Способ определения аденозинтрифосфорной и 2,3- дифосфоглицериновой кислот в крови человека

 

Изобретение относится к области медицины и биологии, а именно к области фотометрических лабораторно-клинических исследований крови человека, и может применяться для диагностики различных заболеваний, при которых изменяются концентрации АТФ и 2,3-дифосфоглицериновой кислот в эритроцитах. Целью изобретения является упрощение способа определения. Для этого образцы крови обрабатывают при комнатной температуре, а пробу крови перед добавлением трихлоруксусной кислоты инкубируют в физиологическом растворе в течение 24 ч при 37°С с последующим определением 2,3-дифосфоглицериновой кислоты. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛ ИСТИЧ Е СКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 G 01 N 33/50

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4460129/14 (22) 14.07.88 (46) 30.05.92. Бюл. N 20 (71) Институт геронтологии АМН СССР (72) А.В.Писарук (53) 616.155. 1-088.9,939.633,2-074(088.8) (56) Виноградова И.Л., Багрянцева С.Ю., Дервиз Г.В. Метод одновременного определения 2,3- ДФГ и АТФ в эритроцитах.—

Лабораторное дело, ¹ 7, с. 424 — 426. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АДЕНОЗИНТРИФОСФОРНОЙ И 2,3-ДИФОСФОГЛИЦЕРИНОВОЙ КИСЛОТ В КРОВИ ЧЕЛОВЕКА (57) Изобретение относится к области медицины и биологии, а именно к области фотоИзобретение относится к медицине и биологии, а именно к фотометрическим лабораторно-клиническим исследованиям крови человека, и может применяться для диагностики различных заболеваний, при которых изменяются концентрации АТФ и

2,3-дифосфоглицерата (2,3-ДФГ) в эритроцитах.

Целью изобретения является упрощение способа.

Способ осуществляется следующим образом.

Из пальца обследуемого берут 0,1 мл крови в пробирку с 0 5 мл 0,9%-ного раствора хлорида натрия (пробирка N 1) и 0,1 мл крови в пробирку с 0,9 мл 5%-ной трихлоруксусной кислоты (пробирка %2). Пробирку N

1 ставят в термостат на 24 ч при 37 С, После инкубации добавляют в нее 0,4 мл 10%-ной трихлоруксусной кислоты, тщательно перемешивают и центрифугируют вместе с пробиркой ¹ 2 15 мин при 3 тыс. оборотах в мин. Отбирают 0,2 мл супернатанта из про„„Я „„1 737337 А1 метрических лабораторно-клинических исследований крови человека, и может применяться для диагностики различных заболеваний, при которых изменяются концентрации АТФ и 2,3-дифосфоглицериновой кислот в эритроцитах. Целью изобретения является упрощение способа определения. Для этого образцы крови обрабатывают при комнатной температуре, а пробу крови перед добавлением трихлоруксусной кислоты инкубируют в физиологическом растворе в течение 24 ч при 37 С с последующим определением 2,3-дифосфоглицериновой кислоты. 1 табл. бирки № 2 в пробирку с 0,2 мл 2 н НС! (пробирка ¹ 3) и кипятят ее на водяной бане

7 мин с целью гидролиза АТФ до АМФ.

Затем нейтрализуют содержимое пробирки

N. 3 добавлением в нее 0,2 мл 2 н раствора

NAOH. Определяют неорганический фосфор в супернатанте из каждой пробирки.

Для этого к 0,5 мл супернатанта из пробирок № 2 и ¹ 3 (к 0,25 мл супернатанта из пробирки № 1) добавляют 1 мл 5%-ного раствора молибдата аммония на 5 н серной кислоте и 1 мл 1%-ного раствора аскорбиновой кислоты на 0,1 н соляной кислоте. Через

15 мин измеряют оптические плотности всех проб на фотоэлектроколориметре при длине волны 670 нм против контроля на реактивы. Концентрации фосфора во всех пробах рассчитывают по калибровочной кривой и выражают в ммолях на литр.

Расчет концентраций АТФ и 2,3-ДФГ (ммол ь/л крови):

АТФ = (30 Рз — 10 Р2)/2;

2,3-ДФ Г=(20 P1 — 30Рз)/2, 1737337

Как видно из полученных данных, различия между средними значениями показателей, определенных по предложенному способу и по прототипу, несущественны (р>

0,1). Коэффициенты корреляции между значениями показателей, определенными разными методами, составили для АТФ 0,87 (p(0,01) и для 2,3-ДФГ 0,81 (р < 0,01), что свидетельствует о хорошем совпадении результатов, полученных по предложенному способу и прототипу.

35

Составитель Н.Маркова

Редактор М,Циткина Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор Л.Бескид

Заказ 1887 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 где P ), Ðã, Рз — концентрации фосфора в супернатанте из пробирок N.1, М2, МЗ,. соответственно, Определив гематокрит, можно рассчитать концентрацию АТФ и 2,3 - ДФГ в эритроцитах путем деления полученных значений их концентраций в крови на величину гематокрита в системе СИ.

Пример. У практически здоровых людей (20 человек) определены концентрации АТФ и 2 3-ДФГ в эритроцитах по предл ожен ному способу и прототипу.

Полученные данные представлены в таблице.

Предложенный способ позволяет определять концентрации АТФ и 2,3-ДФГ в эритроцитах из небольшого объема крови, взятой из пальца. Способ отличается от ана5 логичных упрощением методики, снижением ее трудоемкости без потери точности и может быть реализован в любой клинической лаборатории для диагностики различных заболеваний.

10 Формула изобретения

Способ определения аденозинтрифосфорной и 2,3-дифосфоглицериновой кислот в крови человека путем прибавления к npobe крови трихлоруксусной кислоты, переме15 шивания, добавления к надосадочной жидкости 2 N HCI, инкубации в течение 7 мин на кипящей водяной бане, нейтрализации с последующим определением неорганического фосфора для расчета концентраций

20 аденозинтрифосфорной и 2,3-дифосфоглицериновой кислот, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, вторую пробу крови инкубируют в термостате в течение 24 ч при 37 С для дефосфорилирова25 ния органических фосфатов под действием собственных ферментов эритроцитов,