Способ прогнозирования течения острых распираторных инфекций у детей раннего возраста

 

Изобретение, относится к педиатрии и может быть использовано для прогнозирования течения острых респираторных инфекций у детей раннего возраста. Цель - повышение точности способа. Способ осуществляется следующим образом: в пуповинной крови ребенка и в его периферической крови на 4-й день жизни определяются количество лейкоцитов с подсчетом содержания форменных элементов, и абсолютное количество Тту и ТТч лимфоцитов с определением их соотношения ТТу/ТТч При количестве ТТу менее 0,613 ± 0,138 х 109/л и соотношении Тту/ТТч менее 1,64 ± 0,48 в обоих анализах прогнозируется риск развития частых острых респираторных заболеваний в возрасте до 1 года. При определении этих же параметров у тех же детей в возрасте старше 1 года и до 2,5 лет, в случае сохранения указанных параметров нижеприведенных значений прогнозируется сохранение риска развития повторных ОРВИ сроком на 6 мес, а при их нэрастании и одновременном превышении ими указанных значений прогнозируется уменьшение степени риска. Предложенный способ повышает достоверность прогноза 3 табл. чх Ё

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 G 01 N 1/28, 33/48

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4776318/14 (22) 02.01.90 (46) 15.08.92. Бюл. N 30 (7 1) Ленинградский государственный институт усовершенствования врачей им. С.М, Кирова (72) А.Б. Кауиайнен (56) Чернина Л.М. Иммунологические аспекты острых воспалительных заболеваний респираторного тракта у детей раннего возраста. — Педиатрия, М 9, с.105-106. (54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ ОСТРЫХ РЕСПИРАТОРНЫХ ИНФЕКЦИЙ У ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА(57) Изобретение относится к педиатрии и может быть использовано для прогнозирования течения острых респираторных инфекций у детей раннего возраста. Цель-повышение точности способа. Способ осуществляется следующим образом: в пупоИзобретение относится к медицине и может быть использовано в педиатрии.

Известен способ прогнозирования частоты заболеваний острыми респираторными инфекциями (ОРИ) в первом полугодии жизни у детей. основанный на вычислении прогностического коэффициента по данным анамнеза и исследования крови беременной и новорожденного.

Недостатками способа являются сложность, необходимость в дородовом обследовании беременной, невысокая достоверность, обусловленная неизбежным субъективизмом при сборе анамнеза, а также крат„„ 0 „„1755101 А1

2 винной крови ребенка и в его периферической крови на 4-й день жизни определяются количество лейкоцитов с подсчетом содержания форменных элементов, и абсолютное количество Tzy и Т ч лимфоцитов с определением их соотношения ТтУ!Т ч. При количестве Т У менее 0,613 + 0,138 х 10 /л и соотношении Try/TTu менее 1,64 0,48 s обоих анализах прогнозируется риск развития частых острых респираторных заболеваний в возрасте до 1 года. При определении этих же параметров у тех же детей в возрасте старше 1 года и до 2,5 лет, в случае сохранения указанных параметров нижеприведенных значений прогнозируется сохранение риска развития повторных ОРВИ ) сроком на 6 мес. а при их нэрастании и одновременном превышении ими указанных значений прогнозируется уменьшение степени риска. Предложенный способ повышает достоверность прогноза. 3 табл. ковременность прогноза, ограниченного первым полугодием жизни, Цель изобретения — упрощение известного способа, повышение его достоверности, сокращение сроков, необходимых для проведения прогноза, а также увеличение срока прогнозирования до 1 года жизни.

Поставленная цель достигается определением содержания лимфоцитов в пуповинной крови новорожденного и в его периферической крови на 4 день жизни с определением количества теофиллинустойчивых (Тту) и теофиллинчУвстви1ел ьных (Т ч) лимфицитов и вычислением соотношения

Тту и снижении Тту!Туч в обоих анамнезах

1755101 периода новорожденности прогнозируется возможность развития частых ОРИ в возрасте до 1 года;

Известно, что у детей с частыми ОРИ, формирующими группу так называемых "часто болеющих детей",(ЧБД), наиболее характерные изменения в иммунной системе заключаются в уменьшении содержания Тактивных клеток и в снижении соотношения

В.

