Способ получения кристаллического инсулина

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КРИСТАЛЛИЧЕСКОГО ИНСУЛИНА путем сорбшга инсулинсодержащего сырья, очищен;Ного от жиров к пигментов при рН 2,0- . 4,0 на сугафзкатионите, о(фаботки сорбенг та уксусноаммояийшдм буферным раствором с последующей десорбцией и кристаллизацией , отличающийс я тем, что, с целью упрощения технологии получения целевого продукта и снижения его антиГенности, сорб1гаю проводят на микродисперсин сульфокатионита с величиной : частиц 20-6О мкм, смещанной с инер)т ным силикатным наполнителем с величиной частиц 4О-120 мкм при объемном соотношении микродисперсйи и наполнителя

СОЮЗ СООЕТСНИХ

\ 4 %

РЕСПУБЛИК

Зцр А 61 К 37/26

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

И ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (J

1.В»

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ГЮ ДЕЛАМ ИЗОБ1%ТЕНИЙ И ОТНРЬГПФ (21) 2969643/28-13 (22) 04.08.80 (46) 30.03.83. Бюл. N 12 (72) А. А. Демин, В. С. Пирогов, Т. В. Самсонов, В. Л. Константинов, О. В. Чайка, Н. Д. Сидорова, Л. М. Смирнова и Л. И. Дубровская (71) Ордена Трудового Красного Знаме ни институт высокомолекулярных соединений АН СССР и ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени ленинградский завод медпрепаратов обьедине« ния «Ленмясппром (53) 615.45:615.361.37(088.8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР

l4 389793, кл. А 61 К 37/26, 1976. (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КРИСТАЛЛИЧЕСКОГО ИНСУЛИНА путем сорбпни инсулинсодержащего сырья, очищен- . ного от жиров и пигментов при рН 2,0- .

4,0 на сульфокатионите, обработки сорбен,SU„„:100:76 75 . та уксусноаммонийным буферным раствором с последующей десорбцией и кристал« лизацией, отличающийся тем, чю, с целью упрощения технологии полу чения целевого продукта и снижения его антигенности, сорбцию проводят на микродисперсии сульфокатионита с величиной частиц 20-60 мкм, смешанной с инертным силикатным наподнителем с величиной частиц 40-120 мкм при объемном соотношении микродисперсяи и наполните ля (0,8-1,2):1, обработку смеси микро дисперсии и паполнителя проводят 0,200,30 М уксусноаммонийным буферным раствором при рН 5,2-6,4 и проводят десорбцию 0,02 0,3 N буферным раствором при рН 6,4-7,6.

2. Способ по п. 1, о т л и ч а юшийся тем, что.в качестве инертного носителя используют стекло, щирокопо-ристое стекло, биогласс.

1 10076

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается получения лекарственных препаратов.

Известен способ получения кристаллического инсулина путем сорбции инсулинсодержащего сырья, очищенного от жиров и пигментов, при рН 2,0-4,0 на сульфокатионите, обработки сорбента уксусноаммонийным буферным раствором с последуюшей десорбцией и кристалли- 16 зацией (1 j .

Однако способ требует использования в качестве исходного продукта уже очищенного кристаллического инсулина, выход конечного продукта составляет 4052% при содержании проинсулина 1% а технологический процесс сложен и длителен (84-170 часов) и не дает возможности получить целевой продукт со сниженной антигенностью. 26

Бель изобретения — упрощение технологии получения целевого продукта и снижения его антигенности.

Поставленная цель достигается тем, что при осуществлении способа получения д кристаллического инсулина со сниженной антигенностью, путем сорбции инсулинсодержашего сырья, очищенного от жиров и пигментов при рН 2,0-4,0 на сульфокатионите, обработки сорбента З© уксусноаммонийным буферным раствором с последующей десорбцией и кристаллизацией, сорбцию проводят на микродисперсии сульфокатионита с величиной частиц

20-60 мкм, смешанной с инертным силикатным наполнителем с величиной час тиц 40-120. мкм при обьемном соотношении микродисперсии и наполнителя 0,81,2:-1, обработку смеси микродисперсии и наполнителя проводят 0,20-0,30 М уксусноаммонийным буферным раствором

40 .при рН 5,2-6,4 и проводят десорбцию

0,02-0,3 М буферным раствором при рН 6,4-7,6.

При этом, в качестве, инертного носителя используют стекло, широкопористое стекло, биогласс.

