Способ получения креатинфосфата,меченного фосфором-32

 

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

Н ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3741317/23-04 (22) 14.05.84 (46) 15.06.86. Бюл. И 22 (71) Институт экологии растений и животных Уральского научного центра

АН СССР (72) А.Я.Миранович, А.Н.Богушевский, В.N.Калюжная и В.П.Коробов (53) 547.26.118.07 (088.8) (56) Ленинджер А. Биохимия. М., Мир, 1974, 351, 354.

Мецлер Д. Биохимия. М., Мир, 1980, 99.

Богушевский А.Н . Исследование химических реакций горячих атомов фосфора-32 с углеводородами и их галогенпроизводными в жидкой среде.

Канд. дис . М., МГУ, 1977.

Богушевский А.Н. и др. Реакции горячих атомов фосфора-32 с хлоралканами. ДАН СССР, 1976, 288, 869.

К.Zeile и др. Syntheszs of Natural, creatinephosphoric acids. Ноор1еSeylers. Z. physiol. chem., 1938, 256, ?93; С.А., 1939, v. 33, 1670 .

Авторское свидетельство СССР .?1 671277, кл. С 07 F 9/09, 1979. 11 4 С 07 F 9/22, С 07 В 23/00 (54)(57) l. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КРЕАТИНФОСФАТА,МЕЧЕННОГО ФОСФОРОМ-32, формулы (Н® P W-С-r4(:Hg-СН (.„0 H

И 11 2

О Ng заключающийся в том, что смесь равных объемов насыщенного раствора креатинфосфата в четыреххлористом углероде и чистого четыреххлористого углерода облучают быстрыми нейтронами в присутствии органического основания, взятого в количестве

-4

5 ° 10 — 2 10 мол.Х, при температуре 0 — 40 С в течение t — 28 сут, с последующей обработкой облученной смеси водой.

2. Способ по п.? о т л и ч а ю— шийся тем, что в качестве органического основания используют пиридин ..

198928 2 который может быть широко использован в различного рода биохимических экспериментах, как ключевое соединение для изучения энергетических процессов в мышцах, миграций макроэр« гических остатков фосфорной кислоты в организме, как полупродукт для синтеза меченных нуклеотицов, в частности адезинтрифосфорнай кислоты, меченной фосфором-32, для изучения фосфорного обмена и метаболизма различных фосфорных интермедиатов в экспериментах "ж чиччо" и "хп прего".

Целью изобретения является получение хроматографически чистого с высокой удельной активностью креатинфосфата, меченного фосфором-32, посредством облучения быстрыми нейтронами смеси четыреххлористого уг- лерода, креатинфосфата и органического основания — пиридина.

Пример 1. Берут 250 мл (2,6 г моль) насыщенного раствора. креатина в СС1 с добавкой 0,02 мол. пиридина в круглодонной колбе на

250 мп. Вставляют внутрь колбы палец на шлифе 29 таким образом, чтобы . впоследствии помещенный внутрь пальца Pu — Be — источник быстрых нейтронов интенсивностью 7 ° 10 нейтр/с

Ъ находился в центре этой круглой колбы для равномерного облучения объема жидкости. При температуре 20 «+ 5 С о облучают данную мишень в течение

3 сут °

После облучения палец вынимают, наливают в колбу 10 мл бидистиллиро" ванной воды и отгоняют на парафино- ъ вой бане (t = 60 С} при пониженном давлении 1 мм до остатка в колбе 0,05 — 0,1 мл. Этот остаток капилляром переносят на бумажную хроматограмму из бумаги PN — 7 20Х500 мм, полоской в 3 смот края хроматограммы и хроматографируют в герметичной камере для нисходящей хроматографии известными приемами - двукратным хроматографированием в растворителе иэопропанол — 25 -ный аммиак — вода

4 1

Изобретение относится к фосфорорганической химии, а именно .к новому способу получения нового фосфорили,рованного креатинфосфата, меченного фосфором-32 формулы (НО) Р-МНС N СН,СО Н и 1

О М СБЗ.7:1:2. Параллельно в тех же условию ях хроматографируют неактивную хроматограмму со свидетелями: Н РО, Hà Р2 О, креатинфосфат . После дву; кратного хроматографирования (каждое из которых занимает время около

18 ч) хроматограммы высушивают на воздухе 2 ч. Активную хроматограмму протягивают мимо окна счетчика

1g СБТ-13 радиохроматографа и получают запись пиков активности по длине хроматограммы на ленте ЭПП-09. Неактивную хроматограмму обрабатывают из пульверизатора жидкой смесью из 2 г

