов, выделенных иэ периферической крови больных в периоде ремиссии с помощью градиентного центрифугирования. Исследования повторяют регулярно на всем протяжении ремиссии с интервалам в 1-4 мес, Пример l Бальной Б., 15леч

Диагноз: острый лимфобластный лейказ.

Блястные клетки, выделенные иэ 5 мл гепаринизированной крови в астрам периоде болезни и исследованные с разработанной панелью МКА, содержали антигены Ia, ИК0-11, СА1Л.А, Т10, Т9 (количество антиген положительных клеток составило 91,55, 70,90 и 50% соответственно). Антиген Тб на лимфобластах больного не был выявлен.

В момент констатации полной клиникогематологической ремиссии, достигнутой через 2 мес, количество марфологически зрелых лимфоцитов крови, содержащих антигены Ia, ИК0-11, CALLA, Тб,.Т9, Т10 соответствовало нормальным значениям, Однако через 1 мес в периоде полной клиника-гематологическай ремиссии (при наличии в пунктате костного мозга 3% лимфобластов) при повторном исследовании лимфоцитов крови с той же панелью МКА было обнаружено повышение количества клеток, имеющих антигены ИКО-11 (68%) Т10 (18%) при нормальном количестве лимфацитов, содержащих антигены 1а«

САЕЬА, Тб, Т9. Рецидив болезни был выявлен спустя 1,5 мес при морфалогическом исслецовании пунктата костного мозга (копичество лимфабластов в нем составило 12,5% при последующем неуклонном прогрессировании заболевания) .

Пример 2. Больной Л., 18 лет.

Диагноз: острый лимфобластный лейкоз. Бластные клетки, выделенные иэ

5 мл гепаринизированной крови в остром периоде болезни, при исследовании с разработанной панелью МКА содержали антигены Ia, ИКΠ†i1 (количество антиген-положительных клеток сос тавило 70 и 85% соответственно). Антигены CALI.A, Тб, Т9, Т10 на лимфобластах больного не были выявлены. 1ерез 1 мес после констатации полной клиника-гематологической ремиссии (при наличии в пунктате костнога мозга 4% лимфобластав) при исследовании морфолагически зрелых лимфоцитов крови с той же панелью МКА наряду с нормальным количеством клеток, сод.ржящих антигены Ia, CALLA, Тб, 79 « Т10, выявлялась увеличенная популяция лим1589215 6 ляющем большинстве случаев (у 9бХ больных), левания.

Составитель P.Ãóìåíþê

Редактор Ю.Петрушко Техред M.Äèäûê Корректор Л.Пилипенко

Заказ 2539 Тираж 513 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

1 13035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101 фоцитов, содержащих антиген ИКО-11 (467). Рецидив болезни был выявлен клинико-морфологическими исследованиями через 3 мес (количество бластных клеток в периферической крови

80K).

Указанные примеры показывают, что использование известного способа не позволило бы прогнозировать рецидив заболевания. Таким образом, предлагаемый способ позволяет повысить точность иммунологического прогнозирования рецидивов ОЛЛ до появления его клиника-гематологических признаков за счет использования для диагностики не одного, а нескольких МКА, направленных к различным дифференцировочным антигенам, выявляемым на лейкозных лимфобластах.

Способ может быть применен практически у всех больных ОЛЛ, так как с помощью разработанной панели MKA лейкозные клетки распознают в подавФормула изобретения

Способ прогнозирования рецидивов острого лимфобластного лейкоза путем выявления дифференцировочного антигена с помощью моноклональных антител на лейкозных лимфобластах в острый период и лимфоцитах в период ремиссии и при обнаружении этого антигена в период ремиссии в количествах, превышающих пределы их нормальных значений, прогнозируют рецидив заболевания, отличающийся тем, что, с целью повышения точности прогнозирования, для выявления ан20 тигенов используют комплекс специфических моноклональньтх антител, и при обнаружении одного или нескольких антигенов прогнозируют рецидив забо