Штамм бактерий bacillus liснеnifоrмis-продуцент рестриктазы в @ 49 i
Изобретение относится к биотехнологии и молекулярной биологии и может быть использовано как инструмент для получения фрагментов ДНК: картирования молекул ДНК и конструирования векторных молекул ДНК. Цель изобретения - выявление штамма Bacillus llchenlformls ВКПМ В- 4268 (49), продуцирующего рестриктазу ВИ 49 I, способную узнавать на двухнитевой ДНК последовательность нуклеотидов 5... GGTC ТС... 3. Штамм выделен из почвы. Выход фермента 1000 ед/r биомассы.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4499064/13 (22) 27.10.88 (46) 30.06.91. Бюл. М 24 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт прикладной микробиологии и Институт микробиологии и вирусологии АН
УССР (72) В.М. Крамаров, В.В. Смолянинов, М.И. Матвиенко, В.В. Смирнов, С,P. Резник и И.Б. Сорокулова (53) 577.15 (088.8) (56) ЯЛ. Roberts. Restriction enzymes ап4
their Isoshlsomers."Nucl. Acids Rev" ч. 16, sequence Suppl р 271-313, 1988.
Изобретение относится к биотехнологии и молекулярной биологии и может быть использовано KGK инструмент для получения фрагментов ДНК, картирования молекул ДНК и конструирования векторных молекул ДНК.
Цель изобретения — выявление штамма Bacillus lichenlformls ВКПМ В-4268 (49) продуцирующего рестриктазу Bli 49 I, способную узнавать на двухнитевой
ДНК последовательность нуклеотидов 5 ...GGTCTC...3 .
Штамм выделен из почвы и характеризуется следующими признаками. . Морфологические признаки — прямые палочки, размер клеток 18 часовой культуры
1,5х0,6 мкм, Клетки располагаются одиночно, либо цепочкой. Эллипсовидные споры располагаются в клетке субтерминально.
„„ЯЦ „„1659479 А1.. (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ BACILLUS
LlCHENlFORMIS — ПРОДУЦЕНТ РЕСТРИКТАЗЫ Bli 49!. (57) Изобретение относится к биотехнологии и молекулярной биологии и может быть использовано как инструмент для получения фрагментов ДНК: картирования молекул ДНК и конструирования векторных молекул ДНК. Цель изобретения — выявление штамма Вас!Поз llcheniformis ВКПМ В4268 (49), продуцирующего рестриктазу Bli
49 1, способную узнавать на двухнитевой
ДНК последовательность нуклеотидов 5 ...
GGTC ТС... 3 . Штамм выделен из почвы.
Выход фермента 1000 ед/г биомассы.
Клетки при спорообразовании не раздуваются. Культуральные признаки — на твердом 4 мясо-пептонном агаре через 18 ч роста при ф
370С образуются колонии с матовой шероховатой поверхностью серовато-белого цвета, врастающие в агар, Образование спор начинается через 48-72 ч при выращивании на мясо-пептонном агаре при 37 С, 4
После роста на глюкозном агаре в про- О топлазме не обнаруживаются глобулы. Рост на жидкой питательной среде характеризуется равномерным помутнением. ЮВЗВЙ
Физиолого-биологические признаки— грамположительные аэробные спорообразующие палочки. Продуцируют каталазу.
Культура ферментирует глюкозу, арабинозу, маннит с образованием кислоты, ксилозу не использует, Утилизирует цитрат и пропионат, гидролизует крахмал, редуцирует нит1659479
Составитель И. Привалова
Редактор Л. Герасимова Техред M.Ìîðãeíòàë Корректор Т.Колб.
Заказ 1821 Тираж 378. Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул,Гагарина, 101 раты, в аэробных условиях из нитратов образует газ, дает положительную реакцию
Фогес-Проскацэра. Растет s анаэробных условиях, не продуцирует аргинигидролазу, не гидролизует мочевину.
Пример, Штамм В, licheniformis 49 хранится в пробирках на агаризованной среде под вазелиновым маслом. Для ожив ления культуру пересевают на скошенный мясо-пептонный агар и инкубируют в термостате при 37 С в течение 30 ч. Для полуиения биомассы культуру засевают в колбу объемом 3 л, содержащую 700 мл среды, содержащую, г/л: дрожжевой экстракт 5; триптон 5; натрий хлористый 5, и инкубируют в условиях качалки до средней логариф мической фазы, затем. клетки отделяют центрифугированием при 10000 g. Выход сырой биомассы 5 г/л, 0,5 г клеток суспендируют в 0,5 мл буфера А (0,2 M NaCI, 0,01 M К-фасфат, рН
7,0 2 мМ дитиотрейтол, 0,1 мМ ЭДТА) разрушают ультразвуком при охлаждении льдом, .-клеточные стенки осаждают при 40000 g.
Надосадочную жидкость хроматографуют на колонке 1,5х30 см с Toyopearl HW-55, уравновешенной в том же буфере со скоростью 20 мл/ч, фракции 0,8 мл. Активность рестриктазы определяют по гидролизу ДНК фага il/ продукты реакции анализируют
5 электрофорезом в геле 0,8 агарозы. Фракции, содержащие рестриктазу, объединяют, диализуют против буфера А, содержащего
50 /О глицерин и хранят при -20OC. Выход фермента 1 тыс. ед/г биомассы.
10 Специфичность рестриктазы 8li 491 определяли по гидролиэу ею различных ДН К с известной первичной структурой (ДНК фагов iL, М13фХ174, плазмиды р BR322).
Установлено физическим картировани15 ем, что рестриктаза Вй 49 l узнает и гидролизует ДНК р BR322 в точках с координатами 3435 п,о., ДНК фага il в точках с координатами 11424, 42715 п.о, ДНК фХ174 и М13 не гидролиэуются. Анализ этих
20 данных приводит к заключению, что рестриктаза Bli 491 узнает последовательность нуклеотидов GGTCTC, Формула изобретения
25 Штамм бактерий Bacillus lichenlformis
В КПМ В-4268- продуцент рестриктазы ВИ 491,
