Штамм бактерий sеrrатiа маrсеsсеns - продуцент хитиназы

 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и представляет собой новый штамм бактерий Serratia marcescens. продуцирующий хитиназу хитодекстриназа, ,4-/3 (2-ацетамидо-2- дезокси-Д-глюкозид) гликаногидролаза (К.Ф.3.2.1.4.), которая может быть использована для биоконверсии хитинсодержащих отходов в белок одноклеточных, борьбы с насекомыми и патогенными грибами, вредителями сельскохозяйственных растений, в лабораторной практике при количественном определении хитина в составе клеточной стенки грибов. Цель изобретения - получение штамма Serratia marcenscens, проявляющего более высокий уровень хитиназной активности в культуральной жидкости . Полученный методом естественного рассева штамм Serratia marcescens ВКПМ- 4993 (41-10) обладает хмтиназной активностью 314-362 ед/ил, 604-695 мкмоль N-АГА мг белка ч . что в 7-9 раз превышает активность известного продуцента. 1 табл. и с

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

<я >s С 12 N 9/42, 1/20

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР г 008!3 2

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4803895/13 (22) 05.02.90 (46) 30,04.92, Бюл, N 16 (71) Казанский государственный университет им. В.И.Ульянова-Ленина (72) Д.В,Юсупова, О.В.Порфирьева. P.Á.Соколова и А.З.Дмитриева (53) 663.15(088.8) (56) Чигалейчик А.Г., Пириева Д.А., Рылкин

С.С. Хитиназа Serratia marcescens ВКМ В851. — Прикладн. биохим. и микробиол. Т,XII, 1976, вып.4, с.581 — 586.

Monreal J„Reese Е.T, The chitinase of

Serratia marcescens. — Can.J.Microb. 1969, 15, р.689-696. (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ SERRATIA

MARCESCENS — ПРОДУЦЕНТ ХИТИНАЗЫ (57) Изобретение относится к микробиологической промышленности и представляет собой новый штамм бактерий Serratia

Изобретение относится к микробиологической промышленности и представляет собой новый штамм бактерий Serratia

marcescens ВКПМ В-4993 (41 — 10), продуцирующий высокоактивную внеклеточную хитиназу (хитодекстриназа, поли(1,4Р (2-ацетамидо-2-дезокси-Д-гл юкозид)) гликаногидролаза, К.Ф.3.2.1,4,), которая может быть использована для биоконверсии хитинсодержащих отходов в белок одноклеточных дрожжей, борьбы с насекомыми и патогенными грибами, вредителями сельскохозяйственных растений, в лабораторной практике при количественном определении хитина с составе клеточной стенки грибов и других биологических обь„„ Ы„„1730146 А1

marcescens, продуцирующий хитиназу хитодекстриназа, поли(1,4- Р (2-ацетамидо-2дезокси-Д-глюкозид)) гликаногидролаза (К,Ф.3.2.1.4.), которая может быть использована для биоконверсии хитинсодержащих отходов в белок одноклеточных, борьбы с насекомыми и патогенными грибами, вредителями сельскохозяйственных растений, в лабораторной практике при количественном определении хитина в составе клеточной стенки грибов. Цель изобретения— получение штамма $егratia marcenscens, проявляющего более высокий уровень хитиназной активности в культуральной жидкости, Полученный методом естественного рассева штамм Serratia marcescens BKllM4993 (41 — 10) обладает хитиназной активностью 314 †3 ед/ил, 604 †6 мкмоль

N ÀÃÀ мг белка ч . что в 7 — 9 раз превышает активность известного продуцента.

1 табл. ектов, для разрушения клеточной стенки грибов.

Цель изобретения — получение штамма

Serratia marcescens. проявляющего более высокий уровень хитиназной активности в культуральной жидкости.

Штамм получают методом рассева исходного музейного штамма Ser. marcescens

41 на агаризованную питатетельную среду, содержащую хитин, с последующим отбором колоний с наибольшей хитиназной активностью. Штамм депонирован в коллекции Центрального музея промышленных микроорганизмов института ВНИИгенетика. коллекционный номер ВКПМ В-4993.

