Способ определения антиоксидантной активности лекарственных веществ

 

Использование: медицина, фармакология . Сущность изобретения: оценивают влияние лекарственных веществ на светосумму сенсибилизированной люминолом хемилюминесценции, сопровождающую свободнорадикальные реакции, при каталитическом разложении перекиси водорода 60 мкМ гемина в 60% водно-диметилсульфоксидном растворе. Способ позволяет оценивать антиоксидантную активность любого лекарственного вещества.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПЛТЕНТ ССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4857967/14 (22) 08.08.90 (46) 30.11.92. Бюл. N 44 (71) Минский государственный медицинский институт и белорусский государственный университет им. B.È.Ëåíèíà (72) С.Д.Сперанский, Н.Ф.Сорока и Е.Ч.Сперанская (56) Биофизика 1971, т. 16, вы и. 2, с. 201-205. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ВЕЩЕСТВ

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии.

Наиболее близким по техническому решению к изобретению является способ определения природных антиоксидантов и синтетических ингибиторов методом хемилюминесценции.

Свечение возникает при инициировании окисления зтилбензола очищенным кислородом, инициатор дициклогексилпероксидикарбонат, Для усиления свечения в систему добавляется люминофор — 9,10дибромантрацен. Природные антиоксиданты, содержащиеся в липидных вытяжках, добавляются в систему в концентрации 0,12 мг/мл, а синтетические (ионол) в концентрации 5.10 — 50 10 ммоль/мл.

Однако такой способ имеет ряд существенных недостатков: он сложен в исполнении, т.к. для его реализации необходимо использование очищенного кислорода; способ не позволяет исследовать лекарственные вещества, трудно- или нерастворимые в этилбензоле, что ограничивает возможности его применения.

1778689 А1 (5()5 G 01 N 33/15 (57) Использование: медицина, фармакология. Сущность изобретения: оценивают влияние лекарственных веществ на светосумму сенсибилизированной tlloMMHoRQM хемилюминесценции, сопровождающую свободнорадикальные реакции, при каталитическом разложении перекиси водорода 60 мкМ гемина в 60% водно-диметилсульфоксидном растворе. Способ позволяет оценивать антиоксидантную активность любого лекарственного вещества.

Целью изобретения является упрощение способа и расширение круга анализируемых объектов.

Изобретение осуществляется следующим образом.

В кювету хемилюминометра добавляют

4 мл раствора люминола 30 мкМ в смеси диметилсульфоксида (ДМСО) и К -фосфатного буфера 0,005 M рН 7,6 в соотношении

60:40, 0,2 мл 100 мкМ раствора перекиси водорода, 0,2 мл 60 мкМ раствора гемина и

0,1 мл раствора лекарственного вещества в смеси ДМСО-фосфатный буфер. В контрольную пробу вместо 0,1 мл раствора лекарственного вещества добавляют 0,1 мл смеси

ДМСО-фосфатный буфер без исследуемого вещества. Затем измеряют светосумму хемилюминесценции исследуемой пробы за 5 мин при постоянной температуре. Антиоксидантную активность лекарственного вещества рассчитывают как отношение величины светосуммы хемилюминесценции пюминола и пробе, содержащей исследуемое лекарственное вещество, к светосумме хемилюминесценции контрольной пробы по формуле

А(%) „.100%

1778689

Следовательно, ортофен в данной концентрации не обладает антиоксидантной активностью.

Г! р и м е р 2. Определение антиоксидантной активности бутадиона.

Составитель Е. Сперанская

Редактор Т. Полионова Техред M.Ìoðãåíòàë Корректор M. Керецман

Заказ 4190 Тираж Подписное ..

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 где . — светосумма хемилюминесценции в присутствии исследуемого вещества, а„ вЂ” светосумма хемилюминесценции беэ исследуемого вещества.

Пример 1, Определение антиоксидантной активности ортофена, В пробу для исследования и контрольную пробу вносят все необходимые компоненты согласно предлагаемого способа.

Определяют светосумму ХЛ люминола в опытной и контрольной пробах.

Светосумма ХЛ люминола в контрольной пробе(:,) равна t5.10 имп/5 мин. Светосумма ХЛ люминола в пробе с добавлением ортофена в концентрации 50 мкМ (г) равна 17,1.104 имп/5 мин. Актиоксидантную активность определяют по формуле

А(Я = . 100

17,1 10 имп/5 м. 100% 114%

15 10 имп/5м, Согласно предлагаемого способа определяют . и ;,, = 15 10 имп/5 мин. =

10,2 10 имп/5мин.

Антиоксидантную активность вычисля5 ют по формуле

А(%) = — ° 100 = с.c/

10,2 10 HMll/5 M100g = 68%

15 10 имп/5м

Следовательно, бутадион в концентрации 50 мкМ проявляет признаки антиоксидантной активности.

Формула изобретения

Способ определения антиоксидантной

15 активности лекарственных веществ, включающий регистрацию изменений в пробе уровня индуцированной Н202 хемилюминесценции при инкубации в ней раствора исследуемого вещества в присутствии люминофора с последующим сравнением с контролем, отличающийся тем. что, с целью упрощения способа и расширения круга анализируемых лекарственных веществ, проба дополнительно содержит

25 ДМСО в конечной концентрации 60 и 60 мкМ гемина, исследуемое вещество растворяют в 60 -ном водном растворе ДМСО, а в качестве люминофора используют люминал,