Штамм бактерий leptospira interrogans "рябухин" серогруппы icterohaemorrhagiae, серовара copenhageni, используемый для приготовления вакцины против лептоспироза

 

Область использования: микробиология, лептоспироз, вакцина, вакцинный штамм. Сущность изобретения: новый штамм Zeptospira in ferrogans "Рябухин" НИИЭМ N 460 обдадает выраженными антигенными и иммуногенными свойствами, гарантирующими использование его для приготовления вакцины. Штамм выделен из крови человека больного лептоспирозом. Гретый при 56С в течение 2 ч штамм обладает высокой иммуногенной активностью и защищает экспериментальных животных от гибели при введении им вирулентных лептоспир в дозе, более чем в 1000 раз превышающей летальную. Сыворотка животных, иммунизированных опытными образцами вакцины, приготовленной из штамма, обладает высокой протективностью.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в вакцинно-сывороточном деле для приготовления вакцины.

Известно, что в настоящее время для приготовления лептоспирозной вакцины, применяемой с целью профилактики лептоспироза у людей, используют штаммы серогруппы Icterohaеmorragiае.

Иммуногенность используемых в настоящее время для приготовления вакцины штаммов по-видимому недостаточно высока.

Цель изобретения - получение антигенно, иммуногенно и эпидемиологически актуального штамма лептоспир, пригодного для приготовления вакцины.

Штамм выделен в 1982 году из крови больного иктерогеморрагическим лептоспирозом человека. Депонирован в коллекции лептоспир Института эпидемиологии и микробиологии АМН СССР им. Н. Ф. Гаммалеи N 460.

Характеристика штамма.

Морфологические и культуральные свойства. Грамотрицательные спирохеты с характерной морфологией и подвижностью. Культивируются на жидкой питательной среде Терских с добавлением 5% сыворотки кролика при 28^оС. Лаг-фаза длится двое суток, экспоненциальная фаза - 6 сут, время генерации 22 ч. В стационарной фазе наибольшая концентрация составляет (3,7 ± 0,2) ˙10⁷ лептоспир в 1 мл.

Патогенные свойства. На экспериментальных моделях штамм отнесен к высоко вирулентному: ЛД₅₀, которую определяли при внутрибрюшинном заражении золотистых хомячков массой 30,0 г, составляет 5,6·10°/(8,2·10¹-2,5·10°). В знаменателе указано значение пределов, в которых с вероятностью 95% заключено действие значения ЛД₅₀. Клинические проявления инфекции у экспериментальных животных характеризуются появлением лихорадки у 100% животных, геморрагий у 100% и желтухи у 80% .

Антигенность. Антигенная активность штамма высокая: в ответ на однократное внутривенное введение кроликам массой 3,0 кг живой культуры лептоспир, содержащей 10⁸ микробных клеток, появлялись антитела, максимум которых приходился на вторую-третью неделю и средний геометрический титр составлял 51200.

Иммуногенная активность. Штамм обладает выраженной иммуногенной активностью. Убитый нагреванием в течение 2 ч при 56^оС в дозе 3 ˙10⁷ он защищает от гибели и развития инфекции 100% морских свинок, зараженных лептоспирами серогруппы Icterohaemorrhagiae в дозе, в 1000 раз превышающей летальную.

Из лептоспир штамма "Рябухин" получена вакцина, которая была испытана в эксперименте на животных.

Пример приготовления и испытания вакцины.

Культуру лептоспир штамма "Рябухин", выращенную на среде Терских и содержащую 3 ˙10⁷ микробных клеток в 1 мл, нагревали при 56^оС в течение 2 ч. Полученную таким образом гретую вакцину вводили 20 морским свинкам массой 150,0 г в дозе 1 мл внутрибрюшинно. В ответ на введение вакцины у всех экспериментальных животных появлялись антитела, средний геометрический титр которых в реакции микроагглютинации составлял 1: 84. Через 30 дней всем вакцинированным и контрольным животным вводили лептоспиры серогруппы Icterohaemorrhagiae в дозе, в 1000 раз превышающей летальную. Все иммунизированные морские свинки оставались живы в течение 30 дней, симптомы заболевания отсутствовали, из органов забитых животных при посеве на питательную среду лептоспиры не выделены. Все контрольные животные (20 морских свинок), получившие вместо вакцины питательную среду, погибли при яркой картине иктерогеморрагического лептоспироза.

Иммуногенность вакцины, изученная методом пассивной защиты на золотистых хомячках. Животным за два часа до инъекции летальной дозы лептоспир вводили внутрибрюшинно иммунную сыворотку морских свинок, содержащую антитела в титре 1: 40. Превентивная активность сыворотки морских свинок, вакцинированных опытными образцами вакцины, для золотистых хомячков, подсчитанная путем определения ЕД₅₀, составила .

Изучение в эксперименте на золотистых хомячках вирулентности прототипов, коррелирующей с иммуногенностью, показало, что ЛД₅₀ штамма "Одесса 853" равна 1,0·10³/(6,9·10³-1,4·10³). ЛД₅₀ штамма "Rattus norvegicus 382" равна 2,0·10⁴/(1,4·10⁵-2,9·10³) .

Изучение иммуногенности прототипов методом определения протективной активности сывороток животных, иммунизированных штаммами "Одесса 853" и "Rattus norvegicus 382", показало, что для шт. "Одесса 853" ЕД₅₀= , для штамма "Rattus norvegicus 382" ЕД₅₀= .

Таким образом, предлагаемый штамм обладает более выраженными по сравнению с прототипами иммуногенными свойствами и может быть рекомендован для конструирования вакцины. (56) Leptospiroses and medicin. Human and Vet. , 1989. Coll Found, Marsel, Merienx, P. 119-135.

Формула изобретения

Штамм бактерий Leptospira interrogans "Рябухин" серогруппы Icterohaemorrhagiae серовара copenhageni НИИЭМ N460, используемый для приготовления вакцины против лептоспироза.