1730146

-АГА — N — ацетил — Д глюкозамин

Для получения хитиназы штамм Serratia

marcescens ВКПМ В-4993 (41-10) выращивают на среде следующего состава, г/л:

Коллоидный хитин 10.0

К2НРО4 . ЗН20 4.0 5

Mg S0q 7HzO 0.9

Дрожжевой экстракт 0.5 рН среды 8,5.

Штамм Ser. marcescens 41-10 имеет следующие характеристики. 10

Морфологические признаки. Клетки палочковидные размером 1,5 — 2.0 х 0,8—

1,0 мкм, одиночные подвижные. граиотрицательные.

Культуральные признаки и физиологи- 15 ческие свойства. На MllA через 24 ч роста колонии блестящие, гладкие, ярко-красные, выпуклые, с ровным краем, диаметром 1,5—

2,0 мм. На МПБ — равномерная муть. на картофеле — блестящий красный налет, Мо- 20 локо свертывает, но не пептонизирует,Желатин разжижает медленно, Ферментирует с образованием кислоты глюкозу, сахарозу. мальтозу, сорбит, ионизит, маннит, салицилат. Не расщепляет мо- 25 чевину. Сероводород. индол не образует.

Реакция Фогес-Проскауэра положительная. реакция с метил-рот отрицательная, П рототроф.

Оптимальная температура роста 28 — 30

30 С, рН среды 7,4 — 7.6.

Пример 1, Получение штамма с повышенной хитиназной активностью.

Исходный музейный штамм N 41 выращивают на мясопептонном агаре в течение 35

1 сут при температуре 30 -0,1 С, Выросшие клетки смывают 0.5%-ным физиологическим раствором и рассеивают на чашки

Петри с агазированной средой, содержащей хитин. из расчета 200-300.микробных 40 клеток на 1 чаш.ку. Посевы выдерживают в термостате в течение 6 сут при температуре

30 0,1 С, Вокруг колоний, выделяющих хитиназу, образуется прозрачная зона в результате расщепления хитина в среде. Коло- 45 нии с наибольшей зоной отсевают в пробирки с МПА и проводят сравнительное изучение хитиназной активности отобранных штаммов.

Наибольшей хитиназной активностью обладает штамм 41-10, В таблице показана хитиназная активность различных штаммов Serratia

ma rcescens.

Пример 2. Использование штамма в качестве продуцента хитиназы.

Подготовка посевного материала.

Культуру Sec. marcescens 41-10 выпращивают в течение 1 сут в пробирках со скошенным мясопептонным агаром при 30 С.

Выросшие клетки смывают 0,5%-ным физиологическим раствором. Полученный посевной матерал засевают в 1-литровые колбы с

200 мл питательной среды из расчета 0,05 оптических единиц (Дгвл) на 1 мл среды и выращивают на качалке (200 об./мин-1) в оптимальных для образования хитиназы условиях:

Исходный рН среды 8,5

Температура, C 30 0,1

Время выращивания, ч 96 †1

Затем бактериальные клетки отделяют центрифугированием при 6000 g 20 мин, В надосадочной жидкости определяют хитиназную активность, Надосадочную жидкость используют в качестве источника хитиназы.

Через 96 — 100 ч культивирования на среде с хитином хитиназная активность в культуральной жидкости достигает 314 — 362 кд. на 1 мл, 604 — 692 ед. — на 1 мг белка, что соответствует 70-80 мг освобожденного за

1 ч инкубации N-ацетил-Д-глюкозамина в расчете на 1 мл культуральной жидкости.

Хитиназная активность штамма 41 — 10 превышает хитиназную активность известных штаммов (таблица). Она в 16 — 18 раз выше таковой штамма ВКМВ-851, в 7 — 9 раз — штамма 0MB 1466, широко используемого для получения хитиназы Serratia

marcescens за рубежом, Формула изобретения

Штамм бактерии Serratia marcescens

ВКПМ В-4993 — продуцент хитиназы.