Штамм бактерий viвriо сноlеrае еlтоr ogawa - продуцент внеклеточной нейтральной протеазы

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к получению штаммов-продуцентов ферментов. Цель изобретения - получение штамма Vibrio cholerae eltor Ogawa KM-171(P2940) - продуцента внеклеточной нейтральной протеазы , обладающего более высокой активностью. Штамм получен путем селекции бактерий, способных к биосинтезу холерной протеазы. Штамм бактерий Vibrio cholerae eltorP2940 депонирован в коллекции музея живых культур Всесоюзного научно-исследовательского противочумного институ-i Микроб под № 171. Культу рал ьные свойства: на плотных питательных средах растут в виде прозрачных круглых колоний с ровными краями. В жидких средах вызывают равномерное помутнение, на поверхности пленку. Физиологические свойства: оксидазоположительные, ферментируют и окисляют глюкозу до кислоты без газа, не ферментируют лактозу, ферментируют маннит , крахмал,относятся к 1 группе Хейберга, имеют декарбоксилазу лизина и орнитина, не растут в 1 % пептонной воде с добавлением 7 и 10 % хлорида натрия, обладают протеолитической активностью. Агглютинируются холерными диагностическими сыворотками 0, Огава и не агглютинируются сыворотками Инаба. Лизируются холерными бактериофагами эльтор, ХДФ 3.4,5 и не лизируются классическим холерным бактериофагом . Активность внеклеточной нейтральной протеазы Vibrio cholerae eltor P2940 в ферментсодержащем надосадке составляет 6,6 ед/мл (ГОСТ 202642-74) или 105 усл. ед. на 1 мл культуральной жидкости, что в 44 раза выше ранее применявшегося Vibrio eltor Р9899(0,15ед/мл). Штамм стабильно сохра- - няет в течение 4 лет ферментативную активность . Ё ел

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 С 12 N 9/52, 1/20

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4815125/13 (22) 16.04.90 (46) 15.04.92. Бюл. N 14 (71) Всесоюзный научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" (72) Т,В,Бугоркова, Ю,Ю.Елисеев, А.К.Адамов и Н.B.Ìàéîðîâ (53) 577.15(088,8) (56) Авторское свидетельство СССР

М 1280008, кл. С 12 N 9/00, 1986.

Езепчук Ю,В. Молекулярные основы патогенности бактерий, М.; Наука, 1977, с.

161 — 171, (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ VIBRIO CHOLERAE

ELTOR OGAWA — ПРОДУЦЕНТ ВНЕКЛЕТОЧНОЙ НЕЙТРАЛЬНОЙ ПРОТЕАЗЫ (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к получению штаммов-продуцентов ферментов, Цель изобретения — получение штамма ИЬг!о

cholerae eltor Ogawa КМ-171(Р2940) — продуцента внеклеточной нейтральной протеазы, обладающего более высокой активностью. Штамм получен путем селекции бактерий, способных к биосинтезу хо-. лерной протеазы, Штамм бактерий Vibrio

cholerae eltorP2940 депонирован в коллекции музея живых культур Всесоюзного научно-иссИзобретение относится к микробиологии и может быть использовано для получения протеазы холерного вибриона.

Известен штамм Escherichia coli QD

5003 T — 1, используемый для получения протеазы холерного вибриона с активностью

2,6 условных единиц.

„„Ы2„„. 1726515 А1 ледовательского противочумного институ

"Микроб" под N 171. Культуральные свойства: на плотных питательных средах растут в виде прозрачных круглых колоний с ровными краями. В жидких средах вызывают равномерное помутнение, на поверхности пленку. Физиологические свойства: оксидазоположительные, ферментируют и окисляют глюкозу до кислоты без газа, не ферментируют лактозу, ферментируют маннит, крахмал, относятся к 1 группе Хейберга, имеют декарбоксилазу лизина и орнитина, не растут в 10 ь пептонной воде с добавлением 7 и 10 % хлорида натрия. обладают протеолитической активностью. Агглютинируются холерными диагностическими сыворотками О, Огава и не агглютинируются сыворотками Инаба, Лизируются холерными бактериофагами эльтор, ХДФ 3,4,5 и не лизируются классическим холерным бактериофагом, Активность внеклеточной нейтральной протеазы Vibrio choierae eltor Р2940 в ферментсодержащем надосадке составляет 6,6 ед/мл (ГОСТ 202642 — 74) или 105 усл. ед. на

1 мл культуральной жидкости, что в 44 раза выше ранее применявшегося Vibrio eltor

Р9899 (0,15 ед/мл). Штамм стабильно сохраняет в течение 4 лет ферментативную активность, Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту является штамм Vibrio е!юг P-9898. образующий внеклеточную протеазу с активностью 2,5 условных единиц, Недостатком известных штаммов является низкий уровень активности внеклеточ1726515

40

50

Составитель Т.Мальцева

Техред М.Моргентал Корректор Н.Король

Редактор Н,Горват

Заказ 1249 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 ной холерной.протеазы, а также нестабильность активности фермента.

Цель изобретения — получение высокоактивного штамма-и родуцента внеклеточной протеазы, Штамм бактерий V.cholerae eltor Ogawa

КМ вЂ” 171 получен путем отбора чистых культур бактерий, способных к биосинтезу холерной протеазы.

Штамм депонирован в коллекции музея живых культур Всесоюзного научно-исследовательского противочумного института

"Микроб" под номером КМ вЂ” 171 (Р2940).

Штамм V,cholerae eltor Ogawa KM — 171 характеризуется следующими признаками, Культурально-морфологические признаки, Подвижные, слегка изогнутые палочки, спор и капсул не образуют, грамотрицательные.

На плотном агаре образуют гладкие, круглые, прозрачные с ровными краями колонии диаметром 2 — 2,5 мм. В жидких средах вызывает равномерное помутнение, образует на поверхности пленку.

Физиологические признаки. Оксидазоположительный, относится к 1 группе Хейберга, ферментирует глюкозу до кислоты без газа, ферментирует маннит, не ферментирует лактозу, декарбоксилирует лизин и орнитин, не растет в 1 -ной пептонной воде с добавлением 7 и 107 хлорида натрия.

Агглютинируется холерными сыворотками

О, Огава, не агглютинируется сывороткой

Инаба, Лизируется холерным бактериофагом

5 эльтор, ХДФ 3, ХДФ 4, ХДФ 5, лизируется холерным бактериофагом.

Пример. Культуру штамма V, cholerae

eltor 0gawa КМ вЂ” 171 высевают в 1/-ную пептонную воду, рН 7,6 в дозе 10 кл/мл и

10 выращивают на качалке при 30 С 18 ч. Отделение клеток из культуральной жидкости проводят центрифугированием при 6000 g.

Активность протеазы штамма

Кcholerae eltor Ogawa КМ вЂ” 171 составляла

15 6,6 ед AC/мл, а штамма Кcholerae eltor

Р2940 — 0,15 ед. АС/мл, т,е. в 44 раза выше, чем у прототипа, Штамм Кcholerae eltor Ogawa КМ-171

20 стабилен при хранении.

Использование штамма бактерий

V.cholerae eltor Ogawa KM — 171 возможно для получения очищенных препаратов внеклеточной нейтральной протеазы для изуче25 ния их роли в иммунитете при холере и создания на их основе противохолерных вакцин.

Формула изобретения

Штамм бактерий Vibrio cholerae eltor

30 Ogawa КМ-171 — продуцент внеклеточной протеазы.