Способ определения функционального состояния иммунокомпетентных клеток

 

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии и аллергологии, и может быть использовано при контроле эффективности терапии при различных иммунных нарушениях. Цель изобретения - упрощение и снижение травматичности способа. Цель достигается тем, что пробу цельной крови пациента инкубируют в им-% мунологических планшетах с неспецифичеекими митогенами или специфическими аллергенами, добавляют раствор тетрациклин гидрохлорида. После инкубации переносят суспензию клеток из лунок планшета на предметные стекла и подсчитывают в флюоресцентном микроскопе число флуоресцирующих клеток по отношению к контрольным пробам. 1 табл.

COIO3 СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я>5 G 01 М ЗЗ/533

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ в

1 (21) 4753701/14 (22) 24.07.89 (46) 30.03.93. Бюл. M 12 (71) Всесоюзный научный центр радиационной медицины AMH СССР (72) В.Г,Бебешко, А.А.Чумак, Д,А.Базыка, В.В,Талько и Ж,НлМинчейко . (56) Иммунологические методы/Под ред.

Г.Фримеля, M.: Медицина, 1987, с. 294-302. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХ КЛЕТОК (57) Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии и аллергологии, и

Изобретение относится к медицине, в частности, к иммунологии и аллергологии, может быть использовано в целях диагностики и контроля эффективности терапевтического воздействия при различных иммунопатологических состояниях.

Цель изобретения — упрощение способа при сокращении травматичности.

Указанная цель достигается тем, что у больного забирают кровь из пальца, инкубируют ее в иммунологических планшетах с неспецифическими митогенами или специфическими аллергенами, флюоресцентным зондом — раствором тетрациклина, переносят на предметные стекла, готовят мазки и подсчитывают число флюоресцирующих клеток, Способ осуществляют. следующим образом.

Кровь пациента, взятую из пальца, вносят в лунки планшета по 0.025 мл, В лунки. Ж 1805394 А1 может быть использовано при контроле эффективности терапии при различных иммунных нарушениях. Цель изобретения— упрощение и снижение травматичности способа, Цель достигается тем, что пробу цельной крови пациента инкубируют в им- мунологических планшетах с неспецифическими митогенами или специфическими аллергенами, добавляют раствор тетрациклин гидрохлорида. После инкубации переносят суспензию клеток из лунок планшета на предметные стекла и подсчитывают в флюоресцентном микроскопе число флуоресцирующих клеток по отношению к контрольным пробам. 1 табл, и» вносят раствор митогена или аллергена и инкубируют планшет при 37 С в течение 1 ч, Затем в лунки вносят раствор тетрациклина гидрохлорида B конечной концентрации

1,0-2,0х10 г/л и инкубируют при 37 С в течение 5-15 мин и переносят суспензию клеток из лунок на предметные стекла., (л

Проводят учет результатов, определяя Ы спонтанную, митоген- и аллергенезависи- Ч0 мую флюоресцентную клетку с определени- Д, ем индекса стимуляции.

Пример. У больного Н. (исследование

N. 88!431) отбираем иа пальца 0,1 мл крови

° и мй в капилляр, предварительно обработанный раствором гепарина в обычной концентрации, Кровь вносим по 0,025 мл в лунки планшета для иммунологических исследований, Вносим в контрольную лунку 0,025 мл забуференного раствора Хенкса) рН 7;4 (в опытную соответственно 0,025 мл раствора ФГА в концентрации 20 мкг/мл, а также 0.025 мл

1805394 ионизирующей радиации при аварии на

Чернобыльской АЭС (таблица).

Обнаруженная корреляция способа реакцией бласт-трансформации с + Н-тими5 диновой меткой и реакцией торможения миграции лейкоцитов позволяет рекомендовать способ для ранней оценки иммунного статуса при различных нарушениях иммунитета, /

Формула изобретения

Способ определения функционального состояния иммунокомпетентных клеток путем инкубации крови больного с неспецифи15 ческими митогенами или специфическими аллергенами, последующей регистрации результатов и подсчета индекса стимуляции по отношению к спонтанному уровню активности, о т л и ч э ю шийся тем, что, с целью

20 упрощения и снижения травматичности способа, перед регистрацией в среду вносят тетрациклин гидрохлорида в концентрации (1,0-2,0)х10 г/л и регистрируют число флуоресцирующих лейкоцитов.

Функциональное состояние иммунокомпетентных клеток у больных, пострадавших при аварии Чернобыльской АЭС

% бластов в

РБТЛ

% светящ. клеток по предлож. способ

Индуктор кле- N- исследоваточной проли- ния еаии

Индекс сти- Индекс тормоМуляции по Н жения мигратими ин ии 2

ФГА

20,7

30,5

18,0

36,8

44,8

24,2

19,5

26.3

13,5

17,8

2

4

6

8

10 г*

Кортизол

2

4

6 . 7

9

5,0

2,1

4,6

3,9

6,0

13,0

1,7

5,3

2,8

3,6

Стафилококковый антиген

9,3

13.2

16.0

12,5

10,1

17,1

25,1

18,3

2

4 раствора кортизолэ (II опыт) и 0,025 мл раствора стафилоантигена (III опыт). Планшет инкубируем в течение 60 мин при 37 С, после чего вносим в опытные и контрольные лунки по 0,02 мл раствора тетрациклина концентрации 5,0х10 г/л. Планшет инкубируем 10 мин. при 37 С, после чего каплю суспензии переносим на предметное стекло, приготавливаем мазки . Учет результатов проводим на флюоресцентном микроскопе

Л ЮМАМ Р-5 или аналогичном с использованием длины волны возбуждающего света

380 нм (фильтры ФС-1-2, БС-8-3, СЭ3-24.4) и света флюоресценции 540 нм (запирающие фильтры ЖС-18, ЖЗС-19). Определяем число флюоресцирующих зеленым светом лейкоцитов в опытных пробах, по отношению к контрольной и вычисляем индексы стимуляции — контроль 3%, ФГА — 23,5%. кортизол — 2,6%, стафилоантиген — 14,1%, соответственно индексы стимуляции — 7,83, 0,87, 4,70, Способ был применен при исследовании больных, подвергшихся воздействию с

11,6

21,6

10,4

25,8

17,4

14,6

12,3

12,4

1 1,2

10,0

0,76

1,3

0,7

3,2

2,8

2,4

5.1

3;9

2,4

2,0

2,2

36,3

61,4

32,0

63,5

71,0

42,0

38,6

30,0

17,4

21,2

0,92

8,7

4,8

12,9

7,3 .

8,0

16,8

1,0

10,8

6,4

4,0

0,86

20,7

29,5

36.5

25,2

0,66

0,56

0,74

0,60

0,40

0,62

0,78

0,64

0.88

0,80

0,93

0,92

0,95

0.84

0,87

0,75

0,80

0,98

0,88

0,95

0.93 — 0,70

0.49

0,66

0.60

0,70

1805394

Продолжение таблицы г* — коэффициент корреляц

Составитель И. Башкаев

Редактор Т.Горячева Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор, М.Керецман

Заказ 939 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101