Штамм @ @ @ 101 @ 39-продуцент нейраминидазы холерного вибриона

 

ШТАММ Escherichia coli HE 101 pRD 39, № 124 (коллекция Государственного научно-исследовательского института стандартизации и кoнтpoлJ медицинских и биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича) - проду цент нейраминидаэы холерного вибриона .

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

А1 (19) (11) (5)) 4 А 61 К 39/108, С

С 12 R 1: 19

)1( (ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСИОМЪГ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3781026/28-14 (22) 09.08. 84 (46) 23.02. 87. Бюл. У- 7 (71) Ростовский-на-Дону государственный научно-исследовательский противочумный институт (72) Б.Н. Мишанькин, Н.Я. Шиманюк, О.Ю. Рябухина и В.П. Власов (53) 576.8.097(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

У 973613, кл. С 12 N 9/00, 1982. (54) ШТАММ Escherichia coli НВ 101

pRD 39 — ПРОДУЦЕНТ НЕЙРАМИНИДАЗЫ

ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА (57) ШТАММ Escherichia coli НВ 101

pRD 39, )(-124 (коллекция Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контрол)( медицинских и биологических препаратов им. Л.A. Тарасевича) — проду цент нейраминидаэы холерного вибриона.

121027 фермента

ВНИИПИ Заказ 294/1

Тираж 596

Подписное

Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для получения нейраминидазы холерного вибриона.

Целью изобретения является создание штамма, способного к продукции больших количеств нейраминидазы хо лерного вибриона и обеспечивающего безопасность работы.

Штамм сконструирован на базе штамма кишечной палочки НВ 10 1 при проведении генноинженерных работ путем введения в него с помощью генетической трансформации искусственно полученной рекомбинантной плазмиды рВЭ 39. Эта плазмида несет в своем составе ограниченный

Hind III — сайтами фрагмент хромосомной ДНК возбудителя холеры биотипа эльтор (штамм 5879) с генами синтеза нейраминидаэы. Плазмида имеет молекулярную массу 7,7 мегадальтон, способна амплифицироваться в присутствии хлорамфеникола и,функционирует на основе вектора pBR 322. Она имеет

4 участка узнавания для эндонуклеазы рестрикции Hind III, 2 — для Eco R V, 4 — для Есо R I, по 1 — для Sal Gl, Bam Н I, PSt I и 0 — для M1 uk.

Штамм Escherichia coli НВ pRD 39 депонирован в коллекции Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича ИЗ СССР 3< под номером 124.

Культурно-морфологические признаКИ.

Короткие палочки размером 1,02,0х0,3-0,4 мкм. Неподвижны. Грам- 40 отрицательны с умеренно выраженным полиморфизмом. Ha arape LB и Хоттингера образуют мутные колонии серовато-белого цвета. Вызывают помутнение бульона Хоттингера с образова- 45 нием хлопьевидного осадка.

На минимальной среде зависят от тиамина, лейцина и пролина. Устойчивы к антибиотикам пенициллиновой группы (более 100 мкг/мл) за счет образования пенициллиназы. Ферментируют с образованием кислоты и газа

8,2 глюкозу, арабинозу, маннозу, галактозу. Не ф .рментируют лактозу. Несут мутацию в гес А гене хромосомы, в связи с чем проявляют чувствительность к УФ-лучам и метилметансульфанату. Лизируются кишечными фагами

Т и лямбда-вир.

Штамм авирулентен для белых мышей и морских свинок при подкожном, аэрозольном и внутриконьюнктиваль9 ном заражении в дозе до 10 м.кл., что сообщает ему преимущества в режимном отношении.

Штамм Escherichia coli 124 обра— зует в контрслируемых условиях большие количества нейраминидазы холерного вибриона, в 8-10 раз превышаю— щие уровень продукции фермента родительским штаммом Vibrio cholerae

eltor 5879.

Пример. Для выращивания клеток предлагаемого штамма можно использовать самые разнообразные питательные середы, включая бульон

Мартена (pH 7,6) и бульон Хоттенгера (рН 7,4), дрожжевой бульон (рН 7,3) и бульон ЛБ (рН 7,1), различные пентоны и другие среды.

Культивирование клеток штамма осуществляют в условиях энергичного встряхивания на шюттель-аппарате (175 об/мин) в колбах с ЗЖ-ным раствором бактопентона Дифко (рН 7,6-7,8), дополненного 0, 1Х хлорида кальция и 0,5Х хлорида натрия, при 30-37 С в течение 18-22 ч. Далее колбы о охлаждают до 4 С, клетки отделяют центрифугированием при 6000 об/мин в течение 20 мин, а надосадочную жидкость используют в качестве источника целевого фермента. Актив— ность нейраминидазы в жидкости ис-. следует тиобарбитуровым методом

Уоррена. Обычно в 1 мл культуральной жидкости содержится 300-400 ед.

Штамм E. coli 124 стабильно образует нейраминидазу холерного вибриона на искусственных средах, что значительно упрощает процесс получения и очистки целевого продукта.