15 ксилозы, 2 мл анилина, 20 мл воды, 20 мл этилового спирта и 60 мл н-бутилового спирта и помещают на 10 минут в сушильный шкаф с t=160-180 С для проявления фосфорных соединений, Последние проявляются на бумаге, как коричневые пятна на белом фоне. Неактивную и активную хроматограммы сравнивают с записью на ленте ЭПП-09 и между собой, и по совпадению пика

g5 активности на ленте записи ЭПП-09 и активной хроматограмме с проявЛенным пятном креатинфосфата на неактивной хроматограмме идентифицируют местоположение активного креатинфос-

ЗО фата на активной хроматограмме. Этот участок хроматограммы вырезают, элюируют водой в виал,емкостью 10 мл и получают препарат меченного фосфором-32 креатинфосфата активностью

5 ° 10 расп/с или 14 мкКи. Радиохимический выход 44 . Часть активности порядка 600 — 1000 имп-мин берут капилляром из виала, наносят на плас.тинку из силуфола и хроматографиру40 ют в растворителе метилэтилкетонэтанол — 25 -ный аммиак — вода 15:5:

:7,5:10. Получают единственный пик активности с Rg = 0,44, соответствующий положению креатинфосфата.

Э

Пример 2. Берут 125 мл насыщенного раствора креатина в СС14 (1,3 г моль СС1 ), 125 мл чистого СС1 (I 3 Г моль СС1 ), 0,04 мл С Н (5"10 мол. ) в круглодонной колбе

50 на 250 мл. Далее все операции-. аналогичны таковым по примеру 1. После элюирования целевого меченного креатинфосфата получают препарат активностью 6 10 расп/с или 16 мкКи.

Хроматографирование на силуфоле

55 подтверждает чистоту и индивидуальность меченного фосфором-32 креатинфосфата (один пик на записи радиохроматографа и одно пятно на автоз I.198928 4 . радиограмме из рентгеновской пленки ro к предельно возможной удельной

ГМ-1}. активности препарата креатинфосфаВ табл.1 и 2 приводятся дан- та-32 Р, практической одностадийII II ные по радиохимическому выходу крв- ности горячего синтеза мечен" атинфосфата в зависимости от содер- 3 .ного креатинфосфата, получения жания пиридина в исходной смеси, от хроматографически чистого целетемпературы и времени облучения. вого продукта,без - операций проЭффективность предложенного спо- межуточной очистки продуктов синсоба заключается в получении близко- теза, Таенняа

Вжпонеятм ммнвнн, мн (r

8а севе ареа

0g4 (O,39 t 5 ° 10 ) 250(398 7512 6)

12S(t99,93811,Э)

SO(79s75tOiS2)

35(55,8Э10 36) O,4(0,3915 }О 4)

0 4(0,3915 10 ) 125(199.381).З) 200(31912,07) t

0в4(О,3915")О )

0 4(0,3915 )О ) 210(33512 ° 18)

220(350. 912.28) 22(35;0910,23) 0,10(0109811,2 10 )

0s20(Oe 19612 э5 1ф ) 8,5 16 5 21

l4 18 18

0 02(0e02 2e5.10 ) 6,4 20

6,1 18 0,01(О,011 1 1(Г ) 2,5 .

4Э, ll

Табаняа 2

Раднояммнчвсннй змяоя вреатеяфосфата э эаенсююстя ое яараметроа обяреенна

3Ьмнояентм мнеенн е ма (г, 0,4(0,39;S 1О ) 2025

20 «+ S

432 S 1мкн

43Х 28 мкя

125(199.381 1.3) 1

125(199.38; 1.3 ) То не

То яе

S2 ман

»lf

14.

432

43Х . 92 мЕн е е

2025

22,5 мхя е

372

40,5Х

lO.в

29 sat@

° I

462

25О(398,75;2.6)

250(39877512 6)

250(398,7512,6)

250(398,7S12«6)

250(398,7512,6) Рвдноянмнеесвне вмноям меееннва фосфором»32 ароатетое а системе сс(в еревтмя-,пнрндян е еввнсямостн от сояераанне енрндяяа (мол.Х);.ереме

e6e7eeasuc 2 срт, 20 2.5 с ястоеннн янтенсявяоствв 5 10 не8тр.(с) .

15 38

15 43

S 35

5, 42

4,4 27

Зт4

ВЯИИПИ Заказ 33)9/2 ТиРаж 343 .. . Подписное

Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

1S 9

7 5

18 6

27

35 12

47 7,5

24 17

17 10

36 13