Способ диагностики гиперфибринолиза

 

Изобретение относится облас-и медицины , а именно к коагулологии. изобретения является повышение специфичности способа диагностики гигерфибоиколиза . Для этого определяют количество форменных элементов, выделившихся из уже сформированного ретрагированкого сгустка, для чего после образования и отслаизания сгустка от стенок пробирки его перенося; в аутслогичнуго сыворотку, не содержащую форменных элементов, и после инкубации сгустка определяют количество выделившихся из него форменных зяементор, в чачест.:е контроля используют пробу хрови, в которой фмбринолитическая активность инггбирована Ј-зминокапроновой кислотой рассчитывают показатель спонтгнп огофибринолиза и, если этот показатель превышает средней максимальный для здоровых доноров 3,7/, дмлгносцируют гиперфибриколиз. 1 табл. СП с

союз соВетских . СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ИХ, 1675777 А1 (5 ) 5 G 01 М 33/8о

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИ1ЕТ

AO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ--- -". ".." (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГИПЕРФИБРИНОЛИЗА (57) Изобретение относится к области медицины, а именно к коагулологии. Целью изобретения является повышение специфичности способа диагностики гиперфибК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4647064/14 (22) 02.01 89 (46) 07.09.91. Бюл. N. 33 (71) Белорусский государственный инс--и ут усовершенствования врачей (72) Е,П.Иванов, Д.Г.Цвирко и В.E.Иванов (53) 612 115(088.8) (56) Котовщикова M.À., Кузник Б,И, Простой метод определения естественного лизиса и ретракции кровяного сгустка. — Лзб, дело, 1962, N. 5, с.6-9.

Изобретение относится к медицине, а именно к гемокоагулологии, может быть использованодля диагностики гиперфибринолиза.

Целью изобретения является повышение специфичности способа.

Способ осуществляется следующим образом.

Определяют степень естественного лизиса по количеству выделяющихся форменных элементов (Рз фракции), образование которой обусловлено плазминовым разрушением сгустка. Для этого кровь для исследования набирают в три силиконированные центрифужные пробирки: сухую 2 мл, опытную (содержащую 0,1 мл 0,15 М NaCI) и контоольную (содержащую по 0,1 мл 6 -ного раствора E -АКК-E-аминокапроновой кислооинолиэа. Для этого определяют количество форменных элементов, выделившихся иэ уже сформированного ретрагированного сгустка. рля чего после образования и отслаивания сгустка от стенок пробирки его перенося. в аутологичную сыворотку, не содержащую форменных элементов, и после инкубации сгустка определяют количество выде ;ившихся иэ него форменных элементеF., в качест..е контроля испОльзуют пробу кров«, в которой фибринолитическая активность инг. .бирована г -аминокапроновой кислотой, рассчитывают показатель спонтаH aro фибринолиза и, если этот показатель превышает средний максимальный для здоровых доноров 3,77, диагносцируют гиперфибринолиз. 1 табл. ты в 0,15 M раствора NaCl Удобно набирать

4 мл крови в сухую силиконированную пробирку, а затем с помощью силиконированной или пластиковой пипетки переносить по

1 мл в опытную и контрольную пробирки, Параллельно приблизительно 0,05 мл крови для определения гематокрита вносят в пробирку с капиллярами. Опытную и контрольную пробирки закрывают пробками, погружая якорь в кровь.. Все три пробирки помещают в водяную баню (37 С). Наблюдают момент образования сгустка и момент начал- ретракций (сгусток отслаивается от стенки пробирки). В этот момент (обычно не более 20 мин после образования сгустка) пробки осторожно поворачивают, не вынимая их из пробирок, для полного отделения сгустков от стенок. Пробирки помещают в

I 675777

СФ х 100, баню еще на 10 мин. Сгусток в пробирке беэ якоря (сухая силиконировзнная пробирка) отделяют от стенок стеклянной палочкой, Пробирку центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин. Отделившуюся сыворотку по О," мл переносят в две центрифужные пробирки, обозначаемые также как опытная .;, контрольная, причем в последнюю предварительно вносят 3 мг :, -АКК. Сфсрмировавшиеся сгустки на якорях осторожна извлекают из пробирок и, промыв их в стакане с 50 мл 0,15 Vl раствора MERCI (сначала опытный, затем контрольный), переносят в соответствующие пробирки, содержа цие сыворотку, После этого сгустки инкубируют при 37 С да появления види 4blx признаков лизиса сгустка в опытной пробирке, на не более 1 ч. Затем их извлекают, а пробирки с сывороткой и взвешенными в ней форменными элементами (Рз) центрифугируют 2 мин при

3000 об/мин, удаляют из каждой па 0,4 мл сыворотки, измеряют пипеткой оставшийся объем сыворотки и форменных элементов, ресуспендируют форменные элементы в сыворотке и заполняют этой взвесью гематокритные капилляры. Капилляры центрифугируют и определяют процентное соотнашенле сНваротки и форменных элементов, Показатель спонтаннага фибринолиза (СФ, %) вычисля от по формуле \

«олыт, гконтр. h «контр.

)h где,, F — суммарный обьем сыворотки и форменных элементов соответственна в опытной и контрогьнай пробирках,мл;

h« — процентная концентрация форменных элементов ва взвеси соответственно для опытной и контрольной пробирок, %;

Н« — гематокритный показатель исследуемой крови, %.

