Способ определения глюкозы в крови

 

Использование: медицина, биология для количественного определения глюкозы в крови. Цель изобретения - повышение точности способа при длительном хранении проб. К пробам крови добавляют предварительно 0,2%-ный водный раствор 9,10-бисметилтрифенилфосфонийантраценхлорида в соотношении проба:реактив 1:10,3%-ный раствор трихлоруксусной кислоты, центрифугируют с последующим добавлением к надосадочной жидкости орто-толуидиноЁого реактива, перемешиванием, нагреванием инкубационной смеси на кипящей водяной бане в течение 10 мин. охлаждением и колориметрированием в кювете с толщиной слоя 10 мм при 590-650 нм.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (sa>s 6 01 М 33/66

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Способ осуществляют следующим образом.

В три пробирки вносят по 1 мл 0,2%-но. го водного раствора ДФА. Далее в опытную пробирку приливают 0,1 мл крови, в стандартную 0,1 мл стандартного раствора глюкозы, в контрольную 0,1 мл дистиллированной воды, Пробирки закрывают пробками и хранят в холодильнике при 2 — 8 С, В последующие 60 дней аналогично подготовленные пробы накапливат в холодильнике. На 60-й день или в любой удобный для pàáoòíèêà день, но не позже 60-го дня,. определяют количество глюкозы во всех накопившихся пробах.

Например. B три пробирки вносят по

1 мл 0,2%-ного водного раствора ДФА. Далее в опытную пробирку приливают 0,1 мл крови, в стандартную 0.1 мл стандартного раствора глюкозы, в контрольную 0,1 мл дистиллированной воды. Пробирки закрывают пробками и помещают на хранение в (21) 4841180/14 (22) 22.05,90 (46) 07.10.92. Бюл. ¹ 37 (71) Черновицкий государственный университет (72) Г.М.Ярмольчук, И.В.Мегера, В.М.Горшинский и Н.В.Смутняк (56) Инструкция к набору химических реактивов для определения глюкозы в биологических жидкостях О-толуидиновым методом. Утверждена М3 СССР ¹ 290 от

11.04;92. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛЮКОЗЫ В

КРОВИ

Изобретение относится к биохимии, а именно к лабораторной практике для количественного определения содержания глюкозы в биологических пробах.

Известен способ количественного определения глюкозы в биологических пробах (О.Д.Кушманова, Г.M.Èâ÷åíêî. Руководство к лабораторным занятиям по биологической химии. Москва, Медицина, 1983), недостатком которого является необходимость завершить анализ в день забора биологических проб, поэтому данный способ не может быть использован для отсрочного определения глюкозы в биологических пробах, Цель изобретения — повышение точности способа при длительном хранении био-, логических проб, Это достигается за счет стабилизации глюкозы в биологических пробах добавлением к ним 0,2%-ных водного раствора 9,10бисметилтрифенилфосфонийантраценхло рида (ДФА).

5U„„1767436 А1 (57) Использование: медицина, биология для количественного определения глюкозы в крови. Цель изобретения — повышение точности способа при длительном хранении проб, К пробам крови добавляют предварительно 0 2%-ный водный раствор 9,10-бисметилтрифенилфосфонийантраценхлорида в соотношении проба:реактив 1:10,3%-ный раствор трихлоруксусной кислоты; центрифугируют с последующим добавлением к надосадочной жидкости орто-толуидинового реактива, перемешиванием, нагреванием инкубационной смеси на кипящей водяной бане в течение 10 мин. охлаждением и колориметрированием в кювете с толщиной слоя 10 мм при 590 — 650 нм, 1767436

Таблица!

Мслользованная концентрацмя ДФА в 2

0 0012 0015 002 0025 005 0075 01 015 02 025 03

До прибавления раствора ДФА т.е. по способу-прототипу

5,48

15 имн хранения с раствором llCA

5,41 556 527 558 529

5 суток хранения с раствором ДФА

2,95 3,44 3,86 3,92 4,56

10 суток хранения с раствором ДФА

0,71 0,90 0,98 1,82 4,48

20 суток хранения с раствором ДФА

+ь+ аьь +++ 1,44 4,30

30 суток хранения с раствором ДФА

+++ +ьь чь+ 1,36 4,02

40 суток хранения с раствором ДФА

+++ +++ ч++ 1,31 3,98

50 суток хранения с раствором ДФА

+++ +++ +++ 1,22 3,98

60 суток хранения с раствором ДФА еьь +++ ьн 0,96 3,96

75 суток хранения с раствором AOA

+++ +++ +++ 0 ° 67 3,81

5,35 5,67

5,44 5,41 5,59 5,36 5,41

1,66 2,44

0,34 0,66

5,37 5,44 5,41 5,70 5,35

„74 5,60 5,29 5,61 5,64

5,68 5,52 5 44 5,70 5,68

5,74 5,24 5,36 5,34 5,41

5,50 5,30 5,22 5,60 5,58

5,27 5,25 5,49 5,70 5,44

5,50 5,71 5,66 5,31 5,52

5,54 5,64 5,58 5,49 5,68

+++ +++

П р и и е ч а н и е. + - вместо ДФА к биологическим пробан приливали 1 мп дистиллированной воды ы хранили их 75 суток

+ь - подчеркнуты показатели проб, в которых содерханне глюкозы уменьюнлось ° процессе хранения по сравнению с результатои, полученным ло способу-прототипу 5,48 им/л

+++ llpo6hl разломились холодильник при 2 — 8 С. В последующие 60 дней аналогично подготовленные пробы накапливают в холодильнике. На 60-й или в любой удобный для работника день, но не позже,60-ro дня, определяют количество глюкозы во всех накопившихся пробах, для чего добавляют с ним по 1 мл 10%-ного раствора трихлоруксусной кислоты, центрифугирунй, переносят по 1;5 мл центрифугата в химические пробирки, приливают по