T»IÒT (субпопуляций, осуществляющих соответственйб Ме*лперную и супрессорную функции), причем изменения их содержания выявляются как на фоне ОРИ, так и в течение длительного времени после выздоровления, .Для решения этого вопроса нами проводилось обследование новорожденных с определением указанных параметров (TaK

Тту, Ттч) и последующее наблюдение за ними до возраста 3 лет с повторными иммунологическими обследованиями. Всего было обследовано 320 новорожденных — 220 от нормально протекавшей беременности (! гр.) и 100 — от беременности с токсикозами

l1 половины (2 гр.). Результаты определения содержания субпопуляций Т-лимфоцитов и их соотношения представлены в табл,1.

Как видно у детей I rp, содержание субпопуляций лимфоцитов при 1 и 2 обследованиях не менялось, а соотношение Тту!Ттч несколько снижалось, У детей 2 группы в пупоаинной крови содержание обеих субпопуляций было повышенным, вероятно зй счет антигенной стимуляции и гипоксии, но соотношение T»/Ттч менялось незначительно. Однако к 4 дню жизни содержание субпопуляции нормализовалось, а T»ITT÷ стремилось к норме. Эти средние значения с недостоверными колебаниями сохранились у большинства обследованных детей на протяжении первых 3 лет жизни.

При последующем наблюдении за обследованными детьми выяснилось, что частые ОРИ на 1 году жизни отмечены у 68 из

320 обследованных детей (21,3 ф,). Критериями частых ОРИ были: до 1 года 4 и более

ОРИ в год, 1 — 3 года 6 и более ОРИ в год, 54 из 68 детей до 1 года жизни находились дома и лишь 14 посещали детские дошкольные учреждения (ДДУ) с 6-9 мес, При ретроспективном анализе результатов . иммунблогического обследования часто болеющих детей в периоде новорожденности у 58 из них (85,3;4) было найдено достоверное снижение количества T»/TT как в пуповинной крови, так и на 4 день жизни.

Достоверных различий в их содержании у детей 1 и 2 групп не отмечалось, что позволило обьединить эти группы.

Отсутствие достоверных различий в содержании приведенных параметров при 1 и

2 обследованиях позволили объединить их вместе. Характерно, что ни в одном случае

5 оба приводимых параметра одновременно не превышали средних значений, отмечаемых у этих детей в период новорожденности (т,е. Тту/Ттч-1,64 +0,048, Т»-0,613+.0,138х х 10 /л), Все это явилось основанием для

10 введения указанных параметров в качестве ограничений в формулу изобретения.

При повторных иммунологических обследованиях, проведенных у 62 из 68 часто болеющих детей в возрасте 12,18 и 24 мес.

15 (+ 1 мес.) не ранее чем через 1 мес, после перенесенных ОРИ, выяснилось, что у большинства из них количество Тту/Ттч и Тту повышалось, причем во всех случаях превышение ими параметров периода ново20 рожденности непосредственно предшествовало уменьшению частоты ОРИ (табл.3), У 16 детей из 58 содержание Тту и

T»/Ттч за время наблюдения не повысилось, и частота ОРИ не снизилась (8,4 +.2,3

25 в год).

Выявленная зависимость между повышением указанных иммунологических показателей и частотой ОРИ явилась основанием для введения в лечение этих детей

30 иммуностимуляторов, 8 детей группы ЧБД с

18 мес. получали нуклеинат натрия (НН)—

0,1 х 3 р, в день — 2 курса по 10 дней с интервалом 2 недели, Через 2-3 недели после 2 курса НН отмечалось достоверное по35 вышение содержания Тту и Тт/Ттч (соответственно до 1,011 + 0,168 х 10 /л и

2,20 + 0,17).

Частота ОРИ после этого снизилась с

8,2 "-2,3 до 3,2 +0,8 раз в год(в пересчете

40 на год), P < 0,05, Это также свидетельствовало о роли снижения количества Т» и нарушении соотношения Тту!Ттч в возникновении повторных ОРИ у детей, Что касается биологического смысла

45 приводимых параметров, то количество .Тактивных лимфоцитов и особенно Тту, в значительной степени отражающих содержание Т-хелперов, является одним иэ важнейших параметров иммунной системы, 50 во многом определяющих резистентность против инфекции, Количество Тту и Ттч лимфоцитов может варьировать в различных пределах, но соотношение Тту/Ттч, называемое также иммунорегуляторным индексом, 55 является наиболее информативным показателем, отражающим хелперную активность лимфоцитов. Под влиянием различных неблагоприятных факторов, действующих во время беременности, количество Т» и

1755101

Тту/Ттч могут меняться, отражая изменение активности иммунной системы. На этом выявлении индивидуальных темпов восстановления сниженных при рождении функций и основан предлагаемый способ.