Пример 1. Через колонку диаметром 1.7 см и высотой 14 ем, заполненную 30 мл смеси микродисперсии сульфокатионита КУ-23 20-60 мкм и биогласса 80-100 мкм в объемном соотношении 1:1, пропускают.50 мл раствора кристаллического инсулина с концентрацией 10 мг/мл « ри рН=4,0. Сорбент И промывают 300 мл 0,3 М уксусноаммо нийным буферным раствором с рН=-6,0.

Десорбцию ведут 0,2 М фосфатным бу75 2 ферным раствором с рН 7,2. К собранному элюату в количестве 60 мл добавляют 1,4 г лимонной кислоты, 0,9 мл

5% раствора хлористого цинка и 20 мл ацетона. Раствор охлаждают и проводят кристаллизацию, постепенно добавляя

5 М соляную кислоту до рН=5,8. После кристаллизации получают 350 мг кристаллического цинк-инсулина. Биологические испытания показывают, что активность полученного препарата

25,5 ед/мг. После очистки содержание проинсулина 0,5% и в 2 раза снижено количество аргинининсулина по сравнению с препаратом завода медпрепаратов.

Сорбцию и промывку ведут со скоростЫо

350 мл/ч-см,,десорбцию - со скоростью

50 мл /ч сМ2.

Пример 2. Через колонку диаметром 1,7 см и высотой 14 см, заполненную 30 мл смеси микродисперсии сульфокатионита КУ-23 20-60 мкм и широкопористого стекла в обьемном соотношении 0,8-1, пропускают 200 мл инсулинсодержашего раствора с рН=

= 2,0 (общая концентрация белков в растворе 7 кг/мл, около 20% от общего количества составляют инсулин и его аналоги),полученного после десорб ции с гранулированного сульфокатионит

КУ-23 в процессе промышленной очист ки инсулина. Сорбент промывают 250 мл

0,3 М уксусноаммонийным буферным раствором с рН=6,4. Сорбцию и промывку ведут со скоростью 350 мл/ч см . Десорбцию ведут со скоростью 50 млЛ.см

0,02 М раствором ТРИС с рН=6,4 К собранному элюату в количестве 50 мл последовательно добавляют 1,2 г лимонной кислоты, 0,4 мл 5% раствора хлористого цинка, 10 мл ацетона. Раствор охлаждают и ведут кристаллизацию, постепенно добавляя 5 N соляную кислоту до рН=5,8. Выход целевого продукта 180 мг с активностью 26 5 ед/мг. В препарате имеюжя лишь примеси дезамидоинсулина.

Пример 3. Через колонку диаметром 3,5 см и высотой 30 см, заполненную 250 мл смеси микродисперсии сульфокатионита КУ-23 20-60 мкм и стекла 40-100 мкм в обьемном соотношении 1,2-1, пропускают 100 мл инсулинсодержашего раствора, полученного в ходе промышленной очистки инсулина. йосле десорбции с гранулированного ионита КУ-23. Сорбент промывают 0,2 М

3 1007675 4 ксусноаммонийным буферным раствором Предлагаемый способ позволяет уда с РН 5 2. Сорбцию и нромывк ве лить проинсулин (не более О, 5%), актив со еко ью 350 мл/ч, иЗ д „рб, ность пРепаРатов 25,5-26 5 ед/г. СповеДу г со скорос ью 50 мл/ч.. м 2 0 3М соб высокотехнологиченочнстка не прераствором уксуснокислого аммония. с

РН 7,6 K собранному злюату в количе- В способе исключаютсЯ стадИи осаж стве 800 мл добавляют 7,2 г лимонной дения примесных белков при РН 2,0 и кислоты, 2,6 мл 5 g, раствора хлористого 4,4 H осаждение аморфного цинкинсУлина цинка и 100 мл ацетона. Раствор охлаж- и дает возможность очистки любого преддают и ведут кристаллизацию, постепенно щ варительно "очищенного от жира и пигмеи добавляя 5 Й соляную кислоту до РНМ5,8. тов инсулинсодержащего раствора. В споПосле кристаллизации получено 940 мг собе находят применение отходы промыщкристаллнческого цинк-инсулина с актив- ленного производства сульфокатионита ностью. 26 ep/üï . КУ-23,выпускаемого в массовом масштабе.

Составитель С. Малютина

Редактор E. Лушникова Техред М,Коштура Корректор М Шарщи

Заказ 2177/6 Тираж 711 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и от рыть

113035, Москва, Ж35, Раушская наб., д. 4/8, Филиал ППП "Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4