Способ определения гиперфибриногенолитической активности крови

 

Изобретение относится к медицине , в частности к гематологии. Целью изобретения является повьшение точности и ускорение способа. Для этого в исследуемой цитратнор плаз-- не определяют количество фибриногена одновременно, в даух пробах: в присутствии ингибитора фибринолиза и без ингибитора„ В качестве ингибитора фибринолиза используют 1,3%- ньй раствор эпсилон-аминокапроновой кислоты. Учет количества фибриногена ведут по полученным на водяной бане при 3 С в течение 5 кии сгусткам фибрина, количество которых пропорционально исходному количеству фибриногена . При снижении содержания фибриногена во второй пробе от-гасительно первой определяют гиперфибриногеНОЛитическую активность крови. с S

СВОЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (51)4 G 01 N 33/86

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

° ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4222369/28-14 (22) 03.04.87 (46) 30.03.89. Бюл. Р 12 (71) Московский медицинский стоматологический институт им. Н.А.Семашко (72) В.Н,Александров, Т.И.Таранова, Л.Ф.Кармолина, И.Г.Бобринская и Г.Н.Будякова (53) 612.015 (088.8) (56) Балуда В.П., Баркаган и др. Ла;бораторные методы исследований системы гемостаэа. Томск, 1960, с. 237239. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГИПЕРФИБРИНОГЕНОЛИТИЧЕСКОИ АКТИВНОСТИ КРОВИ (57) Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии.!

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для экспресс-диагностики состояний острого фибриногенолиза при неотложных состояниях терапевтического и хирургического профиля, особенно во время операциий и в реанимационной практике.

Целью изобретения является повышение точности и ускорение способа.

Цель. достигается тем, что в исследуемой цитратной плазме количество фибриногена определяют через 10 мин от момента взятия крови одновременно в двух пробах: в присутствии ингиби". тора фибринолиза в 1,37-ном растворе эпсилон-аминокапроновой кислоты и без этого ингибитора, и при снижении содержания фибриногена в пробе без, Целью изобретения являе тся повышение точности и ускорение способа. Для этого в исследуемой цитратной плаз= ме определяют количество фибриногена одновременно. в даух пробах: в присутствии ингибитора фибринолиэа и без ингибитора. В качестве ингибитора фибринолиза используют 1,37.— ный раствор эпсилон-амннокапроновой кислоты. Учет количества фибриногена ведут по полученным на водяной бане при 3? С в течение 5 мин сгусткам о фибрина, количество которых пропорционально исходному количеству фибриногена. При снижении содержания фибриногена во второй пробе относи@ тельно первой определяют гиперфибриногенолитическую активность крови.

2 ингибитора относиттельного такового в пробе с ингибитором определяют гиперфибриногенолитическую активность крови.

Способ осуществляют следующим образом.

Кровь у больного забирают из вены, не сдавливая мягких тканей, силиконированной иглой в силиконирсванную пробирку в 3,87-ный раствор цитрата натрия в соотношении 9:1, во вторую пробирку кровь забирают в 1,37-ный раствор эпсилон-аминокапроновой кислоты, приготовленной на 3,8%-ном растворе цитрата натрия . Точно фик-. сируют время взятия крови в обе про бирки. Обе пробы крови сразу ставят центрифугировать при 1500 об/мин в течение ? мин для получения плазмы.

55 з 14694

Йз обеих проб отсасывают плазму в разные пробирки. В обеих пробах строго через 10 мин от момента взятия крови из сосудистого русла проводят определение количества фибриногена.

Фибриноген определяют так: в одну пробирку к 0 5 мл цитратной плазмы добавляют 0,1 мл 0,227 -ного хлористого кальция для нейтрализации цитрата натрия и 0,1 мл раствора тромбина активностью 20 3 с. Во вторую пробирку к 0,5 мл плазмы крови,взятой в 1,3Х раствор эпсилон-аминокап:роновой кислоты, приготовленной на

;3,8 -ном растворе цитрата натрия, добавляют О, 1 мл 0,227 -ного раствора хлористого кальция для нейтрализации цитрата натрия и О, 1 мл раствора тромбона активностью 20 + 3 с.