Следует отметить, что всего из 320 обследованных новорожДенных группу ЧБД составило 68 детей, причем у 10 из них указанные иммунологические параметры были выше приведенных. Вероятно, повторные

OP у этих детей были обусловлены иными механизмами (патологией носоглотки, снижением функций нейтрофилов и пр,), Предлагаемый способ позволяет выделять из группы ЧБД тех детей, у которых развитие

ОРИ обусловлено конкретными иммунными механизмами, что открывает возможности для проведения патогенетически обоснованной терапии.

Пример 1. Ребенок Н.С., родился 4 июля 1988 r. В родильной комнате в стерильную силиконизированную пробирку с

75 ед. гепарина было взято 5 мл крови из пуповины. Было подсчитано количество лейкоцитов в камере Горяева (7,46 х 10 /л) и сделан мазок крови с окраской по Романовскому-Гимза с подсчетом количества лимфоцитов (32 ) и вычислением их абсолютного числа (2,388х10 /л). 1 мл крови из пробирки развели в 2 раза средой 199 (рН

7,2 — 7,4) с 5 эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС), смесь подслоили тонкой пипеткой под 2 мл смеси фиколл-верографин с плотностью 1119 г/см . Пробирку с содерз жимым центрифугировали 40 мин при 360g беэ охлаждения. Кольцо лимфоцитов на границе градиента плотности собрали пипеткой, перенесли в силиконизированную пробирку и дважды отмыли средой 199 в течение 10 мин при 120g. Подсчитали количество клеток в 1 мл в камере Горяева и добавлением среды 199 довели концентрацию до 2 х 10 мл. 0,1 мл этой смеси мешали с 0,05 мл ЭТС, добавили 0,1 мл 1 эритроцитов барана и в силиконизированной пробирке выдержали при 4 С в течение 1 ч, Затем процесс фиксировался добавлением

5 капель 50 / -ного раствора глютаральдегида. Иэ смеси приготовили мазки, высушили, фиксировали метанолом и окрасили по Романовскому. Препарат исследовали под малым увеличением, Было подсчитано 100 лимфоцитов как с эритроцитами, так и без.

Розеткой считались лимфоциты, присоединившие 4 и более эритроцита, Их количество составило 48 (1,146 х 10 /л). 3ro отразило общее количество Т-лимфоцитов.

Для определения теофиллинустойчивых Т-лимфоцитов (Ттфф к смеси лимфоцитов концентрации 2 х 10 мл добавили 0,1 wl

ЭТС и 0,1 мл 0,5%-ного раствора теофилли на. Смесь выдержали при 37 С 1 ч, добавили к ней 0,1 мл 1 -ной взвеси эритроцитов барана, центрифугировали при 2009 5 мин и

5 выдержали 1 ч при 4 С. Количество лимфоцитов, образовавших розетки, составило

25% от общего количества лимфоцитов (от

2,388 х 109/л), т.е. 0,597 х 10 /л (менее ограничения, приведенного в формуле, т,е. 0,613

10 х 10 /л). Количество теофиллинчувствитель9 ных клеток (Т,фч) определялось по разности

Тобщее - Ттфу = 1,146 - 0,597 = 0,549 х 10 /л, 9

Соотношение Ттфу,Ттф4 = 0,597:0,549 = 1,09 (менее 1,64).

15 На 4 день жизни утром из пятки этого же ребенка было получено 1 мл крови в стерильную пластиковую пробирку обьемом 1,5 мл, содержащую 15 ед. гепарина, Последующие манипуляции по подсчету об20 щего количества лейкоцитов, приготовлению и окраске мазков крови, выделению лимфоцитов, определению количества Тлимфоцитов, Ттфу, Ттфч полностью аналогичны проведенным с пуповинной кровью, 25 Количество лейкоцитов составило 12,200 х к10 /л, количество лимфоцитов — 32, (3,904х х 10 /л, Т-лимфоцитов — 1,054 х 10 /л, Тт у — 0,590, Ттфч = 1,054 - 0,590 = 0,464 х 10 .

Соотношение Ттфу!Ттфч = 0,590:0,464 = 1,27, 30 На основании того, что значения Т,фу и соотношения Ттфу/Ттф в обоих анализах были ниже приведенных в формуле ограничений, был дан неблагоприятный прогноз по развитию повторных ОРИ. С 5 до 12 мес. ребе35 нок перенес 5 ОРИ, что подтвердило прогноз.

