Способ получения производного шизофиллана

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК ае аи дц 4 С 08 В 37/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ) » А !1 Р !

Х ПАТЕНТМ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР пО делАм изОБРетений и ОткРытий (21) 2834601/23-05 (22) 12.10.79 (46) 07.09.86. Бюл. Ф ЗЗ (71) Какен Кемикал Ко., Лтд и Тайто

Ко. Лтд (JP) (72) Такемаса Кодзима, Есимаса

Накаи, Ватару Ито, Тосно Янаки, Соэо Кавабата, Казуо Акима и асио Момоки (JP) (53) 547.458(088.6) (56) Патент США В 3943247, кл. 424-180. опублик. !976. (54)(57),СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОД-, НОГО ИИЗОФИЛЛАНА, включающий экст ракцию культуры Shizophyllum Commune

Fries и очистку полученного раствора, отличающийся тем, что, с целью повышения растворимости целевого продукта в. воде, 0,5-27-ный раствор шиэофиллана обрабатывают в течение 25 мин — 4 ч ультразвуком с частотой 10-50 кГц и амплитудой

l0-100 при рН 4-9 с последующим осаждением целевого продукта водным раствором органического растворителя, выбранного из группы: ацетон, тетрагидрофуран, диэтилкетон,этилпропилкетон, метанол, этанол, пропанол, концентрации 21,8-39,! об.X.

Таблица 1

Растворитель

ОтношеПродукт, полученный из рН ние раст ворителя к объему всего а осадка створа, об.Ж

37,2

9,2

Метанол

32,1

6,2

5,8

Этанол

5,8

26,9

4,8

Пропанол

Диэтилкетон

5,8

25,6

3,1

Этилпропилкетон

21,8 1,3

5,8

1 12566

Изобретение относится к химии высокомолекулярных соединений, в частности к методу получения полисахарида — неошиэофиллана, обладающего противоопухолевым и антибактериальным действием.

Цель изобретения — повышение растворимости неошизофиллана в воде.

Пример .1 ° 10 r порошка шизофиллена, полученного путем осаждения 1О добавлением смешивающегося с водой органического растворителя к очищенному фильтрату культуры Shizophyllum

Сопшыпе Fries, диспергируют в 500 мл горячей воды. 15

Коллоидный раствор шизофиллана обрабатывают ультразвуком с часто.той колебаний 20 кГц, амплитудой

20 Ц и выходной мощностью 100 Вт при перемешивании раствора в тече- 20 ние 4 ч .таким образом, чтобы тот равномерно контактировал с колеблющейся пластиной беэ внедрения пузырьков.

Коллоидный раствор шизофиллана подают с донной части резервуара и сливают через верхнюю часть резервуара. Колеблющаяся пластина погружена в коллоидный раствор таким образом, чтобы передавать ультраэву- 30 ковые колебания коллоидному раствору до слива через край, эа счет чего ультразвук можно непрерывно подводить для образования раствора продукта с характеристической вязкостью 4,6 дл/г.

280 мл ацетона по каплям добавляют к 500 мл раствора продукта (10 r) (36 об.% ацетона) для осаждения неошизофиллана. Полученный осадок

40 выделяют на центрифуге с 5000 об/мин и высушивают, в результате чего получают 8,5 г порошка неошизофиллана с характеристической вязкостью 5,1 дл/г, Выделенную на центрифуге надосадоч45 ную жидкость концентрируют и высушивают. Получают твердый продукт с вязкостью 1,5 дл/г.

Пример 2. 2 r порошка шиэо-. филлана по примеру 1 растворяют в S0

100 мл воды при рН 6,3 и полученный коллоидный раствор обрабатывают ультразвуком при частоте излучения 20кГц и амплитудой 35, мощности 1 кВт при комнатной температуре и перемешивании 25 мин и получают раствор продукта с характеристической вязкостью 5,9 дл/г °

99 2

К 100 мл раствора продукта (2 г) добавляют 45 мл водного раствора тетрагидрофурана по каплям (31 об.Ж) осаждают неошизофиллан. Осадок выделяют на центрифуге с 5000 об/мин, осадок высушивают и получают 0,9 r порошка с характеристической вязкостью 7;1 дл/г.

Недостаточную жидкость концентрируют, сушат и получают твердый продукт с характеристической вязкостью 2,7 дл/г. Пример 3. В соответствии с примером 1, изменяя рН и тип растворителя, добавляемого к раствору, полученному при обработке ультразвуком, получают результаты, приведенные в табл. 1.