Обе пробирки ставят на водяную баню о

37 С на 5 мин для свертывания фибриногена. Получаемые сгустки фибрина пропорциональны исходному количеству фибриногена. Следовательно, для по- 25 лучения количества фибриногена и выражения его в г/Л получаемые сгустки фибрина быстро высушивают на фильтровальной бумаге, взвешивают на торсионных весах. Вес сгустка умно- 30 жают на "2", на коэффициент 22,2 согласно способу Рутбегр и делят на

100. Проводят сравнение концентраций фибриногена, .определенного в, присутствии стабилизатора фибринолиза в 1,3Х-ном растворе эпсилон-амино- капроновой кислоты и без этого стабилизатора, только в 3,8Х-ном растворе цитрата натрия, вычисляют разницу количеств фибриногена, которая, в свою очередь, соответствует количеству лизированного за 10 мин фибриногена. При снижении количества фибриногена в 3,8Хном растворе цитрата натрия относительно количества фибриногена, определенного в 1,3 -ном растворе эпси-:

45 лон-аминокапроновой кислоты, диагностируют как гиперфибриногенолитическую активность крови.

Раствор 1,3Х эпсилон-аминокапроновой кислоты готовят предварительно, до взятия крови, 1,3 r сухой эпсилонаминокапроновой кислоты растворяют в 3,8Х-ном растворе цитрата натрия.

Осуществление предлагаемого способа занимает 20 мин. По преддагаемому способу проведено 27 исследо-, ваний и результаты их представлены в табл.1. По способу-прототипу прове-: дено 48 исследований. Результаты параллельных исследований способапрототипа и предлагаемого приведены в табл.2.

Количество лизированного фибриногена различно, колеблется от 0,45 до 6,67 г/л и не зависит от исходного общего количества фибриногена.

Р проб для табл.2 взяты из табл.1.

lIo способу-прототипу увеличение активности лизиса выявлется не всегда в сравнении с заявляемым способом.

В примере 3 наблюдается по способупрототипу завышение активности лизиса до 67 .. Диагностическая информативность гиперфибриногенолитической активности крови предлагаемого способа точнее способа-прототипа. Пример 1. Больной М., 49 лет. Диагноз: Сотрясение мозга. Травматический шок, Перелом поясничного отдела позвоночника. Состояние больного тяжелое, требующее интенсивной терапии.

Для выявления наличия гиперфибриногенолитической активности крови у больного, не сдавливая мягких тканей, забирают кровь путем пункции вены силиконированной иглой. В первую силиконированную пробирку приливают 4,5 мл крови к 0,5 мл 3,8 ного раствора цитрата натрия, что соотносится как 9:1. Во вторую силиконированную пробирку приливают

4,5 мл крови уже к другому раствору к

О, 5 мл 1, ЗХ-ного раствора эпсилонаминокапроновой кислоты, приг отов ленной на 3,8 "ном растворе цитрата нат.рия также в соотношении 9:1. Раствор

1,3 эпсилон-аминокапроновой кислоты готовят предварительно до взятия крови: 1,3 г сухой эпсилон-аминокапроновой кислоты растворяют в 3,8 ном растворе цитрата натрия.

Данные гиперфибриногенолитической активности крови, полученные по пред" пагаемому способу, представлены в табл.1.

Количество лизированного фибриногена различно, колеблется от 0,45 до 6, 67 г/л и не зависит от его общего количества, Диагностическая информативность предлагаемого способа вьш е и точнее способа-прототипа.

Точно фиксируют время взятия крови в обе пробирки, в нашем опыте равным 10 ч. Обе пробы крови сразу

40. тем, что, с целью повышения точности

45 и ускорения способа, определяют содержание фибриногена через 10 мин от момента взятия крови одновременно в двух пробах в присутствии 1,3Хного раствора эпсилон-аминокапроно50 вой кислоты и беэ нее и при снижении содержания фибриногена во второй пробе относительно первой определяют гиперфибриногенолитическую активность крови.

5 14 ставят центрифугировать, а именно, в 10 часов 02 мин при 1500 об/мин в течение 7 мин. После центрифугирования в 10 ч 09 мин иэ первой пробирки отбирают 0,5 мл цитратной плазмы автоматической пипеткой и добавляют к 0 1 мп 0,227 -ного раствора хлористого кальция. В эту же пробирку добавляют 0,1 мл раствора тромбина, активностью 20 с. В то же самое время из второй пробирки с раствором 1,3Х эпсилон-аминокапроновой кислоты на

3,8 -ном цитрате натрия отбирают ав-. томатической пипеткой 0,5 мп плазмы и приливают к О,1 мл 0,227 -ному раствору хлористого кальция и О, 1 мл раствора тромбина активностью 20 с.

В 10 ч 10 мин обе пробы ставят на водяную баню при 37 С на 5 мин. В

10 ч 15 мин обе пробы достают из бани, полученные сгустки высушивают на фильтровальной бумаге под контролем зрения так, чтобы бумага была сухой после промокания в ней сгустка. Сгусток сразу же взвешивают на торсионных весах: вес сгустка в присутствии ингибитора равен 8 -мгх2

22,2;100 = 3,55 г/л, при отсутствии ингибитора вес равен 6 мгr2<22>2;

100 = 2,67 г/л. Количество лизированного фибриногена равно 3,55 г/л- 2 67 г/л = 0,88 г/л.