Пример 2, Ребенок П.П, В пуповинной крови: Тту — 0,776 х 10 /л (> 0,613), Ттч—

0,145 х 10 /л, Тту/Тсч — 5,35 (> 1,64). На 4

40 день: Тту 1,280 х 10 /л (0,613), T» — 0,280 х х10 /л, Тту/TT> = 4,57 (1,64). На основании превышения содержания Т» и Тту/T» ограничений, приводимых в формуле изобретения, был дан благоприятный прогноз по

45 развитию ОРИ. На протяжении первых 12 мес. жизни перенес ОРИ 2 раза, течение— без осложнений. flp обследовании в 12 мес. Тту — 1,329 х 10 /л (> 0,613), T» — 0,306х х 10 /л, T»/T» = 4,3 1,64). Благоприятный

50 прогноз подтвержден, С 16 мес. посещает детские ясли: в течение 20 мес. (с 16 до 36 мес.) перенес ОРИ 6 раз (3,6 раз в год, 6 раз в год), течение неосложненное. В приводимом примере высокие уровни Т» и Тту/Т» в

55 периоде новорожденности позволили дать благоприятный прогноз по заболеваниям

ОРИ, а высокие уровни в 12 мес. — подтвердить его, На основании этого было рекомендовано посещение детских яслей, где ребенок болел редко.

1755101

Количество субпопуляций Т-лимфоцитов и их соотношение у новорожденных

H p и м e p 3, Ребенок М.В, В пуповинной крови: Try 0,565 х 10 л (< 0,613), Ттч—

0,560х10 /л, Т,у Ттч=1,0(<1,64). На 4день;

Тту — 0,580 х 10 /л (< 0,614), Ттч — 0,342 х х10 /л, Тту/Ттч = 1,48 (< 1,64). На основании сниженных по сравнению с ограничениями количеством Тту и Тту/Ттч был дан неблагоприятный прогноз — повышенный риск развития частых ОРИ. Ребенок не посещал ясли,. однако до 12 мес, перенес 5 ОРИ, на основании чего был отнесен в группу ЧБД. В 12 мес.: Тту 0,923 х 10 /л (> 0,614), Ттч 0,241 х х10 /л, Тту!Ттч = 3,8 (> 1,64), На основании превышения иммунологическими показателями установленных ограничений было установлено улучшение прогноза — ожидаемое снижение частоты ОРИ. В следующие

6 мес. (до 12 мес.), находясь дома, перенес

2 ОРИ(т,е. 4,0 в пересчете на год). С 20 мес. посещает детские ясли, и с 20 до 36 мес, перенес ОРИ 4 раза (3,0 в пересчете на 1 год), что меньше критерия ЧБД для данного возраста. На данном примере виден. следующий положительный эффект предлагаемого способа: прогнозирование риска ОРИ в периоде новорожденности, проведенное на протяжении короткого срока (первых 4 дней жизни) на основании объективных данных, с высокой степенью достоверности, выявило риск развития частых ОРИ сроком на 1 год, что было невозможно при использовании прототипа. На основании этого были даны рекомендации отложить посещени»

ДДУ до 1 года жизни, т,е, посещение их и учащение контактов с инфекциями способствовало бы более частым заболеваниям, 5 препятствующим восстановлению функций иммунной системы, Несомненно, что в этом случае ребенок оставался бы в группе ЧДБ большее время, что увеличило бы число дней временной нетрудоспособности роди10 телей по уходу.

Повторное иммунологическое обследование в 12 мес., проведение которого н@ позволяет осуществить прототип, выявило снижение степени риска ОРИ и позволиле

15 рекомендовать посещение ДДУ, в котором, несмотря на возросшее число контактов с инфекциями, частота ОРИ снизилась, Формула изобретения

Способ прогнозирования течения ост20 рых респираторных инфекций у детей раннего возраста путем биохимического исследования крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, определяют в пуповинной крови ново25 рожденного и в его периферической крови на 4 дейь жизни количество Т-теофиллинустойчивых и Т-теофиллинчувствительных лимфоцитов, их соотношение и при содержании Т-теофиллинустойчивых лимфоцитов

30 менее 0,613 +. 0,138 х 10 /л и соотношении менее 1,64 +. 0,48 прогнозируют неблагоп.рйятное течение заболевания, Таблица 1

1755101

Таблица 2

Количество Тху, Ттч и соотношение Тт /Т ч у часто болеющих детей в периоде новорожденности

Таблица 3

Средняя частота ОРИ у обследованных детей до и после повышения содержания Тт и T /Тч

* — в пересчете на год жизни

Составитель И.Мелемука

Техред М.Моргентал Корректор П.Гереаи

Редактор Ю.Середа

Заказ 2885 Тираж . Подписйое

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101