Пример, Больной С-О., д-з; эритремия, ст. ПА. Кровь из вены взята широкой иглой в сухую силиканирсванную центрифужную пробирку в количестве 5 мл. Па 1 мл

Kpo8vl перенесена в опытную и контрольную пробирки. Через 20 мин инкубзции образовавшиеся сгустки атслаиллсь от стенок llpoбирок, поворотам пробок ани полностью отделены ат стекла и через 10 мин перенесены соответственно в опытную и контрольную пробирки с аутасывароткай. После, ч инкубации, F в опытной пробирке (после удаления 0,4 мл сыворотки) 0,245 мл, в ка:- тральнай 0,215 мл, Ь«опытн. — 32,03%, Ь«контг,, = 19,10%, Н« =

670 СФ = 558%, и0

Описанным способом исследовали естественный лизис сгустков крови 36 здоровь,х доноров. Обнаружено отсутствие достоверных различий между степенью разрушения сгустков, определяемой по величине Рз, в опытных и контрольных пробах крови, что ограничивает достоверные диагностические вазможности предлагаемого способа лишь состояниями гиперфибринолиза (повышения фибринолитическай актлвности крови).

Гиперфибринолиз диагностируется в том случае, если показатель СФ исследуемой крови г|ревышает максимальное ега значение для крови здоровых доноров:

3,77% (X + 3,4 о, Р < 0,001}.

Показатели фибриналитическай активности у гематолагических больных приведены в таблице (диагноз: ХЛЛ вЂ” хронический лимфалейказ, ХМЛ вЂ” хронический миелолейкоз, ОЛ вЂ” острый лейказ, МБ — миеломная болезнь, Зр — эритремия, ГВ геморрагический васкулит, Сч — рак, Т— тромбофилия).

Из приведенных данных видно, чта в абсолютном большинстве определений величлна третьей фракции (фарменные элементы ыделившиеся из сгустка) при полном выключении фибринализа с-аминакапранавай кислотой уменьшается весьма незначительна и составляет ат 20,4 до

98,6% ат величины третьей фракции в ингактной крови при определении известным способом, В среднем эта величина для 76 оп Редел ений составл я ет 64,3+

+. 2,89% (X Sx). Эта даказыва ет весьма низкую специфичность известного способа в отношении диагностики активации фибринализа, что и отражена в литературе. Известный способ регистрирует не столько процес -, фибри налитическога разрушения сгустка крови, сколько те механизмы, не относящиеся х фибринолитическсй системе, которые препятствуют включению форменных элементов в этот сгусток. Предлагаемый способ позволяет учитывать только фибринолитическа разрушение сгустка крови, диагностировать истинную активацию фибринолиза.

Предлагаемь и способ имеет преимущество благодаря высокой специфичности, простате и доступности и может быть приманим в клинической лабораторной практике для оценхл функции плазминовай системы.

Формула изобретения

Способ диагностики гиперфибринолиза путем забора цельной крови, образования сгустка, ретракции ега, инкубации In vt«m, 1675777 используют пробу крови, в которой фибринолитическая активность ингибирована Eамичокапроновой кислотой, рассчитывают показатель спонт; нного фибринолиза и, 5 если этот показат ль превышает средний максимальный уровень для здоровых доноров, .диагносцируют гиперфибринолиз. определения количества свободных форменных элементов, отличающийся тем, что, с целью повышения специфичности способа, уже сформировавшийся ретрагированный сгусток инкубируют в аутологической сыворотке, не содержащей форменных элементов, при этом, в качестве контроля

Диагноз ФА (иэвест**Рзнепл., ФА эаявл. (предлагаемый способ

Ф.И.О. больных

Опыт Неплазм. разруш ный способ) ХЛЛ

ОЛ

Т

Эр

МБ

ОЛ

Ф-к

К-м

А-с

Х-в

M-ва

+ Степень разрушения сгустка крови с е-АКК известным способом.

** Доля фракции 3, образующейся в присутствии я -АКК в фракции 3 интактной крови известным способом.

Составитель Т. Ковалева

Техред М.Моргентал Корректор О. Кундрик

Редактор M. Бланар

Заказ 2998 Тираж 387 Подписное.

ВНИИПИ Государственного комитета rio изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

2

4

6

8

11

12

13

14

16

17

18

19

21

22

23

24

26

27

Р-ва

Л-ко

K-в

Я-r

R-г

Л-й

Х-г

Х-"

Н-я

П-а

rl- 8 .

Ж-о

fl-й

Б-к

Lll-т

Т-в

ХЛЛ

МБ

ЮЛ

ХЛЛ

ХЛЛ

ХМЛ

ОЛ

ОЛ

ГВ

ХМЛ

ХМЛ

ХЛЛ

ХМЛ

ГВ

ХЛЛ

Сч

5.89

27,35

26,02

17,37

11,78

° 9,62

5,90

14,77

11,9 4

3,61

6,28

7,23

5,77

9,97

2,76

72,21

43,43

33,74

111,50

23,79

21,01

11;04

18,26

7,58

33,21

17,11

7,11

7,79

5,81

8,92

16,18

12,58

6,24

7,41

3.,30

7,25

11,49

2,68

6,02

6.71 . 2,86

9.82

1 Я

"с6 18

25,44

18,44

34,48

20,11

1 i,65

9,89

13,06

6,38

26,06

3,49

5,97

5,04

98,6

32,6

62,2

72,4

52,9

77,0

55,9

49,1

96,2

74

95,8

92,8

49,0

Q8,5

68,5

50,0

58,0

54,6

30,9

84,5

55,4

89,6

71,5

84,2

78,5

20,4

83,9

64,7

0,92

2,91

4,36

2,99

1,78

1,57

t,09

1,72

0,73

0,37

0,08

0,08

0,06

О

26,13

3,00

76,27

1,09

О

0,52

1,14

0,03.

0,96

0,79

0,87