Заключение: диагностирована гицерфибриногенолитическая активность крови. Даны рекомендации к проведению коррегирующей терапии.

Пример 2„ Больной А., 58 лет. Диагноз: Острое нарушение мозгового кровообращения. Состояние больного тяжелое, требующее реанимационных мероприятий и интенсивной терапии.

Кровь для исследования у больного забирают, не сдавливая мягких тканей, путем пункции вены силиконированной иглой в две силиконированные пробирки по 4,5 мл крови к 0,5 мп З,SX цитрата натрия и к 0,5 мл 1,3Х-ного раствора эпсилон-аминокапроновой кис лоты на 3,8 .-ном растворе цитрата натрия, в первую и вторую пробирки соответственно, что соотносится как

9:1. Точно фиксируют время взятия крови в обе пробирки, которые тот

69468 6 час ставят центрифугировать при

1500 об/мин в течение 7 мин, Затем к 0,1 мл 0,227Х-ного раствора хлористо

ro кальция приливают О, 5 ип цитратной плазмы в первую пробирку и О, 1 мл раствора тромбина активностью 20 с. Во вторую пробирку к 0,1 мл 0,227 -ного раствора хлористого кальция приливают О, 5 мл плазмы крови, взятой с раствором 1,3 эпсилон-аминокапроновой кислоты на 3,8 -ном растворе цитрата натрия, и 0,1 мл раствора тромбина активностью 20 с. Обе пробирки тот час ставят на водяную баню о при 3 7 С на 5 мин. Затем сгустки извлекают и высушивают на фильтровальной бумаге так, чтобы бумага была сухой. Сгуток сразу же взвешивают на торсионных весах: вес сгустка в присутствии ингибитора равен 9 мг 2

«22,2:100 = 4 0 г/л, при отсутствии ингибитора вес .равен 7,5 мг 2 < 22,2."

:100 = 3,33 г/л. Количество лизированного фибриногена равно: количество фибриногена в 1,3 -ном растворе эпсилон-аминокапроновой кислоты— — количество фибриногена беэ этого ингибитора фибринолиэа, а именно.

4,0 - 3,33 = 0,67 г/л.

Заключеж е: диагностирована гиперфибриногенолитическая активность крови. Даны соответствующие рекомендации к проведению коррегируюцей терапии.

Время, затрачиваемое на осуществление способа, равно 20 мин, что в 9 раз быстрее способа-прототипа.

Формула изобретения

Способ определения гиперфибриногенолитической активности крови путем регистрации фибриногена в исследуе мой пробе, отличающийся

1469468

Таблица 1

S,Ç3

6,22 рикогемо- литическая актмвиоств крови к

° Ф е таблйца 2 рецлвгаемый способ посо осе ой о кой

Ости олыче ство зирова го фыбыогеиа раапица г/л

О,В9

ГипврФибрииогеиолитмческая вктивМ

° I

М и

° Ф

1,ЗЭ

0,89

1178

S,3

1,1

67

22

Со

2 э

10 l2

Поввюеимая

Норма

Поваивмиая

Норма

П р и и е ч а и и е: Ф проб ваятм ив табл.1.

Но способу-прототипу увеличевие активиости ливиса вмявляется ке всегда в сравмекии с ааявляевевю способом.

В примере 3 ивблмлается заваюеиие активиости ливиса Ло 672 по способупрототипу Ilo сравиеяаю с преллагаезаи способом 0,89 r/ë. В то Время как в . примере 10 активиоств ливиса ио спо сову-прототипу равка Сог в по ваявляемому способу вктмвиостъ такие вмсокая и рввиа 5,3 Г/л.

Составитель Т.Ковалева

Техред М.Дидык

Редактор И.Бандура

Корректор Л.Пилипенко

Заказ 1355/5? Тираж 788 Подпис ное

ВНИИДИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35 ° Рауаская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул. Гагарина, 101 г 6,66

3 О,СС

С О,o

5 311

6 5,ЗЭ

1,ÇÝ

8 7,99

9 10,65

1о 2,0

11 3 55

12 9

7,99

1,33

2,0 6,2 в,вв

2,22

9,77

17, 32

7,99 с,о

10 21

1,ЗЗ

О,В8 г,о

Э,11

$,55

0 89

1,78

6,67

S 99 о,с5

1 11

«и» н

ы

М