4 мл орто-толуидинового 3еактива, перемешивают содержимое, помещают на 10 мин в кипящую водяную баню, охлаждают до комнатной температуры и колориметрируют опытную и стандартную пробы против контроля в кюветах с толщиной рабочего слоя 10 мм при длине световой волны 590650 нм. Расчет проводят по известной формуле, Проведенные исследования показали, что ДФА в концентрациях 0,1 — 0 3 обеспечивает сохранность глюкозы в пробах сыворотки крови неизменной на протяжении 75 суток (табл. 1). В табл. 2 представлены результаты содержания глюкозы в крови, которые хранились на протяжении 1-60 дней после добавления к ним 0,2% раствора

ДФА в сравнении б результатами глюкозы в аналогичных пробах, хранившихся без

ДФА. Как видно из этих данных этот показатель значительно отличается начиная с

3-го дня хранения.

Средняя относительная ошибка заявляемого способа определения глюкозы, вычисленная из 200 определений исследуемого показателя (по 100 определений в крови и в сыворотке крови) в сроки, указанные в табл. 2 равнялась 4,57%.

5 В табл. 3 приведены определения глюкозы в сыворотке крови доноров, у которых наблюдались минимальные, средние и максимальные отклонения от величин полученных по способу-прототипу в день забора

10 крови, которые показывают, что ни одна иэ величин полученных по заявляемому способу, не отличается от величин полученных по способу-прототипу в день забора крови, которые показывают, что ни одна из величин

15 полученных по заявляемому способу, не отличается от величин полученных по способу-прототипу более чем на 5 .

Формула изобретения

Способ определения глюкозы в крови, 20 включающий добавление к пробе 3 -ного раствора трихлоруксусной кислоты, центрифугирование с последующим добавлением к надосадочной жидкости орто-толуидинового реактива, перемешиванием, нагрева25 нием инкубационной смеси на кипящей водяной бане в течение 10 мин, охлаждением и колориметрированием в кювете с толщиной слоя 10 мм при 590 — 650 нм, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью повышения

30 точности способа за счет стабилизации глюкозы, к пробе предварительно добавляют

0,2 -ный водный раствор 9,10-бисметилтрифенилфосфонийантрацен хлорид в соотношении проба: реактив 1:10, 1767436

Таблица 2

Исмльзованньй способ определения глюкозы хранения биологических мидкостей а сутках

1 1 I (!

Сроки

3 5

45 60 и

Сыворотка крови

«,14+0,21 4,0720,18 4,3О20,22 4,07+0,21 3,95+O,17 3,98+O,17 4,2=0,22 4,1620,22 4,25+0,16 4,03+ 0,21

2,2

2,2

3,4

4,4

3 2

1,5

112

3,9

1,2

0,5

Сыворотка хранивваяся без ДФА

Сыворотки разммились

3,0120,20 0,5320,03

87 1

26,9

Кровь

По заявляеиому способу

3,26+0,17 3,0900,14 3 ° 3440,19 3,1340,17 3,21+0,ОЭ 3,18+0,14 3,32з0,16 3,3920,17 3,31+0,15 3 1940 24

2 отличия от показателей,полученных по способу-прототипу 0,9 (3, 2330, 23 им/л) 1,2

4,6

3,4

4,9

2,5

0,6

4,3

1,5

3,1 содеркание глюкозы в пробах уненьюипось из-за продолкительного хранения их, содериание глюкозы в сыворотке крови по способу-прототипу, равнялось 4,12 0,21 мм/л и определялось в день забора chlBopoTKN у доноров содермание глюкозы в цельной крови по способу"прототипу равнялось 3,23 0,23 мм/л и определялось в день забора крови у донора средняя величина 2 отличия по данной горизонтали 2,372 средняя величина 4 отличия по данной горизонтелн 2,702 количество доноров, в крови которых определялось содерявние глюкозм, средняя величина, полученная путем статистической обработки. средняя оюибка средней величины

Примечание, + н н+

++++

+н++ и

8ю

Таблица 3

Донор Содерив- Сроки хранения сыворотки в сутках Среднее лрототи" 1 3 5 7 10 15 20 30 45 60 ние,Ф

Характер отклонений минимальные Г,o,È. 4,29

1,41

3,90

Средние П.П.А.

1,81

3,98 максимальные C.À.О, 4,40

П р и и е ч а н и е. + - a строке указано содерыание глюкозы в ми/л н - в строке указано отклонение в процентах от показателя, полученного по способу-прототипу

Составитель Г. Ярмольчук

Техред М,Моргентал Корректор М. Ткаь(Редактор С. Кулакова

Заказ 3546 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, /К-35, Раушская наб„4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

По заявляемоиу способу

4 отличию от показателей, полученных по способупрототипу (4,12 +

0,21 мм/л) 2 отличия от показателей, полученных по способупрототипу (4, I22

0 2l ми/л) 4,21 4,35

I 9 1,4

3,98 4,04

2,1н 3,6

3,79 4,14

„,8++ 4,0

4,40 4,28

2,6 0,2

3,80 3,85

2,6 1,3

4,17 4,15

4,9 4,3

4,18 4,27 4,35

2,6 0,5 1,4

4,04 3,91 3,96

3,6 0,3 1,5

4,10 3,80 3,79

3,0 4,5 4,8

4,26

0,7

4,00

2,6

4,17

4,9

4а39 4,31

2,3 0,5

3,90 3,88

О 0,5

3 81 4,15

4,3 4,5