Препарат 1 (для инъекций). В

100 мл воды при нагревании растворяют О, 5 r не ошиэофилл ана и О, 9 г

NaCl. Раствор фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 микрон. Препарат пригоден для инъекций

Препарат 2 (сироп). В 100 мл воды при нагревании растворяют 3,0 г неошизофиллана 20 г сахара, 0,03 г метилпараоксибензоата и 0,01 г пропилпара-оксибензоата. Фильтруют через мембранный фильтр.

Проводят сравнительное исследование противоопухолевого действия неошизофиллана по отношению к опухоли Саркома-180 по сравнению с шиэофилланом.

Раствор вводят 20 мьппам в виде внутримышечных инъекций 10 раэ каж — -. дые 2 дня спустя 24 ч после трансплантации опухолевой ткани. Результаты приведены в табл. 2.

1256699 а б л и ц а 2

Показатели, 7, при дозе, мг/кг

Исследуемая группа мышей количество раэ

L 121

С подавлением опухоли:

Группа ши-. зофиллана 77 4

81,5 97,0 97,9 95,8 65,8

Группа неошиэофиллана 82,5

90,0 98,3 94,7 94,8 80,6

0

Контроль 0

С исчерпывающими опухолями:

Группа шизофиллана 2

10 9

Группа неошизофиллана 3

12 10 6

0 0 0

14,Контроль 0

9,0 0,86

15,7

Пример 4. Каждый 1 г шизофил30 лана (характеристическая вязкость

73 дл/г) диспергируют в 100 мл воды при рН 4,0 или рН 9,0. Каждый коллоидный раствор обрабатывают ультразвуком при частоте 10 кГц и амплитуде

100 30 мин.

После воздействия ультразвука по каплям при перемешивании добавляют

50 мл ацетона (концентрация 33.3 o6.X)

Полученный неошиэофиллан отделяют от

40 верхнего слоя центрифугированием и сушат. Измеряют вес и вязкость каждого образца неошизофиллана. Получены следующие результаты: рН Выход, г Характеристичес- 45 кая вязкость, дл/г

4,0 0,85 14,6

Пример 5. 5 г шизофиллана (характеристическая вязкость 123 дл/г) диспергируют в 1 л воды при рН 9,0.

Коллоидный раствор обрабатывают ультразвуком 3 ч при частоте 40 кГц и амплитуде 50 . Затем при перемешивании по каплям добавляют 500 мл метанола (объемная концентрация метанола 32,7 об.Ж). Неошиэофиллан отделяют от верхнего слоя центрифугированием и сушат, Выход неошизофиллана 4,7 г, характеристическая вязкость 4,6 дл/г.

Пример 6. 20 г шизофиллана с характеристической вязкостью

138 дл/г диспергируют в 2 л воды при рН 6,8. Коллоидный раствор шизофиллана обрабатывавт ультразвуком

4 ч при частоте 50 кГц и амплитуде

1014 .

Затем по каплям при перемешивании добавляют 1,4 л этанола (концентрация этанола 39,1 об.Ж)

Полученный неошизофиллан отделяют от верхнего слоя центрифугированием и .сушат с получением 17,6 г неошизофиллана с характеристической вязкостью 7,9 дл/г. Все примеры сведены в табл. 3.

1256699

Таблица 3

Пример

Амплитуда,р

Концентрация коллоидного раствора, г/мл (7. ) рН

Частота, кГц

Время обработки

Отношение растворителя ко всему раствору, об.7.

1 10/500 (2) 20

5,6 20

4ч 36

2 2/) 00 (2) 35

6,3 20

25 мин 31

3 10/500 (2) 10/500 (2) 10/500

{г) 10/500 (2) 10/500 (2) 4 1/100 (l) 5,8 20

4 ч

37,2

5,8 20

32,1

4 ч

5B 20

26,9

4 ч

25,6

4 ч

5,8 20

21,8

4 ч

5,8 20

30 мин 33 3

4,0 10

100

1/100 (1) 100

30 MHH 33,3

9,0 10

5 5/1 (0,5) 3 ч 32,7

9,0 40

6 . 20/2 (l ) 4 ч 39,1

6,8 50

Составитель Т. Мартинская

Редактор А. Козориз Техред И.Попович Корректор А. Зимокосов

Заказ 4841/60 Тираж 470 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035 ° Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4